Способы определения свертывания крови

ГРУППА КОМПАНИЙ ЭМКО, тел: +7 (495) 287-81-00, факс: +7 (495) 287-81-00

Зарегистрированы новые автоматы окраски АФОМК-12-25 и АФОМК-9-25 РУ № РЗН 2020/12847. Приборы могут комплектоваться принадлежностями для безопасной транспортировки стёкол. Препараты размещаются в штативы-вставки уже на пункте забора материала. Перегрузка предметных стёкол из штатива в штатив не требуется.

Группа компаний ЭМКО включает два предприятия: ООО ЭМКО, Москва; ООО МЛТ, ОЭЗ Дубна. Основное направление деятельности — разработка и производство приборов и реагентов для клинической лабораторной диагностики. Инженеры ГК ЭМКО разработали первый в России коагулометр и первый в России программируемый автомат окраски.

Основные группы изделий:

анализаторы показателей гемостаза (коагулометры);
автоматы окраски мазков (гематология, паразитология, цитология, гистология);
геофизические приборы (измеритель сопротивлений ЭНИКС-01 и измерительный генератор ЭНИКС-02).
краски и реагенты для цитологического скрининга и скрининга гемостаза

Сайты группы компаний ЭМКО:

romanowsky.ru — мемориальный сайт, посвященный выдающемуся русскому врачу, Романовскому Д.Л.
papanicolaou.ru — мемориальный сайт, посвященный основоположнику клинической цитологии Г. Папаниколау

Автоматы окраски АФОМК-9-25, АФОМК-12-25, АФОМК-16-25 производства ООО МЛТ сертифицированы в Европейском Союзе.

Глобальная стратегия по ускорению элиминации рака шейки матки (РШМ). Как она будет реализовываться в России?

Зарегистрированы новые автоматы окраски АФОМК-12-25 и АФОМК-9-25

В августе поступил в продажу популярный автомат АФОМК8-В-01 в новой модификации

ООО МЛТ начало серийные поставки продукции в Индию

При использовании материалов сайта гиперссылка обязательна.

Источник

Анализ на свертываемость крови

Сердечно-сосудистые болезни находятся по статистике ВОЗ в тройке лидеров среди различных причин смерти. Тромбы в сосудах являются одним из основных факторов развития ишемии сердечной мышцы, а также инфарктов и инсультов. То есть повышенная свертываемость крови провоцирует острые заболевания, которые приводят к тяжелым, часто необратимым осложнениям и гибели больного.

Причины нарушения свёртываемости крови

Генетические. Иногда механизм свертывания крови имеет врожденные дефекты, обусловленные мутацией в генах. Некоторые мутации передаются по наследству и приводят к заболеваниям, например, гемофилии.
Лекарственные. Прием препаратов, влияющих на свертывание крови (аспирин и другие нестероидные противовоспалительные препараты, антикоагулянты, фибринолитики).
Соматические. Возникают на фоне других заболеваний (болезни крови, заболевания печени, дефицит витамина К, массивная кровопотеря и т.д.).

Большинство причин нарушений свертываемости крови требует немедленного лечения. Для их обнаружения сначала необходимо обязательно сделать общий анализ крови на свертываемость крови. Нарушения процессов свертывания могут проявляться двумя путями: повышенной и пониженной свертываемостью крови. Опасность повышенной свертываемости крови объясняется высоким риском образования тромбов в сосудах и ухудшением либо полным прекращением кровоснабжения ткани или органа. Пониженная свертываемость крови, которая бывает врожденной и приобретенной, представляет особую опасность при травмах и операциях.

Последствия повышенной свёртываемости крови

При таких условиях значительно повышен риск образования тромбов. Воспаление тромбированных вен приводит к тромбофлебиту, сопровождающемуся:

болью;
отеком;
покраснением кожи над веной.

