Реакция преципитации.
Реакция преципитации (РП) – это осаждение растворимого антигена при действии антител в присутствии электролита. Видимый эффект реакции (феномен преципитации) – помутнение (образование мутного кольца или осадка – преципитата).
РП применяют для обнаружения неизвестного антигена при ряде инфекционных заболеваний: при сибирской язве, туляремии, менингите, оспе. В судебной медицине ее используют для определения видовой принадлежности крови, спермы; в санитарно-гигиенических исследованиях – для установления фальсификации пищевых продуктов. РП отличается очень высокой чувствительностью и позволяет обнаружить антиген в разведении 1:1 000 000 и 1: 10 000 000.
Компоненты реакции преципитации.
1. Антиген (преципитиноген) — это антиген молекулярной природы, находящийся в мелкодисперсном (растворимом) состоянии. Преципитиногены – это различные лизаты или экстракты тканей и др. Преципитиноген отличается от агглютиногена размером частиц антигена. Агглютиноген имеет размеры клеток (это не разрушенные целые клетки), а размеры преципитиногена соизмеримы с размерами молекул (это белки и их комплексы с углеводами или липидами). Раствор преципитиногена прозрачный.
2. Антитела (преципитины) находятся в сыворотке крови человека или в иммунных диагностических преципитирующих сыворотках, которые содержат известные антитела.
3. Электролит – изотонический раствор хлорида натрия.
Получают путем измельчения материала и извлечения из него белковых антигенов кипячением или другими способами.
Примеры преципитиногенов: лизаты или экстракты различных органов и тканей, чужеродная сыворотка крови (сыворотка — это раствор, в первую очередь, различных белков), фильтраты бульонных культур микробов, солевые экстракты микробов, аутолизаты и др.
Получение преципитирующих сывороток.
Получают путем гипериммунизации кроликов соответствующими преципитиногенами. Такие сыворотки содержат антитела к тем преципитиногенам, которыми иммунизировали кроликов.
Примеры преципитирующих сывороток: преципитирующая сибиреязвенная сыворотка (содержит антитела к антигенам возбудителя сибирской язвы), преципитирующая противоменингококковая сыворотка (содержит антитела против антигенов возбудителя менингита) и др.
Титр преципитирующей сыворотки – это наибольшее разведение преципитиногена, при котором сыворотка еще дает реакцию преципитации.
Способы постановки РП.
1. Реакция кольцепреципитации – проводится в специальных преципитационных пробирках (диаметр – 0,4-0,5 см, высота – 7-8 см). В пробирку вносят 0,2 – 0,3 мл преципитирующей сыворотки и по стенке длинным носиком пастеровской пипетки осторожно наслаивают такое же количество преципитиногена. Затем осторожно из горизонтального положения пробирки ставят вертикально.
Учет результатов реакции проводят по появлению белого кольца на границе антиген-антитело. При положительной реакции наблюдается образование такого кольца. В этом случае антиген соответствует антителу и происходит их связывание.
Если в качестве преципитиногена используют прокипяченные и профильтрованные водные экстракты органов и тканей, то реакция называется реакцией термокольцепреципитации (например, при диагностике сибирской язвы).
2. Реакция преципитации в геле – проводится в чашках Петри или на предметных стеклах, куда помещают слой агарового геля. При застывании геля в нем вырезают лунки, в которые помещают антигены или антитела, или и то и другое. Различают 2 метода РП в геле:
а) метод простой (радиальной) иммунодиффузии: один из компонентов реакции иммунитета (антиген или антитело) помещают в лунку, а другой компонент – смешивают с агаром; при положительном результате (антиген соответствует антителу) вокруг лунки образуется кольцо преципитата;
б) метод двойной иммунодиффузии: и антитело и антиген помещают в отдельные лунки, они диффундируют в агаровом геле навстречу друг другу; при положительном результате на месте встрече антитела и антигена образуются линии преципитации.
