Способы введения аллергена у животных

IV. Организация массовых аллергических исследований

Цель занятия: освоить технику аллергического диагностического исследования животных разных видов, приобрести навыки оценки аллергических реакций и оформления документов.

Оборудование: инструменты для постановки аллергических проб, набор аллергенов.

Техника аллергических диагностических исследований. В ветеринарии аллергический метод диагностики применяют при туберкулёзе, бруцеллезе, сапе, реже — при сибирской язве, листериозе, туляремии и др. Способы введения аллергена: внутрикожный (основной) по 0,1-0,5 мл, накожный, подкожный, конъюнктивальный. При внутрикожной туберкулинизации аллерген вводят: крупному рогатому скоту, буйволам, оленям, зебу — в область средней трети шеи; быкам-производителям — в одну из подхвостовых складок; мелкому рогатому скоту — в подхвостовую складку, веко; свиньям — в область наружной поверхности уха на расстоянии 1 см от его основания (в одно ухо — ППД для млекопитающих, в другое — ППД для птиц); козам, овцам, собакам, обезьянам и пушным зверям (кроме норок) — в область внутренней поверхности бедра или локтевой складки, норкам — в верхнее веко (интрапальпебрально); курам — в бородку; индейкам — в подчелюстную складку; кошкам наносят на внутреннюю поверхность уха.

Используют тонкие иглы для внутрикожных инъекций или безыгольные инъекторы (рис.5).

Рис. 5. Безыгольный инъектор:

1 – рабочее сопло;

2 – флакон с аллергеном;

3 – регулировочный винт;

4 – спусковой рычаг;

Инструментами, предназначенными для туберкулинизации, не разрешается вводить животным другие препараты. Шприцы и иглы до и после использования стерилизуют в течение 10 мин в дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих веществ.

Шерсть на месте инъекции предварительно выстригают и выбривают, кожу обрабатывают 70%-м этиловым спиртом. О правильности выполнения пробы судят по образованию бугорка размером с горошину на месте введения препарата. Реакцию учитывают у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, верблюдов и оленей через 72 ч; у коз, овец, свиней, собак, обезьян и пушных зверей — через 48 ч; у птиц — через 30. 36 ч.

При учете внутрикожной реакции пальпируют место инъекции (при пальпебральном способе сравнивают веки левого и правого глаза). При обнаружении изменений кожи в месте введения аллергена у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, верблюдов, оленей определяют размер утолщения с помощью кутиметра (рис.6).

Рис.6. Определение с помощью кутиметра размера утолщения кожной складки при положительном результате внутрикожной пробы на туберкулез:

вверху — кожная складка до введения туберкулина;

внизу — через 72 ч после введения туберкулина

Животных считают положительно реагирующими на туберкулин в следующих случаях: крупный рогатый скот, буйволов, зебу, верблюдов и оленей — при утолщении складки кожи на 3 мм и более (независимо от характера реакции); коз, овец, собак, обезьян, пушных зверей, кур и других птиц — при образовании припухлости в месте введения туберкулина; норок — при опухании века.

Офтальмопробу применяют при исследовании лошадей на туберкулез и сап, крупного рогатого скота — на туберкулез и только одновременно с внутрикожной инъекцией аллергена.

Методом офтальмопробы животных исследуют двукратно с интервалом 5. 6 дней.

3. 5 капель аллергена наносят стерильной глазной пипеткой на конъюнктиву слегка оттянутого нижнего века или под третье веко. Результаты первой офтальмопробы с маллеином при исследовании лошадей на сап учитывают через 3, 6, 9, 12 и 24 ч, второй — через 3, 6, 9 и 12 ч; первой офтальмопробы с туберкулином у лошадей и крупного рогатого скота — через 3, 6, 9, 12 и 24 ч, второй — через 3, 6, 9 и 12 ч. При учете реакции осматривают конъюнктиву, открывая во всех случаях глаз животного.

