Определение микробного числа воздуха.
Определение количества бактерий осуществляется седиментационным или аспирационным методами.
Седиментационный метод основан на естественном осаждении бактерий из воздуха на чашку Петри с питательной средой и последующим выдерживанием в термостате в течение двух суток при температуре 37°С и подсчетом колоний, выросших за это время на всей площади чашки.
Принцип аспирационного метода — аспирация определенного объема воздуха с высеванием содержащихся в нем бактерий на поверхность
Микробное число воздуха – это количество колониеобразующих микроорганизмов, выросших на мясо-пептонном агаре (МПА) при 37°С в течение 48 часов при посеве 1 м 3 воздуха.
Определение микробного числа воздуха.
В прибор Кротова помещается чашка Петри с мясопептонным агаром, отбирается проба воздуха со скоростью 20 л/мин. в течение 20 минут, чашка помещается в термостат на 48 часов при температуре 37 градусов.
Санитарная оценка ведётся путём сравнения микробного числа с допустимой обсеменённостью воздуха того или иного помещения.
Пример: скорость отбора пробы воздуха равна 20 л/мин., продолжительность отбора пробы воздуха 25 минут, атмосферное давление равно 755 мм рт. ст., температура воздуха рана 20°С, через 24 часа на чашке Петри выросло 60 колоний микроорганизмов. Рассчитать микробное число воздуха.
1.Определяем, из какого объёма воздуха выросли колонии:
Vt = 20 л/мин. × 25 минут = 500 л = 0,5 м 3 .
2.Приводим воздух к нормальным условиям по формуле или по таблице.
V0 = 
V0 = 
= 0,46 м 3 .
3. Далее определяем микробное число, используя пропорцию:
В 0,46м 3 ― выросло 60 колоний
В 1,0 м 3 ― выросло Х колоний
МЧ = 1,0 х 60 / 0,46 =130
Тема: «Исследование и санитарная оценка вентиляции»
Содержание занятия
Одним из способов обеспечения необходимого качества воздуха замкнутых помещений является оборудование их вентиляцией. Вентиляция – это, с одной стороны, проветривание помещений при помощи особых устройств, с другой стороны – система таких устройств.
1) Естественная вентиляция. Она осуществляется через поры в строительных материалах, через форточки, фрамуги, окна, двери в силу разного давления атмосферного воздуха на наветренной и подветренной сторонах зданий, в силу разной плотности тёплого и прохладного воздуха. С целью усиления естественной вентиляции создают сквозное проветривание, открывая окна или двери на противоположных сторонах помещений. Этому же служат дефлектры, устанавливаемые на крышах зданий над вытяжными каналами.
2) Искусственная вентиляция. Она осуществляется с помощью различных побудителей движения воздуха. Различают несколько разновидностей искусственной вентиляции (табл. 1).
| Вентиляция | ||
| Естественная вентиляция | Искусственная вентиляция | |
| Приточная вентиляция | Вытяжная вентиляция | Приточно-вытяжная вентиляция: |
| с преобладанием притока над вытяжкой | с преобладанием вытяжки над притоком | приток равен вытяжке |
Показатели, характеризующие вентиляцию:
— скорость движения воздуха;
— направление движения воздуха.
Объём вентиляции— это объём воздуха, выраженный в кубических метрах, поступающий или удаляемый из помещения в течение одного часа.
Кратность воздухообмена — это число, показывающее, сколько раз в течение одного часа сменяется воздух в помещении. Кратность воздухообмена рассчитывается отношением объёма вентиляции к объёму помещения.
Направление движения воздуха — воздух должен двигаться из чистых помещений в менее чистые. Например, из операционной в предоперационную, из палаты в коридор, из коридора в туалет, из цеха с загрязнённым воздухом создаётся вытяжка и т.д.
Скорость движения воздуха — движения воздуха в помещениях должна быть в пределах от 0,1 до 0,4 м/сек.
Кратность воздухообмена в помещении можно рассчитать, если:
а) измерить площадь форточки, фрамуги, открытого окна или суммарную площадь открытых устройств;
б) измерить объём проветриваемого помещения;
в) установить продолжительность времени, на которое ежечасно открываются для проветривания те или другие устройства (окна, форточки или что-то другое).