Примером РП в геле является реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони при диагностике дифтерии
Иммуноэлектрофорез – это метод, который сочетает метод электрофореза и реакцию преципитации. Смесь антигенов (например, белков сыворотки крови) разделяется в геле при помощи электрофореза. Затем, чтобы найти и определить нужный белок (неизвестный антиген), используют диагностическую преципитирующую сыворотку, которая содержит антитела к этому белку (известное антитело). Для этого в канавку параллельно белкам вносится диагностическая сыворотка. Если среди белков имеется тот, который соответствует антителу, находящемуся в сыворотке, то вокруг него образуются линии преципитации.
Источник
Реакция преципитации.
Реакция преципитации (РП) – это осаждение растворимого антигена при действии антител в присутствии электролита. Видимый эффект реакции (феномен преципитации) – помутнение (образование мутного кольца или осадка – преципитата).
РП применяют для обнаружения неизвестного антигена при ряде инфекционных заболеваний: при сибирской язве, туляремии, менингите, оспе. В судебной медицине ее используют для определения видовой принадлежности крови, спермы; в санитарно-гигиенических исследованиях – для установления фальсификации пищевых продуктов. РП отличается очень высокой чувствительностью и позволяет обнаружить антиген в разведении 1:1 000 000 и 1: 10 000 000.
Компоненты реакции преципитации.
1. Антиген (преципитиноген) — это антиген молекулярной природы, находящийся в мелкодисперсном (растворимом) состоянии. Преципитиногены – это различные лизаты или экстракты тканей и др. Преципитиноген отличается от агглютиногена размером частиц антигена. Агглютиноген имеет размеры клеток (это не разрушенные целые клетки), а размеры преципитиногена соизмеримы с размерами молекул (это белки и их комплексы с углеводами или липидами). Раствор преципитиногена прозрачный.
2. Антитела (преципитины) находятся в сыворотке крови человека или в иммунных диагностических преципитирующих сыворотках, которые содержат известные антитела.
3. Электролит – изотонический раствор хлорида натрия.
Получают путем измельчения материала и извлечения из него белковых антигенов кипячением или другими способами.
Примеры преципитиногенов: лизаты или экстракты различных органов и тканей, чужеродная сыворотка крови (сыворотка — это раствор, в первую очередь, различных белков), фильтраты бульонных культур микробов, солевые экстракты микробов, аутолизаты и др.
Получение преципитирующих сывороток.
Получают путем гипериммунизации кроликов соответствующими преципитиногенами. Такие сыворотки содержат антитела к тем преципитиногенам, которыми иммунизировали кроликов.
Примеры преципитирующих сывороток: преципитирующая сибиреязвенная сыворотка (содержит антитела к антигенам возбудителя сибирской язвы), преципитирующая противоменингококковая сыворотка (содержит антитела против антигенов возбудителя менингита) и др.
Титр преципитирующей сыворотки – это наибольшее разведение преципитиногена, при котором сыворотка еще дает реакцию преципитации.
Способы постановки РП.
1. Реакция кольцепреципитации – проводится в специальных преципитационных пробирках (диаметр – 0,4-0,5 см, высота – 7-8 см). В пробирку вносят 0,2 – 0,3 мл преципитирующей сыворотки и по стенке длинным носиком пастеровской пипетки осторожно наслаивают такое же количество преципитиногена. Затем осторожно из горизонтального положения пробирки ставят вертикально.
Учет результатов реакции проводят по появлению белого кольца на границе антиген-антитело. При положительной реакции наблюдается образование такого кольца. В этом случае антиген соответствует антителу и происходит их связывание.
Если в качестве преципитиногена используют прокипяченные и профильтрованные водные экстракты органов и тканей, то реакция называется реакцией термокольцепреципитации (например, при диагностике сибирской язвы).
2. Реакция преципитации в геле – проводится в чашках Петри или на предметных стеклах, куда помещают слой агарового геля. При застывании геля в нем вырезают лунки, в которые помещают антигены или антитела, или и то и другое. Различают 2 метода РП в геле:
а) метод простой (радиальной) иммунодиффузии: один из компонентов реакции иммунитета (антиген или антитело) помещают в лунку, а другой компонент – смешивают с агаром; при положительном результате (антиген соответствует антителу) вокруг лунки образуется кольцо преципитата;
б) метод двойной иммунодиффузии: и антитело и антиген помещают в отдельные лунки, они диффундируют в агаровом геле навстречу друг другу; при положительном результате на месте встрече антитела и антигена образуются линии преципитации.
