Вакцина бцж микробиология способ получения

способ получения вакцины бцж-м для щадящей первичной иммунизации

Изобретение относится к медицине, касается способа получения вакцины БЦЖ-М для щадящей первичной иммунизации. Сущность изобретения: микробную массу культуры БЦЖ-1, выращенную на твердой картофельной среде, а затем на жидких синтетических средах, снимают, фильтруют, промывают средой высушивания, растирают в шуттель-аппарате до получения однородной массы, разводят стабилизатором до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл, которую центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 — 20 мин, после чего проводят повторно разведение надосадочной взвеси стабилизатором до конечной концентрации 0,5 мг БЦЖ в 1 мл. Вакцину разливают в ампулы и лиофилизируют. Технический результат заключается в повышении жизнеспособности вакцины в одной прививочной дозе. 3 табл.

Формула изобретения

Способ получения вакцины БЦЖ для щадящей первичной иммунизации, включающий фильтрацию микробной массы культуры БЦЖ-1, промывание средой высушивания, растирание в шуттель-аппарате до получения однородной массы, разведение стабилизатором и лиофилизацию в ампулах под вакуумом, отличающийся тем, что разведение микробной массы стабилизатором после растирания в шуттель-аппарате проводят до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл, которую центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 — 20 мин, после чего проводят повторное разведение надосадочной взвеси стабилизатором до конечной концентрации 0,5 мг БЦЖ в 1 мл.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к способам получения вакцины с уменьшенной антигенной нагрузкой, предназначенной для щадящей специфической профилактики туберкулеза.

Для уменьшения поствакцинальных осложнений при применении живой вакцины следует добиваться наибольшего разрыва между показателями эффективности и реактогенности. Для вакцины БЦЖ это прежде всего уровень содержащихся в ней жизнеспособных микробных тел, гомогенность, дисперсность, которые определяют ее реактогенность и связанную с ней частоту поствакцинальных осложнений. (Л. А. Митинская, Л.И.Котова, А.В.Козлова и др. Профилактика осложнений вакцины БЦЖ у новорожденных. Проблемы туберкулеза. — М.: Медицина, 1986 г.).

Известен способ получения вакцины БЦЖ, применяемой для специфической профилактики туберкулеза, заключающийся в том, что микробную пленку культуры клеток БЦЖ-1, выращенную на твердой картофельной среде, а затем на жидких синтетических средах, снимают, фильтруют, растирают в шуттель-аппарате, после чего разводят стабилизатором — 1,5% раствором глутамината натрия до содержания 1 мг вакцины БЦЖ в 1 мл. Разведенную вакцину разливают в ампулы и лиофилизируют под вакуумом. (Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов / Под редакцией С.Д.Дзагурова и Ф.Ф.Резепова, издательство. — М.: Медицина, 1975 г., стр. 170).

Недостатком известного способа является то, что данная вакцина предназначена для специфической профилактики туберкулеза и одна ампула препарата содержит 1 мг вакцины БЦЖ в 1 мл, что составляет 20 доз, каждая по 0,05 мг препарата в 0,1 мл. Показатель жизнеспособности вакцины БЦЖ находится в пределах 10-30 млн/мг, одна прививочная доза содержит от 500000 до 1500000 жизнеспособных клеток. Это не позволяет использовать ее для щадящей первичной иммунизации детей группы повышенного риска с отягощенным постнатальным периодом (недоношенность, перинатальная энцефалопатия, гнойно-септическая инфекция).

Целью изобретения является создание вакцины для щадящей первичной иммунизации с уменьшенной антигенной нагрузкой, содержащей 0,5 мг БЦЖ в 1 мл и обладающей высокой жизнеспособностью, гомогенностью, дисперсностью и растворимостью.

Сущность изобретения состоит в том, что в способе получения вакцины БЦЖ для щадящей первичной иммунизации, включающем фильтрацию микробной массы культуры БЦЖ-1, промывание средой высушивания, растирание в шуттель-аппарате до получения однородной массы, разведение стабилизатором и лиофилизацию в ампулах под вакуумом, разведение микробной массы стабилизатором после растирания в шуттель-аппарате проводят до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл, которую центрифугируют при 2000 об./мин в течение 15-20 мин, после чего проводят повторное разведение надосадочной взвеси стабилизатором до конечной концентрации 0,5 мг БЦЖ в 1 мл.

Использование изобретения позволяет получить следующий технический результат.