Тромбы в сосудах ведут к сужению их просвета и повреждению участков тканей из-за дефицита кровоснабжения. При полном прекращении тока крови по сосуду из-за тромба в ткани возникает участок, лишенный кровоснабжения, который называется очагом ишемии. В этом участке клетки быстро погибают и нормальная работа органа нарушается. Необратимые поражения мозга и сердца являются самыми опасными последствиями тромбоза. Еще одно коварное осложнение — отрыв тромба. Часто диаметр тромба бывает меньше диаметра сосуда, поэтому больной долгое время не подозревает о его наличии. Однако при травмах и сотрясениях тела, в начале приема лекарств, разжижающих кровь, а также при вставании на ноги после длительного нахождения в постели (например, после операций) тромб может оторваться и продолжить движение по кровотоку, пока не закупорит где-то просвет сосуда. Именно из-за таких тромбов развивается грозное и очень опасное осложнение — тромбоэмболия легочной артерии, которое может закончиться гибелью человека, если вовремя не оказать ему медицинскую помощь. Обнаружить их можно только проведением определенных исследований, включающих и общий анализ крови на свертываемость крови.

Последствия пониженной свёртываемости крови

При этом состоянии человек имеет повышенный риск кровотечения. Одно из распространенных последствий — желудочно-кишечное кровотечение на фоне имеющейся язвы. Кровопотеря при таких состояниях из-за длительности кровотечения может быть очень серьезной. При низкой свертываемости крови повышается риск внутренних кровотечений, которые часто бывают замечены слишком поздно. Поэтому необходимо проведение общего анализа крови на свертываемость крови перед любой операцией, а также на фоне лечения препаратами, обладающими эффектом разжижения крови (антикоагулянты, антиагреганты, фибринолитики и др.).

Кому необходимо определять свёртываемость крови

Чтобы снизить риск развития сосудистых катастроф и неожиданных кровотечений, необходимо периодически контролировать состояние свёртывающей системы крови лабораторным методом. Особенно важно это для:

людей старше 40 лет;
женщин в период менопаузы и после нее;
женщин во время беременности;
людей, которые регулярно принимают препараты, разжижающие кровь (аспирин);
больных, страдающих варикозной болезнью;
тех, кто готовится к операции и т.д.

Врач обязательно назначает на показатели свёртываемости крови при подозрении на гемофилию (обычно эта болезнь обнаруживается в раннем детском и молодом возрасте) либо при лечении с помощью фибринолитической терапии и антикоагулянтов уже имеющегося тромбоза.

Как проверить свёртываемость своей крови

Свертывание крови — сложный процесс, состоящий из нескольких разных звеньев и этапов. Поэтому анализ на свертываемость крови должен помогать оценить работу каждого составляющего звена. Свертывание крови происходит при взаимодействии многих факторов по цепочке. Результаты общего анализа крови на свертываемость крови помогают установить, работа какого из факторов нарушена, что облегчает дальнейшую диагностику и выбор лечения. Например, анализ на оценку АЧТВ (Активированное частичное тромбопластиновое время) помогает выявить нарушение работы «внутреннего» пути свертывания и установить склонность к кровотечению. А протромбиновое время позволяет оценить «внешний» путь свертывания крови, обнаружить нарушение работы печени и недостаток витамина К. Еще один важный показатель, который очень помогает врачам при планировании операций и оценке риска тромбозов (в том числе и в период беременности) — это анализ крови на Д-димер. Он дает возможность:

определить степень риска острых и тяжелых сердечно-сосудистых состояний;
спрогнозировать дальнейшее течение тромбоза;
наблюдать за результатами лечения в динамике.

Проведение общего анализа свертываемости крови — важное исследование, которое помогает значительно снизить риск неожиданных осложнений и смертность после болезней, операций, родов. Данные анализа дают врачу возможность ожидать объективных результатов от предстоящего лечения и контролировать его, а пациенту — шанс обезопасить себя от нежелательных последствий нарушений свертываемости крови.

Источник

Коагулограмма: все, что нужно знать о свертывании

Свертывание крови – процесс многоступенчатый, сложный и, при этом, чувствительный к действию целого ряда факторов. При этом симптомы «неполадок», как правило, долго не дают о себе знать. И анализ на свертываемость часто выявляет нарушения «случайно». Так кому же следует держать гемостаз «под присмотром»? И как понять показатели тем, кто уже проходит лечение?