Примером РП в геле является реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони при диагностике дифтерии
Иммуноэлектрофорез – это метод, который сочетает метод электрофореза и реакцию преципитации. Смесь антигенов (например, белков сыворотки крови) разделяется в геле при помощи электрофореза. Затем, чтобы найти и определить нужный белок (неизвестный антиген), используют диагностическую преципитирующую сыворотку, которая содержит антитела к этому белку (известное антитело). Для этого в канавку параллельно белкам вносится диагностическая сыворотка. Если среди белков имеется тот, который соответствует антителу, находящемуся в сыворотке, то вокруг него образуются линии преципитации.
Источник
Лекция по микробиологии «Иммунные реакции. Применение иммунных реакций в диагностике инфекционных заболеваний»
Лекция 13
Иммунные реакции. Применение иммунных реакций в диагностике инфекционных заболеваний.
Виды иммунных реакций.
Условия проведения серологических реакций.
Требования к сыворотке.
Понятие положительный и отрицательный результат.
Виды иммунных реакций.
Иммунологическая реакция – это взаимодействие антигена с антителом, которое определяется специфическим взаимодействием активных центров антитела (паратопа) с эпитопами антигенов.
Общая классификация иммунологических реакций:
серологические реакции – реакции между антигенами (Aг) и антителами (Ig)
клеточные реакции с участием иммунокомпетентных клеток;
аллергические пробы – выявление гиперчувствительности.
Серологические реакции: 1) определение, 2) фазы, 3) цели постановки, 4) общая классификация.
Серологические методы исследования (от лат. Serum — сыворотка и logos — учение) с помощью реакции антиген-антитело.
2 фазы взаимодействия:
I. Специфическая (видимая) – наступает быстро, aнтитела соединяются с соответствующими им антигенами. В эту фазу взаимодействуют детерминантные группы антигенов (АГ) и активных центров антител (АТ).
В образовании комплекса АГ+ АТ участвуют силы:
Ван дер Ваальса
Никаких видимых изменений в этой фазе нет. При электронной микроскопии комплекс АГ+АТ в виде решетки.
II. Неспецифическая – наступает медленно, образовавшийся комплекс антиген – антитело реагирует с дополнительным неспецифическим фактором среды, в которых происходит реакция, и это видимо глазом – склеивание, растворение, выпадение хлопьев осадка и т. п. В присутствии электролита снижается заряд, уменьшается растворимость, образуются видимые конгломераты, выпадающие в осадок (агглютинат).
3) Цели постановки :
а) для идентификации антигена (антитело известно-диагностическая сыворотка):
в патологическом материале (экспресс-диагностика);
в чистой культуре:
серологическая идентификация (определение вида);
серотипирование (определение серовара) – определение штамма;
б) для выявления антител (Ig) (антиген известен-диагностикум):
наличия (качественные реакции);
количества (нарастание титра – метод «парных сывороток»).
4) Общая классификация серологических реакций :
а) простые (2-х компонентные: Ag+Ig):
реакции агглютинации РА (с корпускулярным антигеном);
реакции преципитации РП (с растворимым антигеном);
б) сложные (3-х компонентные: Ag+Ig+C);
в) с использованием метки.
Варианты реакции агглютинации и преципитации
Реакция агглютинации (РА) — иммунная реакция взаимодействия суспензии АГ (эритроцитов, бактерий) с АТ в физиологическом растворе.
При агглютинации происходит склеивание частиц АТ с образованием хлопьевидного осадка.
Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) является разновидностью реакции агглютинации, в которой используют антительный или антигенный эритроцитарный диагностикум (эритроциты с адсорбированными на их поверхности АТ или АГ).
Эритроциты в этой реакции выполняют роль пассивных носителей.
Оценка результатов РПГА проводится следующим образом:
— при положительной реакции пассивно склеенные эритроциты покрывают дно U- или V-образной лунки ровным слоем с фестончатыми краями («зонтик»);
— при отрицательной реакции (отсутствии агглютинации) эритроциты скапливаются в центральном углублении лунки, образуя компактную «пуговку» с резко очерченными краями.
Реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) используют при диагностике вирусных инфекций. Некоторые вирусы содержат на своей поверхности белок гемагглютинин, склеивающий эритроциты. Добавление специфических противовирусных АТ блокирует вирусный гемагглютинин — гемагглютинация отсутствует.
Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), или реакцию Кумбса, применяют для определения неполных АТ. Добавление антиглобулиновой сыворотки (АТ против Ig человека) усиливает результаты реакции. РНГА применяют при определении резус-фактора.
Для постановки реакции агглютинации (РА) необходимы три компонента:
1) антиген (агглютиноген) АГ;
2) антитело (агглютинин) АТ;
3) электролит (изотонический раствор натрия хлорида).
Аг + АТ + электролит = агглютинат
Агглютинация (от лат. agglutinatio — склеивание) — склеивание корпускул (бактерий, эритроцитов и др.) антителами в присутствии электролитов — натрия хлорида. 
РА проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул-тел (например бактерий, эритроцитов), «склеенных» антителами.
РА используют для: 
определения возбудителя (АГ), выделенного от больного;
определения антител (АТ) в сыворотке крови больного; 
определения групп крови.
Реакция прямой агглютинации микробов (РА).
В этой реакции антитела (агглютинины) непосредственно агглютинируют корпускулярные антигены (агглютиногены).
Обычно они представлены взвесью инактивированных микроорганизмов (реакция микробной агглютинации).
Для определения вида микроорганизмов используют стандартные диагностические агглютинирующие сыворотки ( известные АТ ).
Наиболее распространены пластинчатая (ориентировочная) и развернутая РА.
Пластинчатую РА ставят на стекле. Используют ее как ускоренный метод обнаружения антител или идентификации микроорганизмов.
1. стандартные диагностические агглютинирующие сыворотки (АТ);
2. исследуемая чистая культура от пациента;
В исследуемой чистой культуре антигены (АГ) в виде частиц (микробные клетки, эритроциты и другие корпускулярные антигены), которые склеиваются антителами и выпадают в осадок.
Постановка ориентировочной реакции агглютинации ( РА ) на стекле с целью идентификации бактерий кишечной группы.
На предметное стекло наносят каплями:
1 -ая капля: — агглютинирующая сыворотка к возбудителям дизентерии ;
2 -ая капля: — агглютинирующая сыворотка к возбудителям брюшного тифа ;
(1-2 диагностические сыворотки)
3 -я капля: — физиологический раствор (контроль).
Добавляют в каждую каплю исследуемую чистую культуру бактерий. Перемешивают.
Результат : положительный — наличие хлопьев агглютината,
отрицательный — отсутствие хлопьев агглютината
Заключение: Исследуемые бактерии являются возбудителями брюшного тифа (определялись антигены).
Для определения АТ в сыворотке больного (серологический диагноз) используют стандартный микробный диагностикум , содержащий взвесь известных микробов или их антигенов АГ .
Определение групп крови системы АВО (реакция гемагглютинации (РГА)) – агглютинируют эритроциты.
Компоненты реакции: 
1. АГ (эритроциты крови) исследуемая кровь
2. АТ (эритротесты- цоликлоны)
-реагент Цоликлон анти-А (розовый)
-реагент Цоликлон анти-В (синий)
-реагент Цоликлон анти-АВ (бесцветный)
3. электролит (физиологический раствор)
1 . 
В лунки планшета наносится по одной капле (0,1 мл) цоликлона анти — А, анти — В и анти – АВ (для контроля).
Рядом с каждой каплей реагента наносится маленькую (0,05-0,01 мл) каплю исследуемой крови.
Затем капля цоликлона смешивается с каплей крови индивидуальной чистой стеклянной палочкой. 
-Реакция агглютинации развивается в течение первых 3-5 секунд при мягком покачивании пластинки.
— Результаты реакции учитываются через 2,5 — 3 минуты после смешивания капель. Слева направо в лунках анти-А, анти-В, анти-АВ.
Положительный результат-появление зернистого осадка (агглютината).
положительная РА (+) 
Отрицательный — осадка нет.
отрицательная РА(-) 
Анализ результатов. 