Вакцина, впервые полученная предлагаемым способом, предназначена для щадящей первичной иммунизации. Она содержит 0,5 мг БЦЖ в 1 мл, что составляет 20 доз, каждая по 0,025 мг препарата в 0,1 мл, обладает более высокими показателями жизнеспособности, гомогенности, дисперсности и растворимости.

Показатель жизнеспособности данной вакцины БЦЖ находится в пределах 20-30 млн/мг, одна прививочная доза содержит от 500000 до 750000 жизнеспособных клеток, что обеспечивает высокий уровень иммунологической активности препарата при меньшей его реактогенности и позволяет снизить частоту поствакцинальных осложнений.

Технический результат достигается за счет введения центрифугирования и проведения разведения в два этапа — до и после центрифугирования.

Способ осуществляется следующим образом.

Вакцина БЦЖ для щадящей первичной иммунизации (БЦЖ-М) представляет собой живые микробактерии вакцинного штамма БЦЖ-1, лиофилизированные в 1,5% растворе глутамината натрия. Живые микробактерии штамма БЦЖ-1, размножаясь в организме привитого, приводят к развитию длительного иммунитета к туберкулезу.

Для получения вакцины БЦЖ-М используют штамм БЦЖ-1, который должен отвечать следующим требованиям:
1. Состоять из жизнеспособных микробактерий штамма БЦЖ-1.

2. Не содержать вирулентных микробактерий.

3. Не содержать посторонней микрофлоры.

4. Обеспечивать выпуск вакцины БЦЖ-М с высокой протективной активностью.

5. Образовывать у 90-95% вакцинированных БЦЖ-М детей на месте прививки рубчик размером 2-10 мм в диаметре.

6. Вызывать длительную (3-5 лет) чувствительность к туберкулину и минимальное число неблагоприятных реакций у привитых (не более 0,06% лимфаденитов после вакцинации).

Высев из ампул со штаммом БЦЖ-1, полученным из ГИСК им. Л.А. Тарасовича, осуществляют на картофельную среду Павловского. На 20-25 сутки выращивания в термостате при (38 1) o C культуру БЦЖ-1 пересевают на жидкую среду Вакенгут, Козловской и Лещинской (ВКЛ) — матриксы N 1. Выросшую на 6-10 сутки на поверхности жидкой среды культуру БЦЖ-1 переносят ракеткой на поверхность свежей питательной среды ВКЛ — матриксы N 2.

Матриксы N 2 на 6-8 сутки роста используют для засева пленочным методом среды ВКЛ в производственных колбах, емкостью 0,5 л.

Вакцину изготавливают из культуры БЦЖ-1 11-ти суточного возраста, отбирая культуру с сухими морщинистыми пленками, покрывающими всю поверхность среды. Сглаженные, влажные и растущие отдельными островками пленки не пригодны для изготовления вакцины. Тщательно отобранную культуру БЦЖ-1 (12-15 колб) фильтруют в один аппарат для фильтрации. Микробные тела отделяют от питательной среды, промывают средой высушивания и охлаждают в холодильнике в течение 30 минут. Во время изготовления вакцина должна быть защищена от действия света. (А.И. Тогунова. Иммунизация живой вакциной против туберкулеза. — М.: Медгиз, 1960 г.).

Микробную массу растирают в бутыли с металлическими бусами в шуттель-аппарате при температуре от 10 до 18 o C в течение 20 минут при частоте 75 об. /мин до получения однородной массы. Далее микробную массу разводят стабилизатором до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл. Эту взвесь асептично переносят в стеклянные флаконы объемом 250 мл и центрифугируют при 2000 об./мин в течение 15-20 минут.

Надосадочную взвесь из флаконов асептично отсасывают и разводят средой высушивания (1,5% раствором глутамината натрия) до содержания 0,5 мг БЦЖ в 1 мл. Точность разведения проверяют по фотоэлектроколориметру. Вакцину разливают по 0,2 мл в ампулы и лиофилизируют.

Для получения концентрации 0,5 мг БЦЖ в 1 мл культуру штамма БЦЖ-1 высевают на плотную картофельную среду Павловского, выращивают в термостате 24 дня при температуре (381) o C, пересевают на жидкую среду ВКЛ — 3 матрикса N 1. Выросшую на 7 сутки на поверхности жидкой среды культуру БЦЖ-1 переносят ракеткой на поверхность свежей питательной среды ВКЛ — 6 матриксов N 2.