Кому показан анализ

Исследование свертываемости крови, в первую очередь, показано тем, кто:

страдает от заболеваний печени или перенес гепатит в прошлом (поскольку большинство факторов свертывания синтезируются именно в печени);
страдает или имеет наследственную предрасположенность к тромбофлебиту и варикозу;
страдает от сердечно-сосудистых или аутоиммунных заболеваний (высокий риск воспаления сосудов и, как следствие, усиление тромбообразования);
принимает оральные контрацептивы или имеет избыток эстрадиола (женщины);
невынашивание беременности в личной истории пациентки

Не стоит исключать из внимания и значимые факторы риска, как курение, лишний вес, малоподвижный образ жизни, возраст старше 40 лет, частые перелеты и другие.

Ну и, конечно же, такой анализ обязателен перед любой операцией, а также для тех, кто уже принимает «противосвертывающие» препараты.

О чем говорят показатели

Набор «стандартной» коагулограммы (50.0.H94.203) включает определение:

АЧТВ,
Протромбина (время, МНО),
Тромбинового времени
Фибриногена.

Но что означают эти показатели?

1. АЧТВ, или активированное частичное тромбопластиновое время

Оценивает скорость образования сгустка крови после добавления к плазме специальных реагентов, и измеряется в секундах.

Иными словами, АЧТВ демонстрирует эффективность остановки кровотечения за счет плазменных факторов свертывания (как раз тех, что образуются в печени).

При этом, удлинение (повышение) показателя сигнализирует о риске кровотечений, а укорочение – тромбоза.

А особенно «актуален» анализ для людей, принимающих прямые антикоагулянты (гепарин и другие).

2. Протромбиновое время (ПВ)

Это временной отрезок, за который происходит образование нитей фибрина, то есть собственно предшественника тромба.

Показатель измеряется в % от нормы, которая составляет 70-120%.

Чем выше этот показатель – тем выше скорость образования тромба, а значит – и риск тромбоза.

А уменьшение ПВ – сигнал о склонности к кровотечениям.

3. МНО

По сути — расчетный показатель, призванный стандартизировать данные о протромбиновом времени, полученные на разной аппаратуре.

Такие «сложности» стали необходимостью в связи с тем, что МНО – базовый анализ для подбора и коррекции «противосвертывающих» препаратов (как например, варфарин). А данные, полученные на разной аппаратуре (в разных лабораториях) зачастую не давали возможности сравнения между собой.

Поэтому Международный комитет по стандартизации в гематологии и Международный комитет по тромбозу и гемостазу в 1983 году ввели в использование МНО.

И сегодня, его уровень для здорового человека находится на уровне 0,8-1.2. А для принимающих непрямые антикоагулянты – 2,0-4,0.

При этом, повышение МНО ассоциировано с риском кровотечений, а снижение менее 0,5 – может говорить о тромбозе.

4. Фибриноген

В отличие от предыдущих показателей, это непосредственно субстрат для образования тромба. То есть не показатель скорости, а вещество. Поэтому и нормы для фибриногена измеряются в граммах на литр.

Повышение фибриногена наблюдается не только при повышенном тромбообразовании, но и при многих воспалительных процессах (как способ организма ограничить распространение «причинного фактора» и разрушенных тканей). А также у тех, кто принимает оральные контрацептивы или имеет повышенный уровень эстрогенов, беременных, людей с повышенным холестерином и курящих.

А снижение показателя может говорить не только о риске кровотечений, но и о заболеваниях печени.

Разумеется, перечисленные показатели являются только «базой» для оценки «здоровья» свертывающей системы крови. И в случае обнаружения значимых отклонений могут понадобиться дополнительные маркеры.

Источник

Методы исследования свертывающей системы крови (Енцов Д.В.)

Методы исследования свертывающей системы крови

Для определения состояния гемокоагуляции используют несколько групп методов:

•ориентировочные (базисные) методы, характеризующие процесс свертывания в целом, отдельные его фазы, а также дающие возможность оценить внешний и внутренний механизмы коагуляции

•методы, позволяющие дифференцировать дефицит отдельных факторов свертывания крови

•методы, позволяющие выявить внутрисосудистую активацию системы свертывания крови

К базисным методам относятся:

1.определение времени свертывания крови

2.определение времени рекальцификации стабилизированной крови (плазмы)

3.протромбиновое время (протромбиновый индекс)

1. Время свертывания крови

1.1 Определение времени свертывания цельной нестабилизированной крови проводится непосредственно у постели больного.