По степени проявления реакцию на маллеин у лошадей подразделяют на положительную, сомнительную и отрицательную. Положительная реакция характеризуется гиперемией и отеком конъюнктивы, выделением из внутреннего угла глаза слизисто-гнойного или гнойного секрета, накапливающегося в конъюнктивальном мешке, а затем вытекающего в виде шнура. Отрицательная реакция характеризуется слабым покраснением конъюнктивы, незначительным слезотечением или отсутствием каких-либо отклонений от нормы. При сомнительной реакции регистрируют небольшое слезотечение или скопление гноя в углу глаза.

Положительная реакция на туберкулин у крупного рогатого скота и лошадей характеризуется выделением из внутреннего угла глаза слизисто-гнойного секрета, накапливающегося вначале в конъюнктивальном мешке, а затем вытекающего в виде шнура.

Для аллергической диагностики бруцеллеза у свиней применяют бруцеллин ВИЭВ. Аллерген вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины, ближе к основанию уха, в дозе 0,2 мл. На месте введения препарата образуется бугорок размером с горошину. При инъекции обязательно соблюдают правила асептики. Участок кожи перед уколом протирают ватой, смоченной 70%-м этиловым спиртом или 3%-м раствором борной кислоты. Реакцию на бруцеллин учитывают дважды — через 24 и 48 ч путем осмотра, а при неясно выраженной реакции — пальпацией места инъекции. При обнаружении припухлости на месте введения препарата реакцию оценивают как положительную.

Организация массовых аллергических исследований. Прежде чем приступать к массовым аллергическим исследованиям, необходимо продумать способы фиксации животных, обеспечивающие, с одной стороны, безопасность людей и животных в процессе работы, а с другой — точное соблюдение места инъекции и дозы аллергена, что очень важно для правильного учета аллергических реакций. Для этой цели подготавливают различные приспособления и инструменты, а также приглашают вспомогательный персонал, который предварительно инструктируют. Чтобы массовое аллергическое исследование не стало фактором распространения болезни, тщательно готовят инструментарий: стерильные шприцы и иглы для туберкулинизации, глазные пипетки в необходимом количестве, дезраствор для обработки поля инъекции и использованных игл, ножницы для выстригания шерсти, кутиметры, безыгольные инъекторы (предварительно проверенные на годность к работе и обработанные дезраствором).

Накануне аллергического исследования осматривают поголовье, обращая внимание на состояние кожи (конъюнктивы): на месте инъекции кожа должна быть без ран, язв, ссадин, узлов, утолщений, отеков и пр. Обязательно оценивают качество аллергического препарата (наличие наставления, этикетки, внешний вид, срок годности).

Очень важно правильно обрабатывать поле (при туберкулинизации используют только спирт-ректификат) и вводить препарат, а также точно соблюдать сроки и методы учета реакций.

После окончания аллергического исследования и учета реакций составляют акт с описью исследованных животных аналогично акту на проведение вакцинации.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Принцип аллергической диагностики.

2. Составить акт аллергического исследования коров на туберкулёз.

Источник

Краткие тезисы о том, на чем основана аллергодиагностика у собак и кошек

Автор: Руппель В. В.

Сложность диагностики аллергических заболеваний, проявляющихся зудом, заключается в следующем:

• Эти заболевания не имеют патогномоничных клинических признаков, которые позволяют установить точный диагноз на этапе анамнеза и клинического обследования пациента.
• Разнообразие клинических проявлений могут зависеть от генетических факторов (породно- ассоциированных фенотипов), степени поражения (локализованные или более распространенные клинические проявления), стадии заболевания (острая или хроническая стадия)
• Наличие вторичных инфекций может усиливать обострение вспышки болезни. Некоторые клинические аспекты эти заболеваний могут быть схожими

Существует 4 группы причин, которые могут вызывать зуд у собак и кошек:

Ориентируясь только на клинические симптомы, невозможно точно определить, что явилось конкретной причиной таких клинических проявлений: инфекции кожи; паразиты кожи; аллергии или другие причины (эндокринопатии, породные дерматозы, неоплазии кожи, иммуноопосредованные дерматозы и прочее).

Алопеции

Множественные мечкоочаговые алопеции на голове

Алопеция

Аюпеция и гиперпигментация кожи на вентральной поверхности шеи

Папулезно — пустулезная сыпь на шее

Отиты

Эритема и отек тканей внутренней поверхности ушной раковины.