Матриксы N 2 на 7 сутки роста используют для засева пленочным методом среды ВКЛ в 13 производственных колбах емкостью 0,5 л — таким образом производится накопление биомассы. Тщательно отобранную культуру БЦЖ-1 (12 колб) фильтруют, промывают средой высушивания и охлаждают в холодильнике в течение 30 минут.

Микробную массу растирают в бутыли с металлическими бусами в шуттель-аппарате до получения однородной массы при температуре 10 o C в течение 20 минут при частоте 75 об. /мин. Далее микробную массу разводят стабилизатором до получения взвеси, содержащей 50 мг БЦЖ в 1 мл, центрифугируют при 2000 об. /мин в течение 15 минут, разводят средой высушивания до содержания 0,5 мг БЦЖ в 1 мл, разливают по 0,2 мл в ампулы и лиофилизируют (табл. 1).

Вакцинацию проводили зашифрованными парными сериями препарата. 50% родившихся детей прививают вакциной БЦЖ-М (0,025 мг), а другие 50% — вакциной БЦЖ (0,05 мг). Серии вакцин приготовляют из одной маточной взвеси культуры БЦЖ с дифференцированной дозировкой (парные серии). В сроки 1, 3, 12 месяцев и 2-4 года изучают местную прививочную реакцию и через 1-1,5 года — чувствительность к туберкулину (табл. 2, 3).

Таким образом, как по результатам учета местной прививочной реакции, так и туберкулиновых проб отмечают, что уменьшенная в два раза доза препарата создает тот же уровень защиты от туберкулеза, как и полная доза, при менее выраженной реактогенности.

Анализ частоты послепрививочных осложнений при вакцинации в зависимости от числа жизнеспособных особей в препарате, а следовательно в прививочной дозе, свидетельствует об уменьшении в 3,3 раза числа осложнений в виде регионарных лимфаденитов при уменьшении антигенной нагрузки препарата.

Использование вакцины БЦЖ (0,025 мг) позволяет ежегодно увеличить на 7-8% охват этой прививкой новорожденных, так как с целью профилактики поствакцинальных регионарных лимфаденитов детям группы повышенного риска с отягощенным постнатальным периодом (недоношенность, перинатальная энцефалопатия, гнойно-септическая инфекция) проводят прививку вакциной БЦЖ (0,025 мг).

Таким образом, вакцина БЦЖ с уменьшенной антигенной нагрузкой создает тот же уровень защиты от туберкулеза, как и вакцина БЦЖ; использование вакцины БЦЖ (0,025 мг) позволяет ежегодно увеличивать охват этой прививкой новорожденных при сниженной в 3,3 раза частоте поствакцинальных осложнений.

Источник

Способ получения вакцины против туберкулеза

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Задачей изобретения является получение нового типа неживой бесклеточной (молекулярной) вакцины. Способ включает культивирование микобактерий из штамма БЦЖ, выделение двух фракций — цитоплазматической и фракции клеточных оболочек. Фракцию клеточных оболочек конъюгируют на целлюлозной матрице при соотношении 1: 10 (по массе) в присутствии треххлористого хрома, затем добавляют цитоплазматическую фракцию до содержания белка 1,5-2 мг/мл. Способ позволяет получить экологически чистую вакцину, обладающую высокой иммуногенностью. 3 табл.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к способам получения вакцинных препаратов, и вакцина может быть использована для профилактики и оздоровления ферм от туберкулеза крупного рогатого скота в сочетании с вакциной БЦЖ.

Известен способ получения вакцины против туберкулеза, включающий культивирование микобактерий вакцинного штамма БЦЖ (BCG — Bacillus Calmette-Guerin) на питательной среде с последующим сбором микробных клеток, ресуспендированием и леофильным высушиванием. Живая вакцина БЦЖ достаточно эффективна и применяется для профилактики и оздоровления ферм крупного рогатого скота. Применение вакцины БЦЖ в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий позволяет сократить сроки оздоровления ферм с меньшими материальными затратами, однако при этом создаются трудности в диагностике туберкулеза (длительные поствакцинальные реакции на взрослом скоте). В связи с этим вакцину БЦЖ применяют только на новорожденных телятах (наставление «По применению вакцины БЦЖ при туберкулезе крупного рогатого скота» от 26.02.1990). Общий недостаток живых вакцин заключается в том, что они представляют собой малоконтролируемую смесь с большим количеством балластных, в том числе токсичных, компонентов из микробных клеток с высокими аллергизирующими свойствами.