Иглой без шприца пунктируют локтевую вену. Первые капли крови выпускают на ватный тампон и набирают по 1 мл крови в 2 сухие пробирки. Включив секундомер, ставят пробирки в водяную баню при температуре 37°С. Через 2-3 мин, а затем каждые 30 с. пробирки слегка наклоняют, определяя момент, когда кровь свернется. Определив время образования сгустка крови в каждой из пробирок, вычисляют средний результат.

В норме время свертывания составляет 5-10 мин.

Удлинение времени свертывания свидетельствует о значительных сдвигах в системе гемокоагуляции и чаще указывает на:

•выраженную недостаточность факторов, участвующих во внутреннем механизме коагуляции

•наличие в крови ингибиторов свертывания, в частности гепарина

1.2 Метод Моравица

В клинике до сих пор используется еще один упрощенный метод определения времени свертывания крови. Он применяется, в основном, для динамического контроля за состоянием гемокоагуляции при лечении прямыми антикоагулянтами.

На предметное стекло наносят каплю крови, взятую из пальца или мочки уха. Включив секундомер, каждые 20-30 секунд в каплю крови опускают тонкий стеклянный капилляр. Время свертывания определяют в момент появления первой тонкой нити фибрина при вытягивании капилляра из капли крови.

В норме свертывание крови составляет около 5 мин.

2. Активированное время рекальцификации плазмы

Метод основан на измерении времени свертывания тромбоцитарной плазмы при добавлении в нее оптимального количества кальция хлорида или каолина, что обеспечивает стандартизацию контактной активизации факторов свертывания.

В пробирку с раствором кальция хлорида или каолина, установленную в водяной бане при температуре 37°С, добавляют 0,1 мл плазмы и по секундомеру определяют время образования сгустка.

В норме время рекальцификации плазмы с кальция хлоридом составляет 60-120 с., с каолином — 50-70 с.

Изменения этого показателя неспецифичны и указывают лишь на общую тенденцию к гиперкоагуляции (укорочение времени рекальцификации) или к гипокоагуляции (увеличение показателя).

Удлинение времени рекальцификации может быть обусловлено:

•Недостаточностью большинства плазменных факторов свертывания (кроме факторов VII и XIII).

•Дефицитом тромбоцитарного фактора III (при выраженной тромбоцитопении или нарушении реакции высвобождения).

•Избыточным содержанием в плазме ингибиторов свертывания (гепарина)

3. Активированное частичное (парциальное) тромбопластиновое время (АЧТВ)

Принцип метода заключается в определении времени свертывания плазмы в условиях стандартизации не только контактной, но и фосфолипидной (тромбопластиновой) активации факторов свертывания. С этой целью к плазме добавляют смесь каолина и кефалина (тромбопластиновый активатор), а также кальция хлорид и по секундомеру определяют время свертывания плазмы.

В норме АЧТВ (кефалин-каолиновое время) составляет 35-50 с.

Уменьшение АЧТВ свидетельствует о гиперкоагуляции и склонности к тромбозам, увеличение — о гипокоагуляции крови.

АЧТВ чрезвычайно чувствительно к дефициту плазменных факторов свертывания, участвующих во внутреннем механизме свертывания (факторы XII, XI, IX, VIII) и не зависит от дефицита тромбоцитов или их функциональной недостаточности (в связи с добавлением кефалина).

АЧТВ удлиняется также при наличии в крови ингибиторов свертывания (гепарина) и может быть использован как чувствительный тест для контроля за лечением гепарином.

4. Протромбиновое время (ПВ, протромбиновый индекс)

Метод представляет собой еще одну модификацию определения времени рекальцификации плазмы при добавлении в нее тканевого тромбопластина человека или кролика, что приводит к «запуску» свертывания по внешнему механизму. Тканевой тромбопластин в комплексе с фактором VII и ионом Са 2+ активирует фактор X, входящий в состав «проактиватора протромбина».

В пробирку с 0,1 мл плазмы и 0,1 мл раствора тромбопластина, установленную в водяной бане при температуре 37°С, добавляют 0,1 мл раствора кальция хлорида и по секундомеру определяют время образования сгустка.