O ( I ) α β – агглютинации нет
A ( II ) β – агглютинация с анти-А
B ( III ) α – агглютинация с анти-В
AB ( IV )О – агглютинация с анти-А, с анти-В 
Схематичное изображение агглютинации.
Антигены АГ на эритроцитах (определяемые) + антитело АТ (цоликлон) диагностическая сыворотка
Учет агглютинации в планшетах
Реакция преципитации — иммунная реакция взаимодействия АГ в растворимом состоянии с АТ в физиологическом растворе.
При преципитации происходит образование макромолекулярного иммунного комплекса, что проявляется переходом прозрачного коллоидного раствора в непрозрачную суспензию, или преципитат.
Количество обоих реагентов должно быть в строго определенных соотношениях, так как избыток одного из них снижает результат.
Существуют различные способы постановки реакции преципитации.
1. Реакцию кольцепреципитации ставят в преципитационных пробирках с малым диаметром. В пробирку вносят иммунную сыворотку и осторожно наслаивают растворимый АГ. АГ и АТ смешиваются за счет теплового движения молекул, и они взаимодействуют. При положительном результате на границе двух растворов образуется кольцо непрозрачного преципитата.
2. Реакцию двойной иммунодиффузии по Оухтерлони проводят в агаровом геле, в лунки которого вносят по схеме либо раствор АГ, либо раствор АТ. АГ и АТ диффундируют в гель навстречу друг другу и при положительном результате реакции образуют иммунные комплексы, видимые как линии преципитации.
Реакция преципитации – это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах.
преципитирующая сыворотка (известное АТ-преципитин);
исследуемая сыворотка (неизвестный АГ-преципитиноген);
Реакцию преципитации ставят в или в специальных узких пробирках (реакция кольцепреципитации), или в чашках Петри в гелях, питательных средах и др.
Постановка и учет результатов реакции кольцепреципитации для обнаружения возбудителя сибирской язвы (Асколи реакция).
1. Исследуемый материал (кожа, шерсть, войлок, щетина, сукно, мясо, земля, испражнения животных и т. д.) кипятят в физ растворе5-45 мин. для получения изотонической вытяжки (экстракта). Фильтруют.
2. В пробирку наливают преципитирующую противосибиреязвенную сыворотку.
3. Осторожно наслаивают на нее исследуемый материал (экстракт).
В течение ближайших 10 мин. на границе между сывороткой и экстрактом в положительных случаях появляется кольцо помутнения (кольцепреципитация). Асколи реакция очень чувствительна и специфична
С ее помощью удается быстро выявить материалы, инфицированные сибирской язвой.
Реакция преципитации в агаре
Постановка и учет результатов реакции преципитации в агаре для определения токсигенности коринебактерий (возбудители дифтерии)
Ставится на фосфатно-пептонном агаре в чашке Петри.
1. Вдоль чашки посередине помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги, смоченной антитоксической сывороткой .
2. После подсушивания на расстоянии 1 см от края полоски бляшками диаметром 10 мм подсевают выделенные культуры . 
В одной чашке можно сеять от 3 до 10 культур, одна из которых, контрольная , должна быть заведомо токсигенной .
Посевы помещают в термостат.
Анализ проводят через 24-48-72 ч.
Положительный результат — (культура токсигенная) — на некотором расстоянии от полоски бумаги возникают линии преципитата , « стрелы-усики », которые хорошо видны в проходящем свете.
На рисунке представлена реакция преципитации в агаре на определение токсигенности дифтерийных палочек. Средние культуры не образовали «стрел-усиков», это не токсикогенные возбудители.
Штаммы возбудителя дифтерии могут быть токсигенными (продуцирующими экзотоксин) и нетоксигенными. Образование экзотоксина зависит от наличия в бактериях профага, несущего tox-ген, кодирующий образование экзотоксина.
При заболевании все возбудители дифтерии тестируются на токсигенность — продукцию дифтерийного экзотоксина с помощью реакции преципитации в агаре
Сложные серологические реакции ( 3–х компонентные:Aг+Ig+C):
Реакция связывания комплемента (РСК).
Реакцию проводят в два этапа.