Известен способ получения корпускулярной иммуногенной фракции микобактерий туберкулеза (см. авторское свидетельство 1338859 от 23.09.87, БИ 35). Испытание на морских свинках корпускулярной иммуногенной фракции показало ее выраженное протективное действие. Однако препарат не нашел применения в ветеринарной практике.

Задачей изобретения является получение нового типа неживой бесклеточной (молекулярной) экологически чистой вакцины против туберкулеза животных, обладающей иммуногенностью и протективными свойствами и не осложняющей диагностику.

Задача достигается путем культивирования микобактерий из штамма БЦЖ с последующим разрушением их ультразвуком. Выделение цитоплазматической фракции осуществляют центрифугированием при 8000 об/мин. Полученную надосадочную жидкость сливают (цито-плазматическая фракция). Колориметрическим методом определяют количество белка в 1 мл раствора, а осадок растворяют в физиологическом растворе и дополнительно разрушают ультразвуком, затем центрифугируют при 15000 об/мин. Полученную надосадочную жидкость (фракция клеточных оболочек) сливают и определяют количество белка в ней, полученную фракцию конъюгируют на целлюлозной матрице при соотношении 1:10 (по массе) в присутствии треххлористого хрома. Реакционную смесь осаждают и 4-5 раз отмывают физиологическим раствором. Осадок конъюгата разводят физиологическим раствором в минимальном объеме. Определяют количество белка в 1 мл конъюгата и добавляют к нему цитоплазматическую фракцию до содержания белка в нем 1,5-2 мг/мл.

Отличительными признаками предложенного способа являются: культивирование микобактерий из штамма БЦЖ с последующим разрушением, выделяют две фракции — цитоплазматическую и фракцию клеточных оболочек, последнюю получают путем дополнительного разрушения ультразвуком и центрифугированием при 15000 об/мин, полученную фракцию клеточных оболочек конъюгируют на целлюлозной матрице при соотношении 1:10 (по массе) в присутствии треххлористого хрома, в полученном конъюгате определяют количество белка и добавляют к нему цитоплазматическую фракцию до содержания белка 1,5-2 мг/мл.

Неактивированная целлюлоза с белковыми молекулами, имеющими карбоксильные группы, способна образовывать сложные эфиры. Катализатором этого процесса служит СrСl₃, который активизирует реакцию этерификации, связывая молекулы воды.

В результате экспериментальной работы была подобрана концентрация СrСl₃ и соотношение целлюлоза:антиген. Данные приведены в таблице 1 и 2.

Результаты эксперимента показывают, что оптимальной концентрацией вводимого в раствор СrСl₃ является 25 мк-моль/л.

По результатам эксперимента выявлено оптимальное соотношение целлюлоза: антиген -10:1.

Пример 1. Получение фракций из вакцинного штамма БЦЖ.

Проводят посев вакцинного штамма БЦЖ на жидкую синтетическую среду Сотона. Вакцинный штамм культивируется в конических колбах емкостью 0,5-1,0 л при температуре 37 o С в течение 2-3-х недель. Выросшею бактериальную массу собирают и трижды отмывают стерильным физиологическим раствором, центрифугируют в течение 20 мин при 3 тыс. об/мин. Отмытую бактериальную массу ресуспендируют в стерильном физиологическом растворе из расчета 1:5 (1,0 г бактериальной массы и 5 мл физиологического раствора). Флаконы с суспензией бактериальных клеток помещают на 24 часа на шуттель-аппарат при комнатной температуре.

Суспензию бактериальных клеток подвергают ультразвуковой дезинтеграции на аппарате УЗДН-1 (22-35 кГц, 60-70 Вт/см 2 в течение 8-10 мин), полученную взвесь центрифугируют 30 мин при 8000 об/мин (см. Ходун Л.М., Цунская Н.И. Тест-система ELIZA для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота и критерии оценки результатов метода // Разработка средств и методов борьбы с туберкулезом животных: Сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ. ВНИИБТЖ, — Омск, 1990. — С. 10-24). Надосадочную жидкость собирают и используют в качестве антигенов цитоплазматической фракции. Осадок ресуспендируют в физиологическом растворе и вновь подвергают дезинтеграции в течение 30 мин. Полученную взвесь центрифугируют 30 мин при 15000 об/мин (этот параметр является оптимальным для получения фракции клеточных оболочек) и надосадочную жидкость используют в качестве антигенов фракции клеточных оболочек.