В норме протромбиновое время составляет 12-18 с. и во многом зависит от активности тканевого тромбопластина, использованного при исследовании. Поэтому в большинстве случаев для определения этого показателя одновременно по той же методике исследуют плазму донора и вычисляют так называемый протромбиновый индекс (ПИ):

где ПИ — протромбиновый индекс, ПBд и ПВб — протромбиновое время донора и больного, соответственно. В норме протромбиновый индекс составляет 90—100%. Чем больше протромбиновое время, свидетельствующее о гипокоагуляции крови, тем меньше значения протромбинового индекса.

Удлинение протромбинового времени (уменьшение протромбинового индекса) интегрально отражает недостаточность плазменных факторов, участвующих во внешнем механизме свертывания и в активации протромбина (VII, X, V), а также на конечных этапах коагуляции (I и II).

Наиболее частыми причинами такого изменения являются:

•Прием непрямых антикоагулянтов (фенилин, синкумор, неодикумарин и др.).

•Дефицит соответствующих витамин К-зависимых факторов свертывания (факторы II, VII, IХ, X) при тяжелых поражениях паренхимы печени (гепатит, цирроз, рак) и недостаточности витамина К (механическая желтуха, нарушения всасывания в кишечнике, дисбактериоз кишечника и т. п.).

•Дефицит фибриногена (гипофибриногенемия), являющегося К-независимым фактором свертывания (тяжелые поражения паренхимы печени и др.).

•Наличие феномена паракоагуляции, в частности, при ДВС-синдроме.

МНО (Международное нормализованное отношение, INR) — показатель системы свертывания крови.

•Основные показания к применению: лечение антикоагулянтами непрямого действия — варфарином, аценокумаролом и другими аналогами.

•МНО — показатель, рассчитывающийся при определении протромбинового времени.

•Определение МНО гарантирует возможность сравнения результатов при определении ПВ, обеспечивая точный контроль терапии непрямыми антикоагулянтами.

•Для диагностики нарушений свертывания крови используют показатель ПВ, выражающийся в секундах.

•В тех случаях, когда определение ПВ применяют для оценки проведения лечения варфарином, используется показатель МНО — международное нормализованное отношение (INR — International Normalized Ratio).

•Этот показатель позволяет выразить результаты ПВ с учетом использования в различных лабораториях коммерческих препаратов тромбопластина, используемого в определении ПВ.

•Такой подход гарантирует возможность сравнения результатов полученных в разных лабораториях и проводить более точный контроль при лечении антикоагулянтами непрямого действия.

•МНО вычисляется при делении ПВ пациента на значение нормального ПВ, далее результат возводится в степень, показатель которой равен международному индексу чувствительности (ISI или МИЧ — международный индекс чувствительности) тромбопластина:

МНО = (ПВ пациента/среднее нормальное ПВ)

•Доза антикоагулянта подбирается так, что бы поддерживать МНО на необходимом уровне, в зависимости от заболевания.

•Наиболее часто используемым антикоагулянтом непрямого действия в клинической практике является варфарин.

•Применять анализ целесообразно с одновременным определением АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время).

Референтные значения МНО:

•В каждом конкретном случае необходимо поддерживать МНО на определенном уровне. Дозы назначаемого препарата выбираются лечащим врачом.

•В норме: МНО = 0,8 — 1,15.

•При лечении венозного тромбоза: МНО = 2,0-3,0.

•Лечение артериальной тромбоэмболии, рецидивирующей системной эмболии: МНО= 3,0 -4,0.

•Профилактика пристеночных тромбозов при мерцательной аритмии: МНО=1,5-2.

Факторы, искажающие результат:

•Недостаточное наполнение пробирки кровью, недостаточное перемешивание крови с антикоагулянтом, а также несвоевременная отправка пробы в лабораторию.

•Гемолиз вследствие травматичной пункции вены или небрежного обращения с пробой крови.

Увеличение показателя МНО:

•Дефицит витамина К.

•Наследственный дефицит факторов II (протромбин), V, VII, X.

•Гипофибриногенемия (уровень фибриногена менее 50 мг/100 мл).