Поражение кожи вокруг глаз

Лихенификация и корочки в периокулярной области

Лихенизация

Лихенизация и гиперпигментация кожи в подмышечной области

Лихенизация

Лихенификация кожи живота

Дерматит

Пододерматит

Папулезно — пустулезная сыпь на бедрах

Акральный дерматит

Учитывая сложность проблемы, ученые из Международного Комитета по аллергическим заболеваниям у животных в 2015 году разработали руководство для собак, которое позволяет выявить причины, вызывающие зуд, в том числе при аллергических заболеваниях. В общем, такие же подходы используются и у кошек.

Важные дифференциальные диагнозы зудящих кожных заболеваний у собак, выделенные учеными («Canine atopic dermatitis: detailed guidelines for diagnosis and allergen identification». Patrick Hensel, Domenico Santoro, Claude Favrot, Peter Hill and Craig Griffin):

• Эктопаразиты: блохи, чесотка (Sarcoptes scabiei), демодекоз, хейлетелиоз, педикулез, отоакаридоз (Otodectes cynotis), тромбикулёз, назальные клещи (Pneumonyssus caninum)
• Кожные инфекции: стафилококковая пиодерма, малассезиозный дерматит
• Аллергические болезни кожи: атопический дерматит (АД), пищевая непереносимость/аллергия, аллергия на укусы насекомых, контактный дерматит
• Неопластические болезни: кожная лимфома

Для выявления причин предлагается пошаговый алгоритм диагностики. Следует отметить, что эти шаги выделены условно с целью дифференциации проблем. Обычно 1-4 шаги объединяются изначально.

Шаг 1 — исключение блошиного дерматита/инвазии

На чем ученые делают акцент:

• Всегда нужно проводить этот шаг, учитывать отсутствие реппелентных свойств у продуктов и выживаемость блох — до 174 дней в стадии куколки.
• При возможности присутствия блох, собаки должны обрабатываться в течение 3-х месяцев.
• Важны одновременные обработки всех животных, находящихся на одной территории.

Распределение поражений кожи и зуда, связанных с блошиной аллергией:

• Острые поражения: эритематозные макулы, папулы, корочки, «хот-споты».
• Хронические поражения: самоиндуцированная алопеция. лихенизация и гиперпигментация.

Шаг 2 — исключение других паразитов, вызывающих зуд

• Саркоптоз, хейлетелиоз, педикулез, тромбикулез, отодектоз, демодекоз.
• Рутинные тесты: соскобы, мазки из ушей, тест с клейкой лентой — могут быть использованы для исключения этих проблем

Распределение поражений кожи и зуда, связанных со вшами / хейлетиеллой

• Вши: нет видимых повреждений или средне выражены шелушение и экскориации.
• Хейлетиелла: наличие себореи на спине

Шаг 3 — исключение возможности формирования стафилококковой инфекции и перероста Малассезия

Основные группы нарушений, формирующих пиодермию (некоторые возможные причины)

Клинический пример пиодермии, развившейся на фоне атопического дерматита

Цитология мазка-отпечатка. Определяется фагоцитоз при пиодермии

Эпидермальные воротнички при пиодермии

Избыточный рост дрожжевых грибов Малассезия

• Цитология проводится с участков кожи с признаками воспаления (складки кожи, участки лихенизации).
• У собак с повышенной чувствительностью к этим грибам может усиливаться зуд.
• При обнаружении Малассезии желательно проводить терапию антимикотиками с тем, чтобы исключить «степень участия» дрожжевых грибов в формировании зуда.