Количество белка во фракциях определяют на фотоэлектроколориметре с использованием красителя бромфенолового синего (БФС). На кружок фильтровальной бумаги диаметром 2 см, помещенный на пористый фильтр, вставленный в колбу с отсосом (водоструйный насос), наносят пробу фракции. Осадок, образовавшийся на фильтровальной бумаге, промывают 4 мл 10%-ной трихлоруксусной кислоты, затем тремя порциями дистиллированной воды. Фильтр с осадком помещают для окрашивания в 0,05%-ный раствор БФС в 2%-ной уксусной кислоте, инкубируют 30 мин, затем в течение 30 мин отмывают от несвязавшегося красителя в трех сменах 2%-ной уксусной кислоты. Отмытый фильтр переносят в пробирку, содержащую 5 мл 0,025 н. раствора NaOH, инкубируют 30 мин и колориметрируют синий элюат при 590 нм. Количество белка в пробе определяют по калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой на фильтр наносят по 25 мкл растворов, содержащих известные количества белка (от 10 до 150 мкг в пробе). Фильтраты высушивают на воздухе, инкубируют 30 мин в 10%-ной трихлоруксусной кислоте, отмывают 3 раза дистиллированной водой, помещают для окрашивания на 30 мин в 0,05%-ный раствор БФС, отмывают 30 мин 2%-ной уксусной кислотой, элюируют краситель в 5 мл 0,025 н. раствора NaOH в течение 30 мин и колориметрируют элюаты при 590 нм.

Пример 2. Приготовление суспензии целлюлозы.

Суспензию целлюлозы готовят по методу Лехтцинд Е.В., Эльгорт Д.А. (см. Лехтцинд Е.В., Эльгорт Д.А. Приготовление иммуносорбентов на основе суспензии диальдегидцеллюлозы // Иммуносорбенты и их использование в биотехнологии. Сб. НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, — М., 1987. — С. 92-95). Мелко нарезают 5 г хлопковой ваты и замачивают в 100 мл 25%-ного раствора аммиака.

Для получения гидроокиси меди готовят два раствора: 1) в 250 мл дистиллированной воды растворяют 15,6 г CuS0₄5Н₂О и добавляют 0,5 мл глицерина; 2) в 300 мл дистиллированной воды растворяют 5,6 г NaOH. Раствор щелочи медленно при постоянном перемешивании выливают в раствор сернокислой меди, при этом выпадает осадок гидроокиси меди.

Выпавший осадок гидроокиси меди отмывают на воронке Бюхнера или центрифугированием (5 мин при 2000 об/мин) 0,1%-ным раствором глицерина в воде до исчезновения ионов SО₄ 2- в промывной жидкости. Для этого ставят пробу с 10%-ным раствором ВаСl₂, в присутствии ионов SО₄ 2- выпадает белый осадок.

Свежеприготовленную гидроокись меди и 50 мл 25%-ного раствора аммиака добавляют к замоченной вате и тщательно перемешивают. Через час к полученной смеси добавляют еще 50 мл 25%-ного раствора аммиака, вновь тщательно перемешивают и оставляют на ночь.

К полученной смеси добавляют 25%-ный раствор аммиака до конечного объема 500 мл и тщательно перемешивают. Полученную суспензию целлюлозы выливают в сосуд, содержащий 5 л дистиллированной воды, перемешивают и медленно, небольшими порциями, при постоянном перемешивании добавляют концентрированную серную кислоту до исчезновения синей окраски раствора.

Выпавшую суспензию целлюлозы отмывают на капроновом сите 76 или при центрифугировании (5 мин при 2000 об/мин) дистиллированной водой до исчезновения ионов S0₄ 2- в промывной жидкости.

Отмытый осадок переносят во флакон емкостью 500 мл и доводят водой объем суспензии до 400 мл. Хранят при 4 o С, используя по мере необходимости.

Сухое вещество в суспензии целлюлозы определяют путем высушивания бюкса до постоянного веса в сушильном шкафу. Во взвешенный бюкс наливают 0,5-1,0 мл суспензии целлюлозы и вновь высушивают до постоянного веса. Вычисляют вес осадка в бюксе и по нему рассчитывают содержание сухого вещества в суспензии целлюлозы.

Пример 3. Конъюгирование фракции клеточных оболочек на целлюлозной матрице.

Фракцию клеточных оболочек смешивают с суспензией целлюлозы в соотношении 100 мг белка на 1 г целлюлозы при одновременном добавлении 25 M СrСl₃. После тщательного перемешивания смесь ставят на магнитную мешалку при температуре 4 o С на 3 суток.