На первом этапе АТ взаимодействуют с АГ и комплементом, на втором этапе добавляют индикатор — гемолитическую систему (смесь эритроцитов и антиэритроцитарной сыворотки).
При положительном результате на первом этапе АТ образуют с АГ иммунный комплекс, связывающий комплемент реакционной смеси.
В этом случае эритроциты гемолитической системы, добавленные на втором этапе, не разрушаются.
В противном случае несвязанный комплемент вызывает лизис индикаторных эритроцитов.
Для ее проведения необходимо пять ингредиентов: АГ, AT и комплемент (первая система), эритроциты барана и гемолитическая сыворотка (вторая система) (рис.1).
Реакция протекает в две фазы (рис. 3).
Первая фаза — взаимодействие антигена и антител при обязательном участии комплемента.
Вторая — выявление результатов реакции при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка). Разрушение эритроцитов гемолитической сывороткой происходит только в случае присоединения комплемента к гемолитической системе. Если же комплемент адсорбировался ранее на комплексе антиген-антитело, то гемолиз эритроцитов не наступает (рис).
Результат опыта оценивают (рис.2), отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках. Реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно, отрицательной — при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена («лаковая» кровь). 
Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне (++++, +++, ++, +).
Рис. 4. Постановка и результат РСК. 
Вывод: В исследуемой сыворотке выявлены антитела.
РСК позволяет выявить антитела к любому штамму одного и того же серотипа вируса.
Диагностическое значение имеет:
четырехкратное увеличение титра антител в парных сыворотках (в период эпидемии гриппа) ;
двукратное нарастание в сыворотках крови больных при характерной клинической картине.
Реакции с использованием метки :
Эти методы высокочувствительны. В качестве метки антигенов или антител применяют красители, радиоактивные изотопы, ферменты и др.
РИФ – реакция иммунофлюоресценции
Реакция иммунофлуоресценции основана на световой индикации комплекса антиген-антитело
Современное лабораторное исследование, в ходе которого ведется поиск специфических антител в крови либо антигенов к конкретным заболеваниям с целью выявления не только этиологии, но и стадии болезни.
Результаты ИФА могут выдаваться качественно и количественно.
В настоящее время ИФА применяется в следующих ситуациях:
1) поиск специфических антител к любому инфекционному заболеванию;
2) поиск антигенов каких-либо заболеваний (инфекционных, венерологических);
3) исследование гормонального статуса пациента;
4) обследование на онкомаркеры;
5) обследование на предмет наличия аутоиммунных заболеваний.
На рисунке твердофазный ИФА – известные АГ (слева) адсорбировн а на лунке планшета, (справа) на лунках планшета известные АТ
Преимущества метода ИФА:
1) Высокая специфичность и чувствительность метода ИФА (более 90%).
2) Возможность определения заболевания и отслеживания динамики процесса, то есть сравнивание количества антител в разных временных промежутках.
3) Доступность ИФА-диагностики в любом медицинском учреждении.
Относительный недостаток:Выявление иммунного ответа (антител), но не самого возбудителя., конъюгированных с ферментом-меткой.
Постановка ИФА (общий механизм):
Основу иммуноферментного анализа составляет иммунная реакция антигена и антитела с образованием иммунного комплекса: антиген-антитело, в результате которого происходит изменение ферментативной активности специфических меток на поверхности антител.
Компоненты реакции: 
1. АГ(АТ) известное – на лунке планшета.
2. АТ (АГ) исследуемое.
3. АТ с ферментом, специфичное комплексу АТ(АГ)-АГ(АТ)
4.хромогенный субстрат, взаимодействующий с фермент
Основные этапы проведения ИФА
1. На поверхности лунок планшета находится очищенный антиген определенного возбудителя. В них добавляется биологический материал пациента происходит специфическая реакция между этим антигеном и искомым антителом (иммуноглобулином). Образуется комплекс.
2. Добавляется конъюгант – АТ с ферментом. Конъюгант специфичен к комплексу АТ- АГ первого этапа. Фермент активизируется.
3. Добавляется субстрат и активный фермент взаимодействует с ним, изменяя бесцветный цвет раствора.
4. Добавляется стоп раствор для прекращения взаимодействия фермент-субстрат.
Источник