5. Тромбиновое время

Метод оценки тромбинового времени заключается в определении времени свертывания плазмы при добавлении в нее тромбина со стандартной активностью, который обладает способностью индуцировать превращение фибриногена в фибрин без участия других факторов свертывания крови.

В пробирку с 0,2 мл плазмы, установленную в водяной бане при температуре 37°С, добавляют 0,2 мл стандартного раствора тромбина и по секундомеру определяют время образования сгустка. В норме тромбиновое время составляет 15-18 с.

Определение тромбинового времени позволяет оценить конечный этап свертывания крови (превращение фибриногена в фибрин). Тромбиновое время, таким образом, зависит от концентрации фибриногена, его свойств и наличия в крови ингибиторов тромбина (гепарин, антитромбин III).

Причинами удлинения тромбинового времени являются:

•Афибриногенемия и гипофибриногенемия.

•ДВС-синдром и другие патологические состояния, сопровождающиеся феноменом паракоагуляции с нарушением процесса полимеризации фибрина и нарастанием концентрации в крови продуктов деградации фибрина (ПДФ).

•Тяжелые поражения белковосинтетичекой функции печени, сопровождающиеся снижением синтеза фибриногена.

•Увеличение в крови концентрации ингибиторов тромбина (антитромбина III, гепарина).

Определение тромбинового времени используется для контроля за лечением гепарином и фибринолитиками.

6. Аутокоагуляционный тест (АКТ)

Метод заключается в исследовании динамики образования и инактивации тромбина в разведенной в 20 раз и гемолизированной крови пациента при добавлении гипотонического раствора кальция хлорида. Оценивается свертывающая активность гемолизат-кальциевой смеси с помощью гемокоагулографа.

Гемолизированные эритроциты обеспечивают контактную и фосфолипидную активацию процесса свертывания (подобно каолину и кефалину при исследовании активированного частичного тромбопластинового времени). Таким образом, аутокоагуляционный тест оказывается чувствительным к нарушениям внутреннего механизма свертывания.

А — Свертывающая активность на 2-й мин инкубации, %

Нормальные величины = 15,5 ± 3,0

МА — Максимальная свертывающая активность, %

Нормальные величины = 100 ± 1,1

T1 — Время достижения 1/2 максимальной активности, мин

Нормальные величины = 3,7 ± 0,2

Т2 — Время достижения максимальной активности, мин

Нормальные величины = 9,5

Т — Время от начала инкубации до момен-та, когда активность снижается до 1/2 МА

Нормальные величины = 35

Увеличение значений T1 и Т2, а также уменьшение А и МА свидетельствуют о гипокоагуляции, которая может быть обусловлена:

•дефицитом факторов внутреннего механизма свертывания (XII, XI, IX, VIII)

•дефицитом факторов X и V («проактиватора протромбина»)

•дефицитом факторов конечного этапа коагуляции (I и II)

•избытком ингибиторов тромбина (гепарин, антитромбин III и др.)

Широкое распространение в клинической практике получил метод тромбоэластографии, который позволяет регистрировать свертывание крови и изменения упругости сгустка крови во времени (ретракцию и лизис).

Основной частью любого типа тромбоэластографа (гемокоагулографа) является кювета, в которую вносят исследуемую кровь. В кювету погружают стержень с диском или пластиной на конце, которая не касается ее стенок. Стержень связан с регистрирующим устройством тромбоэластографа. Специальное устройство придает кювете колебательно-вращательные движения, которые могут передаваться на стержень (и регистрирующее устройство), только когда в кювете, заполненной кровью, начнется образование нитей фибрина. По мере образования и уплотнения сгустка амплитуда колебаний стержня увеличивается и достигает максимума.

Предложено множество количественных показателей тромбоэластограммы, три из которых заслуживают внимания:

1.Время реакции (R) — время от начала исследования до начала свертывания крови (первых отклонений тромбоэластограммы от прямой линии).

2.Время коагуляции (К) — время от начала движений стержня прибора до момента, когда амплитуда тромбоэластограммы составит 20 мм.

3.Максимальная амплитуда (МА) тромбоэластограммы.

Считается, что время R характеризует в основном первую фазу коагуляции, а время К — интенсивность образования фибрина. Нормальные величины приведенных трех показателей тромбоэластограммы обычно устанавливают эмпирически для каждого прибора. В среднем у здоровых людей время реакции (R) составляет 4-10 мин, время коагуляции (К) — 5-7 мин, а максимальная амплитуда (МА) — 45-65 мин.