Реакционную смесь осаждают и 4-5 раз отмывают физиологическим раствором, центрифугируя 15 мин при 2000 об/мин. Осадок конъюгата разводят физиологическим раствором в минимальном объеме.

Присоединившийся белок определяют по окрашиванию бромфеноловым синим (Е. В. Лехтцинд, Д.А. Эльгорт, 1987).

В полученный препарат добавляют антигены цитоплазматической фракции до концентрации в конъюгате белка 1,5-2,0 мг/мл с целью стандартизации дозы препарата по белку. В результате получают противотуберкулезную бесклеточную вакцину на целлюлозной матрице (ТБЦ).

Пример 4. Испытание протективных свойств на морских свинках.

В опыте были использованы 79 морских свинок весом 300-400 г, предварительно исследованных ППД-туберкулином и не реагирующих на него. Из экспериментальных животных сформировали 13 групп. Морские свинки 1-й группы были привиты конъюгатом из антигеновцитоплазматической фракции с добавлением фракции клеточных оболочек в качестве свободного белка (ТБЦ-1) в дозе 500 мкг белка; 2-й — привиты ТБЦ-1 в дозе 1000 мкг белка; 3-й — конъгатом, полученным предложенным способом (ТБЦ-2) в дозе 500 мкг; 4-й группы привиты ТБЦ-2 в дозе 1000 мкг белка; 5-й и 6-й — антигенами цитоплазматической фракции (Ф-1) в дозе 500 мкг и 1000 мкг белка; 7-й и 8-й — антигенами фракции клеточных оболочек (Ф-2) в дозе 500 мкг и 1000 мкг белка; 9-й — привиты суспензией целлюлозы (СЦ) в дозе 1,5 мл; 10-й и 11-й — привиты вакциной БЦЖ в дозе 500 мкг и 1000 мкг; 12-й группы введен физиологический раствор и 13-я группа морских свинок контрольная.

Дозу препаратов вводили в объеме 1,5 мл. Для изучения протективных свойств препаратов морским свинкам через 2 мес. после вакцинации в область левого паха была введена вирулентная культура M.bovis шт. 14 ВНИИБТЖ в дозе 0,001 мг. Убой животных был проведен через 4 мес. после вакцинации. Результаты эксперимента показаны в таблице 3.

Процент иммунных животных определяется по формуле: ПИ=(А-В)/100%, где ПИ — процент иммунных; А — всего животных; В — животные, у которых при патологоанатомическом исследовании выявлены поражения туберкулезного характера.

Интенсивность поражений и индекс защиты по методу С.И. Гельберг, Е.А. Финкель (см. Гельберг С. И. , Финкель Е.А. К методике экспериментального изучения иммунногенных свойств противотуберкулезных вакцин и эффективности методов их применения // Проблемы туберкулеза, 1959. — 2. — С. 80-84).

Как видно из таблицы 3 противотуберкулезный препарат ТБЦ-2 проявляет достаточные протективные свойства, сравнимые по своему уровню с вакциной БЦЖ.

Препарат предполагается использовать для реиммунизации крупного рогатого скота, ранее привитого вакциной БЦЖ.

Способ получения вакцины против туберкулеза, включающий культивирование микобактерий с последующим разрушением ультразвуком и выделением антигена клеточных оболочек и его конъюгацией с носителем, отличающийся тем, что для культивирования используют штамм БЦЖ, антиген получают путем дезинтеграции культуры, надосадочную жидкость сливают (цитоплазматическая фракция), осадок вновь подвергают дезинтеграции, осаждают при 15000 об/мин, полученную надосадочную жидкость (фракция клеточных оболочек) конъюгируют на целлюлозной матрице при их соотношении 1:10 (по массе) в присутствии треххлористого хрома до получения эффекта, добавляют цитоплазматическую фракцию до содержания в конъюгате белка 1,5-2,0 мг/мл.

Источник

Вам также может понравиться

Ясень семена способ распространения

Ясень обыкновенный Fraxinus excelsior – так в ботанической

Ярлыки способы создания ярлыков ос windows

Создаем ярлыки на рабочем столе Windows Создаем ярлыки

Японское удобрение фуджима способ применения

Удобрения Фуджима Знаете потрясающее удобрение, палочка

Японский чай способ заварки

Технология заваривания японского чая Известно, что