Практические советы Витальное окрашивание Прижизненное окрашивание Домашняя лаборатория Занимательная микроскопия Изготовление микропрепаратов Камера Горяева Классификация и маркировка объективов микроскопов Комбинации цветных стекол для выделения спектра Методы микроскопирования Методы исследования простейших Методы и приемы биологического эксперимента Микроскопия для начинающих Микроскопические измерения Модификации контрастной окраски по Граму Необходимое оборудование Общие методы заключения препаратов Организация и оснащение гистологической лаборатории Освещение по Келлеру Подготовка предметных стекол Поляризационная микроскопия Правила работы с микроскопом Правила ведения лабораторного журнала Приобретение микроскопа Приготовление микропрепаратов членистоногих Техника приготовления гистологических препаратов Фототубус для цифровых камер Формидрон инструкция по применению
Подготовка предметных стекол
Предметные стекла, применяемые для получения гистологических препаратов, необходимо предварительно подготовить. Исключение составляют готовые к использованию и специально упакованные импортные предметные стекла.
Предметные стекла моют в теплой мыльной воде или кипятят в 2 — 3 % растворе гидрокарбоната натрия, затем ополаскивают горячей водой и промывают в течение нескольких часов в проточной воде. Вымытые стекла протирают чистой хлопчатобумажной тканью и на несколько дней помещают в 96 % спирт . Обезжиренные стекла извлекают пинцетом из этой смеси, протирают чистой тканью и складывают в коробочку.
Предметные стекла также хорошо обезжириваются в крепком растворе соляной кислоты. Через несколько суток их промывают проточной водой и высушивают.
Качество обезжиривания можно проверить, капнув на предметное стекло воду из пипетки: по обезжиренному стеклу вода растекается тонким слоем, а не собирается в каплю.
Для лучшей фиксации срезов на стекле его предварительно смазывают смесью белка с глицерином. Свежий яичный белок взбивают и фильтруют через крупнопористый фильтр, смоченный дистиллированной водой, затем размешивают с равным объемом глицерина и добавляют несколько кристаллов тимола. Смесь хранится в течение нескольких месяцев. Применяют также смесь, в состав которой входят 15 мл сыворотки крови, 5 мл дистиллированной воды и 6 мл 5 % формалина. После фильтрации смесь готова к нанесению на предметные стекла. Ее использование дает лучшие результаты, чем применение яичного белка, так как при окрашивании не образуется фон.
Для нанесения белка на обезжиренные предметные стекла в одну руку берут 5 — 6 стекол в виде веера, а в другую — чистую стеклянную палочку, которой наносят белок, прикасаясь к каждому стеклу. Затем белок растирают обезжиренным спиртом пальцем по поверхности стекла до его середины, прилагая небольшое усилие. Некоторые авторы рекомендуют натертые белком стекла прогревать в термостате, но опыт показывает, что это излишне, так как после переноса срезов на стекла их помещают в термостат или на специальный столик для просушивания, где одновременно происходит коагуляция белка.
Разработан способ фиксации среза к предметному стеклу без предварительного натирания последнего белком с глицерином.
В ванночку с теплой дистиллированной водой капают несколько капель жидкого казеинового клея и перемешивают. В полученную мутноватую жидкость опускают срезы, расправляют препаровальной иглой и вылавливают на чистое обезжиренное стекло.
Этот способ дает неизменно хороший эффект и вокруг среза отсутствует окрашенный фон, как это часто бывает при применении белка.
Предметные стекла, применяемые для получения гистологических препаратов, необходимо предварительно подготовить. Исключение составляют готовые к использованию и специально упакованные импортные предметные стекла.
1. Мойка в тёплой мыльной воде или кипятят 2-3% растворе гидрокарбоната натрия.
2. Ополаскивают горячей водой.
3. Промывают проточной водой несколько часов.
4. Протирают тканью
помещают на несколько суток в смесь Никифорова:эфир+96%спирт.
Или на несколько дней помещают в крепкий раствор соляной кислоты
Или 100гр бихромата калия растворяют в 1000мл горячей воды, охлаждают и по стеклянной палочке по каплям добавляют концентрированную серную кислоту. Выдерживают 2-3 дня, промывают 1-2 дня.
Контроль:капля воды по обезжиренному стеклу расходится тонким слоем, а не собирается каплей.
6. Извлекают пинцетом, протирают и складывают в коробочку.
Для лучшей фиксации срезов на стекле его предварительно смазывают:
смесью белка с глицерином.(свежий яичный белок взбивают, фильтрируют через крупнопористый фильтр, смоченный дистиллированной водой, размешивают с равным количеством глицерина и добавляют несколько кристаллов тимола.Смесь хранится несколько месяцев.