Для гиперкоагуляции крови характерно укорочение R, К и увеличение МА, а для гипокоагуляции — удлинение R и К и уменьшение МА.

Следует отметить, что в целом чувствительность тромбоэластографии к нарушениям гемокоагуляции достаточно низкая, сопоставимая с чувствительностью времени свертывания крови, а тромбоэластографические показатели лишь весьма приблизительно отражают отдельные стадии процесса коагуляции. Тем не менее, тромбоэластография может использоваться в клинике для динамического контроля за лечением антикоагулянтами.

Принципы оценки базисных методов диагностики нарушений коагуляционного гемостаза

Оценка свертывания крови с помощью описанных базисных тестов позволяет составить общее ориентировочное представление о процессе коагуляции крови. При этом следует иметь в виду, что такие показатели как время свертывания крови и время рекальцификации плазмы обладают весьма низкой чувствительностью и специфичностью, и, следовательно, информативностью: они изменяются, как правило, лишь при выраженных нарушениях коагуляции крови и не позволяют судить (хотя бы предположительно) о повреждениях отдельных ее механизмов и этапов.

Преимуществом в этом отношении обладают три базисных теста:

3.АЧТВ или АКТ (их изменения сходны)

Они позволяют судить не только о состоянии всей свертывающей системы в целом, но и о возможной недостаточности отдельных факторов свертывания.

•При дефиците фактора VII (проконвертина), участвующего только во внешнем механизме свертывания, удлиняется только протромбиновое время, а тромбиновый тест и АЧТВ остаются без изменения.

•При дефиците факторов XII, XI, IX, VIII и прекалликреина, участвующих только во внутреннем механизме коагуляции, изменяются АЧТВ (и АКТ), а протромбиновое и тромбиновое время свертывания остаются нормальными.

•При дефиците факторов X, V, II, на которых замыкаются оба механизма свертывания, нарушения обнаруживаются как в протромбиновом тесте, так и в АЧТВ. Тромбиновое время при этом не изменяется.

•Наконец, при нарушениях количества, структуры и свойств фибриногена (фактор I) изменения выявляются при выполнении всех трех базисных тестов. При этом целесообразно также оценить уровень фибриногена в сыворотке крови (см. ниже).

•При дефиците фактора XIII показания всех трех базисных тестов оказываются нормальными.

Дальнейшее уточнение механизмов нарушения коагуляции крови производят с помощью дифференцирующих тестов, подробно описанных в специальных руководствах.

8. Определение фибриногена

Наибольшее распространение в клинической практике получили два метода определения фибриногена:

1.Гравиметрический метод заключается в высушивании и взвешивании сгустка, который образуется при добавлении в плазму 0,2 мл стандартного раствора тромбина.

2.Колориметрический метод также основан на превращении фибриногена в фибрин путем добавления в плазму раствора тромбина. Фибриновый сгусток подвергают гидролизу, а в гидролизат добавляют биуретовый реактив (см. выше) и колориметрируют, определяя концентрацию белка.

Оба метода дают близкие результаты. Содержание фибриногена в плазме здорового человека составляет 2-4 г/л.

Уменьшение концентрации фибриногена наблюдается:

•при врожденной недостаточности фибриногена (афибриногенемия, гипофибриногенемия, некоторые варианты дисфибриногенемии)

•при тяжелых заболеваниях паренхимы печени (цирроз, рак, гепатит)

•при остром фибринолизе

Нередко встречается увеличение концентрации фибриногена. Наиболее частыми причинами гиперфибриногенемии являются:

•острые инфекционные заболевания

•острые и хронические воспалительные заболевания

•тромбозы и тромбоэмболии, в том числе у больных острым инфарктом миокарда, ишемическим инсультом и т. п.