Шаг 4 Определение зависимости кожных проявлений от неблагоприятных реакций на пищу

• Зуд, связанный с пищевыми факторами, может быть вызван двумя различными механизмами: неиммунная опосредованная реакция (пищевая непереносимость); иммунно-опосредованная реакция, то есть IgE-опосредованную гиперчувствительность (аллергия на пищу).
• На сегодняшний день нет лабораторных тестов, которые могли бы позволить исключить данную проблему.
• Используются строгие диеты сроком не менее 8-ми недель.
• Критериями выбора является подбор продуктов, которые ранее никогда не входили в рацион (специализированные корма, продукты домашнего приготовления и гидролизаты).
• Важно исключить любые возможности попадания в рацион дополнительных продуктов, лакомств и пищевых ароматизаторов, помимо предложенной диеты.
• Соблюдение всех условий поможет объективно оценить отсутствие или наличие клинических признаков зуда на исходе срока проведения диет.

Возможные продукты для исключающих диет

Гидролизные продукты для исключающих диет: в чем суть?

Через 8 недель исключающих диет проводится оценка наличия или отсутствия нежелательных пищевых реакций (пищевой непереносимости или аллергии на пищу) по клиническим критериям и на основании возвратных диет

Если нет данных о наличии зависимости кожных проявлений от неблагоприятных реакций на пищу, можно вести речь о том, что пациент страдает атопическим дерматитом.

Таким образом, атопический дерматит – диагноз исключения!

Данный диагноз устанавливается на основании пошагового алгоритма, после проведения всех (1-4) шагов и при отсутствии выявления иных причин для формирования кожных проблем и зуда. Дальнейшая диагностика основана на проведении сывороточных или кожных тестов. Сывороточные тесты проводятся не в России. Они более дорогостоящие, чем кожные. Сроки доставки сыворотки крови и ожидание результатов при их проведении занимает значительное количество времени. Наконец, кожные тесты находятся в руках врача-клинициста. Это, в свою очередь, также является диагностическим преимуществом. Таким образом, очевидно, что в российских условиях кожные тесты более предпочтительны, нежели сывороточные.

Для чего проводятся кожные тесты?

На сегодняшний день для лечения АД эффективна только вакцинация значимыми аллергенами (те, на которые имеется аллергическая реакция у конкретного пациента)- так называемая антиген-специфическая иммунотерапия (АСИТ).

Все остальные (медикаментозные) методы лечения направлены лишь на устранение симптомов воспаления и зуда при АД.

Ретроспективные исследования это убедительно подтверждают (1. Dell DL, Griffin CE, Thompson LA, Griffies JD. Owner assessment of therapeutic interventions for canine atopic dermatitis: a long-term retrospective analysis. Vet Dermatol. 2012;23:228–e47; 2. Carlotti DN, Gribeauval C, Costargent FA, Ganiayre J, Viaud SE. A retrospective survey of the results of allergen-specific immunotherapy in 205 atopic dogs in Aquitaine, France (1989–2001). Prat Méd Chir Anim Comp. 2013;48:41–7; 3. Hobi S, Mueller RS. Efficacy and safety of rush immunotherapy with alum-precipitated allergens in canine atopic dermatitis. Tierarztl Prax Ausg K Kleintiere Heimtiere. 2014;42:167–73)

Какие аллергены использовать для проведения кожных тестов?

Полноценными и доступными аллергенами (включающими весь необходимый перечень продуктов для кожной диагностики) являются аллергены компании ARTU.

Их концентрация для теста соответствует 1000 PNU/ml

Факторы, влияющие на результаты внутрикожного теста
(отсутствие реактивности)

• аллергена при введении — менее 05 мл;
• аллергены просрочены;
• аллергены сильно разбавлены (менее 1000 PNU/мл);
• до теста применялись глюкокортикоиды (системные или местные), антигистаминные препараты, транквилизаторы, гипотензивные средства, прогестерон;
• у собаки в момент теста течка, ложная беременность или тяжелый стресс;
• тестирование проводится в межсезонье (когда прошло более 2-х месяцев с момента наличия клинических признаков) — это может вызвать ложно — положительную реакцию;
• контаминация аллергенов бактериями и грибами;
• плохая техника выполнения тестов (тупая игла с заусенцами, большой объем водимых аллергенов, попадание воздуха при инъекции).