15мл сыроватки крови+5мл дистиллированной воды+6мл-5% формалина и фильтруют. Она лучше за предыдущий, так как не даёт фон.
Для нанесения белка на обезжиренные предметные стекла в одну руку берут 5—6 стекол в виде веера, а в другую — чистую стеклянную палочку, которой наносят белок, прикасаясь к каждому стеклу. Затем белок растирают обезжиренным спиртом пальцем по поверхности стекла до его середины, прилагая большое усилие. Некоторые авторы рекомендуют натертые белком стекла прогревать в термостате, но опыт показывает, что это излишне, так как после переноса срезов на стекла их помещают в 34 термостат или на специальный столик для просушивания, где одновременно происходит коагуляция белка.
Разработан способ фиксации среза к предметному стеклу без предварительного натирания последнего белком с глицерином. В ванночку с теплой дистиллированной водой капают несколько капель жидкого казеинового клея и перемешивают. В полученную мутноватую жидкость опускают срезы, расправляют препаровальной иглой и вылавливают на чистое обезжиренное стекло. Этот способ дает неизменно хороший эффект и вокруг среза отсутствует окрашенный фон, как это часто бывает при применении белка.
Анализ недостатков судебно-гистологических исследований и пути их устранения / Гедыгушева Н.П., Буланова Э.В. // Матер. IV Всеросс. съезда судебных медиков: тезисы докладов. — Владимир, 1996. — №2. — С. 47-49.
Возможности установления некоторых причин смерти гистохимическими методами / Смирнов В.В., Смирнов В.В. // Матер. IV Всеросс. съезда судебных медиков: тезисы докладов. — Владимир, 1996. — №2. — С. 31-32.
Актуальные вопросы гистологического исследования при экспертизе живых лиц / Кулеша Н.В. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2018. — №17. — С. 125-128.
1. С предметных стекол, бывших в употреблении и соприкасавшихся с иммерсионным маслом, удаляют масло сухой тряпкой или бензином. Затем стекла кипятят без мыла и соды в течение 15-20 мин, промывают чистой водой и погружают на 1 ч в насыщенный раствор двухромовокислого калия в серной кислоте. Обработанные таким образом стекла промывают в течение не менее 1 ч под струей водопроводной воды и насухо вытирают чистым полотенцем.
2. При отсутствии двухромовокислого калия и серной кислоты стекла, бывшие в употреблении, кладут в мыльный раствор и выдерживают в нем 8-10 ч, а затем в том же растворе кипятят их 5-10 мин. От более длительного кипячения стекла делаются мутными.
После кипячения стекла вынимают и тщательно промывают под струей водопроводной воды, а затем насухо вытирают.
3. Стекла, не бывшие в употреблении промывают в горячей воде и насухо вытирают. Хранят стекла в стеклянной широкогорлой банке с крышкой.
Подготовка предметных стекол
Качество препаратов крови зависит от чистоты предметных стекол, поэтому бывшие в употреблении стела подвергают специальной обработке, для этого с них предварительно удаляют иммерсионное масло кусочком ваты/бинта, смоченной бензином или эфиром, и помещают в теплый 2 % раствор хозяйственного мыла или смеси стирального порошка (2 % р-р стирального порошка готовят путем растворения 20 г в 975 мл воды с добавлением 20 мл пергидроля), выдерживают в эмалированной посуле 8-10 ч, старый мазок крови удаляют со стекол ватным тампоном, затем кипятят в этом же растворе в течение 30—45 мин.
Многократно промывают водопроводной и дист. водой, насухо вытирают. Затем предметные стекла выборочно проверяют, нанося на них 2-3 капли 1 г/л спиртовою р-ра фенолфталеина; при отсутствии щелочных добавок моющих средств розовое окрашивание не появляется. Подготовленные таким образом предметные стекла помещают в смесь Никифорова (состоит из равных частей 96 % этанола и диэтилового эфира).
Новые стекла достаточно обработать в смеси Никифорова. Подготовленные предметные стекла извлекают по мере необходимости из смеси Никифорова с помощью пинцета, вытирают тряпочкой без ворса и, не прикасаясь к ним руками во избежание загрязнения поверхности, складывают в коробки, чтобы предохранить от пыли.
Очистка и обезжиривание обычных предметных стекол
Сначала предметные стекла тщательно промывают в теплой мыльной воде, прополаскивают в чистой водопроводной (а лучше дистиллированной) воде и насухо протирают неворсистой тканью/льняной. Такие стекла можно завернуть в чистую бумагу и использовать по мере необходимости. Перед работой необходимое количество предметных стекол погружают в эксикатор (или банку с притертой пробкой) с жидкостью Никифорова (этанол-эфир 1:1) или 96° этанолом. В жидкости Никифорова происходит окончательное обезжиривание стекол. Если предметные стекла, поступающие в лабораторию достаточно чистые, можно ограничиться только обезжириванием их в жидкости Никифорова или этаноле.