9. Определение высокомолекулярных производных фибриногена

Наиболее важными в практическом отношении высокомолекулярными производными фибриногена являются:

1) Растворимые фибрин-мономерные комплексы (РФМК) — представляет собой высокомолекулярные растворимые комплексы фибрин-мономера с фибриногеном и с продуктами расщепления фибриногена/фибрина. В норме РФМК не обнаруживаются. Появление РФМК в плазме свидетельствует о нарушении процесса нормальной полимеризации фибрин-мономеров. РФМК плохо коагулируют под влиянием тромбина, обладая относительной тромбинрезистентностью

2) Продукты деградации фибриногена (ПДФ) — в небольших количествах образуются и в норме в результате расщепления фибрина, присутствующего в плазме и в отложениях, под влиянием плазмина (см. ниже). Повышение содержания ПДВ — признак усиливающегося внутрисосудистого свертывания крови или массивных тромбоэмболий, сопровождающихся активацией фибринолитической системы.

Определение растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК). Для выявления РФМК в клинике чаще используются так называемые паракоагуляционные тесты. Они основаны на феномене неферментативного свертывания РФМК: при добавлении к плазме, в которой содержатся РФМК, 50% раствора этанола или 1% раствора протамина сульфата из растворимых комплексов фибрин-мономера с продуктами расщепления фибриногена/фибрина и фибриногеном высвобождаются фибрин-мономеры, которые затем полимеризуются с образованием геля. Проба с 50% раствором этанола является более чувствительной. В пробирку набирают 0,15 мл 50% этанола и 0,5 мл плазмы. Пробирку встряхивают и помещают в штатив при комнатной температуре. Проба расценивается как положительная, если через 1-10 мин в пробирке образуется гель. Помутнение или появление небольшой зернистости является признаком отрицательной пробы (нормальный показатель). Проба с протамина сульфатом позволяет выявить не только полимеризацию фибрин-мономеров, высвобождающихся из РФМК, но и обнаружить осаждение ранних продуктов расщепления фибриногена/фибрина.

Перед началом исследования предварительно готовят 5 разведений 1% раствора протамина сульфата (в 5, 10, 20, 40 и 80 раз). В каждое из приготовленных разведений добавляют 0,2 мл плазмы. Пробирки оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Оценка результатов проводится так же, как и в пробе с этанолом. В норме отрицательный результат обнаруживают во всех разведениях протамина сульфата. Если хотя бы в одном из разведений образуется гель, результат оценивается как положительный.

Положительная проба с этанолом, а также положительный результат протаминсульфатной пробы в первых 1-2 разведениях свидетельствует о наличии в плазме РФМК. Образование геля во всех разведениях протамина сульфата больше характерно для повышения уровня ранних продуктов расщепления фибриногена/фибрина.

Положительные результаты обеих проб встречаются при ДВС-синдроме или массивных тромбозах и тромбоэмболиях, сопровождающихся активацией системы фибринолиза.

Определение продуктов деградации фибрина (ПДФ). Для определения ПДФ в крови используют различные иммунологические и неиммунологические методы. Наиболее простым из них является проба с протамина сульфатом. В пробирку набирают 0,4 мл свежей сыворотки крови и добавляют 0,1 мл 1% раствора протамина сульфата. Помутнение или мелкую зернистость оценивают как отрицательный результат (норма), а образование геля, хлопьев или нитей фибрина — как положительный, свидетельствующий о повышении содержания ПДФ в сыворотке крови больше 0,015 г/л.

В основе иммунодиффузного метода определения ПДФ лежит образование дуг преципитации на агаровой пластине, на которую наносят на определенном расстоянии друг от друга исследуемую и антифибриногеновую сыворотки. Обычно используют стандартную антисыворотку, которую помещают в центральные лунки на агаровой пластинке. В периферические лунки вносят исследуемую сыворотку в различных разведениях (в 2, 4, 8, 16 и 32 раза). Результат определяют через сутки инкубации при комнатной температуре. При повышении в сыворотке ПДФ более 0,016-0,020 г/л на агаровой пластинке определяются дуги преципитации. Если известна чувствительность стандартной антифибриногеновой сыворотки, иммунодиффузный метод позволяет количественно определять содержание ПДФ в исследуемой сыворотке.

Повышение концентрации ПДФ в сыворотке крови более 0,015 г/л чаще всего наблюдается:

•при массивных тромбозах и тромбоэмболиях, сопровождающихся активацией фибринолиза

•при лечении фибринолитическими препаратами

Источник