Какие препараты могут повлиять на результаты теста (желательно не использовать):

• Оксиморфон
• Кетамин
• Диазепам
• Ацепромазин
• Пропофол

Какие препараты не влияют на результаты (можно использовать):

• Ксилазина гидрохлорид
• Медетомидин
• Тилетамин/ золазепам («золетил»)
• Тиамилал
• Галотан
• Изофлуран
• Метоксифлуран

Принципы отмены препаратов до теста:

• Антигистаминные препараты — за 7 дней.
• Пероральные глюкокортикоиды короткого действия — за 14 дней.
• Глюкокортикоиды длительного действия в инъекциях – (по крайней мере) за 28 дней.
• Местные глюкокортикоиды — за 14 дней.
• Циклоспорин. Вероятно, не требуется пауза до теста.
• Пентоксифиллин — отмена не требуется.

Порядок выполнения внутрикожных тестов:

1. Седация: наиболее распространенный вариант: сочетание гидрохлорида ксилазина (0.25- 0,5 мг / кг внутривенно) и атропина сульфата. Другой вариант — применение тилетамина/золазепама (4 мг / кг внутривенно)
2. Подготовка: кожа на боковой поверхности грудной клетки выбривается. Маркером наносятся точки рядом с местом введения аллергенов на расстоянии не менее 2 см друг от друга
3. Введение: : строго внутрикожное введение 0,05 мл разбавителя для аллергенов (отрицательный контроль) и 0,05 мл 1: 100000 гистамина фосфата (положительный контроль); и все соответствующим образом подготовленные аллергены (GREER), или аллергены из коммерческого набора (ARTU)

Критерии оценки теста

• Субъективная оценка:
• «0» баллов — место инъекции негативного контроля
• «++++» — место инъекции позитивного контроля
• результат на «++» и более — это реакция, потенциально значимая для конкретного пациента. Субъективная оценка проводится визуально и пальпаторно: оценивают размер волдырей (или так называемых аллергических папул), наличие их эритемы и упругости.
• Объективная оценка отличается от субъективной только линейным измерением размера волдырей.
• Измерение волдырей рекомендуется осуществлять через 15 и 30 минут после введения аллергенов в кожу пациента.
• Если волдырь имеет диаметр, равный или его величина больше половины среднего арифметического размера диаметра волдырей негативного и позитивного контролей – это положительная реакция.
• Разницы в том, какой метод оценки использовать, нет. Мы используем объективную оценку.

Особенности диагностики при аллергии у кошек

Как было отмечено, подходы у кошек в целом не отличаются от таковых у собак.

Кошки, как и собаки, не имеют патогномоничных признаков аллергических или иных заболеваний, сопровождающихся дерматитами и зудом. И имеют всего 4 группы клинических узоров (паттернов), которые могут проявляться при ряде заболеваний.

Перечень основных дифференциальных диагнозов при данных паттернах:

• Блошиная аллергия
• Пищевая аллергия
• Непищевая аллергия
• Отодектоз
• Нотоэдроз
• Хейлетеллиоз
• Дерматофитоз
• Листовидная пузырчатка
• Мастоцитома

В связи с этим у кошек так же, как и у собак, используется пошаговая диагностика, или проводится так называемый алгоритм при зуде

У кошек используются те же подходы, что и у собак — исключение иных причин зуда до проведения аллергодиагностики

• Анамнез
• Физикальное обследование
• Рутинные дерматологические тесты
• Диагностические обработки
• Аллергодиагностика

Для исключения нежелательных пищевых реакций у кошек в течение 10-12 недель проводятся элиминационные (исключающие) диеты.

Такие диеты могут быть назначены сразу после проведения рутинных тестов, в совокупности с диагностическими обработками против паразитов. Или же могут использоваться уже после проведения таких обработок.

Если нет данных о том, что проблема связана с инфекциями кожи, паразитами кожи, иными заболеваниями, формирующими зуд, а также пищевыми аллергиями, то в таком случае диагнозом исключения является «атопический дерматит».

Нет однозначного мнения относительно того, какой из тестов (серологический или кожный) лучше использовать для подбора аллергенов при проведении антиген-специфической терапии у кошек. Существует мнение, что сывороточный тест менее информативен у кошек.

Мы также склонны к тому, чтобы использовать кожные тесты у кошек в нашей практике.

Источник