Для проверки качества очистки и обезжиривания на извлеченное из жидкости Никифорова и тщательно протертое сухой тканью предметное стекло нужно поместить каплю дистиллированной воды. Если вода рассекается по поверхности стекла, то такие стекла можно использовать, если вода собирается в каплю — очистка стекла недостаточная или свойства поверхности стекла таковы, что срезы могут отклеиваться, даже при последующей обработке адгезивом.
Источник
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ТИНКТОРИАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ — Е. Л. Зайцева — 2015
ГЛАВА II. ОБЕЗЖИРЕВАНИЕ СТЕКОЛ
Назначение — хорошее прикрепление и равномерное распределение исследуемого объекта к стеклу.
От качества приготовления препарата в значительной степени зависит результат микроскопии. Предметные и покровные стекла, употребляемые для приготовления препаратов, нуждаются в специальной подготовке. Предметные стекла должны быть размером 26×76 мм и не толще 1,1-1,4 мм, покровные — толщиной 0,15-0,17 мм вследствие оптических свойств конденсора Аббе, чистыми и хорошо обезжиренными. Это может быть достигнуто разными способами.
Способы обезжиривания стекол:
1. Новые стекла кипятят 15 минут в 1% растворе соды (или в мыльной воде), затем промывают водой, кладут в слабый раствор соляной кислоты, вновь тщательно промывают водой.
2. Стекла, бывшие в употреблении, сначала помещают в концентрированную серную кислоту или в смесь из 100 частей серной кислоты, 50 частей двухромовокислого калия и 1000 частей воды на 2 часа, после чего кипятят в щелочи, тщательно промывают водой.
3. Погружают стекла в смесь 6% хромовокислого калия и серной кислоты на 24 часа, после чего тщательно промывают водой. Хранят стекла в 96% растворе спирта.
4. Стекла можно также обрабатывать жидкостью следующего состава (по Цеттнову (Zettnow), 1899): Kalii bichromici — 20 г, Acidi sulfuric crudi — 20 г, воды — 200,0 мл. После 10 минут кипячения в этой смеси промывают стекло 5 минут в слабом растворе щелочи, а затем водой и, наконец, спиртом.
Перед работой стекла натирают кусочком сухого мыла, затем тщательно до блеска протирают марлей.
Для продолжительного хранения чистые обезжиренные стекла помещают в банки с притертыми пробками со смесью Никифорова (смесь равных объемов этилового 96% спирта и сернокислого (наркозного) эфира) или в 96% спирте или промытыми и вытертыми досуха.
Оценка результата. На чистом стекле капля водопроводной воды или изотонического раствора натрия хлорида (NaCl) свободно растекается по всей поверхности, на жирном — дробится на множество мелких капель.
Биологическая библиотека — материалы для студентов, учителей, учеников и их родителей.
Наш сайт не претендует на авторство размещенных материалов. Мы только конвертируем в удобный формат материалы, которые находятся в открытом доступе и присланные нашими посетителями.
Если вы являетесь обладателем авторского права на любой размещенный у нас материал и намерены удалить его или получить ссылки на место коммерческого размещения материалов, обратитесь для согласования к администратору сайта.
Разрешается копировать материалы с обязательной гипертекстовой ссылкой на сайт, будьте благодарными мы затратили много усилий чтобы привести информацию в удобный вид.
Процедура приготовления мазков начинается с подготовки предметных стекол. Необходимо использовать только новые, отмытые и обезжиренные в спирте или смеси Никифорова (96° этиловый спирт + эфир в соотношении 1:1) стекла без царапин и сколов. При повторном использовании стекла могут быть недостаточно хорошо отмыты от предыдущего материала, что может привести к получению ложноположительных результатов. Не рекомендуется использовать саморезанные стекла, которые приводят к значительным аберрациям исследуемого изображения. Стекла должны соответствовать ГОСТу.
Стекла, на которых при микроскопическом исследовании были обнаружены кислотоустойчивые микобактерии, сохраняются в лаборатории в течение 1 года, а затем подлежат обязательному уничтожению и не должны использоваться повторно.
Новые предметные стекла кипятят 15 минут в 1% растворе питьевой соды (10 г двууглекислого натрия на 1 л воды), промывают в 1% растворе соляной кислоты (к 1 л воды добавляют 10 мл концентрированной соляной кислоты), а затем в проточной воде. Протирают насухо.
Для обезжиривания вымытые и высушенные стекла помещают в герметически закрытые емкости со смесью Никифорова или с 96° этиловым спиртом. Стекла должны подвергаться обезжириванию в течение суток. Непосредственно перед приготовлением мазков стекла повторно протираются насухо.