Пример. Площадь открытого окна равна 2 м 2 , скорость движения воздуха в проёме окна равна 0,7 м/с, в течение каждого часа окно открывается на 15 минут (15 мин./час), площадь помещения равна 75 м 2 , высота помещения равна 3 м. Необходимо рассчитать фактическую кратность воздухообмена в данном помещении.
Расчёт можно представить в виде одной формулы, но для понимания лучше это сделать последовательно.
1. Определяем объёмную скорость движения воздуха в проёме открытого окна.
V = 0,7 м/с × 2 м 2 = 1,4 м 3 /с.
2. Рассчитываем, какой объём воздуха поступает в это помещение в течение одного часа. Так как ежечасно окно открывается на 15 минут, то за это время в помещение войдёт
1,4 м 3 /с × 60 мин. × 15 мин./час = 1260 м 3 /час.
Это и есть объём вентиляции.
3. Рассчитываем объём помещения.
V = 75 м 2 × 3 м = 225 м 3 .
4. Чтобы рассчитать кратность воздухообмена, остаётся объём вентиляции разделить на объём помещения. Определяем кратность воздухообмена (Кр.в.о).
Кр.в.о.= 
Источник
ОБЩАЯ И ПИЩЕВАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ ЧАСТЬ I — Л. В. Красникова — 2016
11. ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОФЛОРЫ ВОЗДУХА ПОМЕЩЕНИЙ
Цель работы: ознакомиться с методами микробиологического исследования воздуха помещений.
Оборудование, реактивы: аппарат Кротова, стерильные чашки Петри, питательные среды — мясопептонный агар, сусло-агар.
Воздух производственных помещений на предприятиях пищевой промышленности может стать источником инфицирования посторонними микроорганизмами сырья и готовой продукции. Обычно в воздухе находятся различные микрококки, сарцины, неспорообразующие палочки, дрожжи, споры бактерий и мицелиальных грибов, могут встречаться и болезнетворные микроорганизмы.
При микробиологическом исследовании в 1 м воздуха определяют общее количество микроорганизмов, наличие плесневых грибов, а при необходимости — группу санитарно-показательных микроорганизмов: гемолитический стрептококк (посев на кровяной агар) и золотистый стафилококк (посев на желточно-солевой агар).
Для определения количества микроорганизмов в воздухе используют различные методы. Наиболее распространенными являются седиментационный и аспирационный методы.
11.1. Седиментационный метод
Седиментационный метод (метод Коха) основан на оседании пылинок и капель вместе с микроорганизмами на поверхность питательной среды в открытых чашках Петри. Контроль воздуха помещений проводят следующим образом. Готовят две стерильные чашки Петри. Одну из них заливают расплавленным мясопептонным агаром (МПА), другую — сусло-агаром (СА). После застывания агара чашки переносят в исследуемое помещение, открывают крышки, сдвигают их на края бортиков так, чтобы вся поверхность питательной среды была открыта полностью. Чашки оставляют открытыми в течение 5, 10 или 15 мин в зависимости от степени загрязненности воздуха. Затем чашки закрывают, переворачивают вверх дном и помещают в термостат.
Внимание! Если чашки не переворачивать вверх дном, то конденсационная влага, выделяющаяся из агаризованной среды, будет попадать с внутренней стороны крышки на поверхность среды и размывать колонии микроорганизмов.
Чашки с МПА выдерживают при температуре 37 °С в течение 24 ч, а чашки с СА — при 30 °С в течение 48 ч.
Для определения количества микроорганизмов в 1 м 2 воздуха пользуются формулой В.Л. Омелянского, согласно которой на поверхность чашки площадью 100 см 2 оседает в течение 5 мин столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 дм 3 воздуха:
X = а • 100 • 5 • 100/ST,
где а — число колоний, выросших на чашке; 100 — пересчет площади чашки на 100 см 2 ; 5 — экспозиция чашки по Омелянскому, мин; 100 — пересчет на 1 м 3 воздуха; S — площадь чашки Петри (78,5 см 2 ); Т — время экспозиции открытой чашки, мин.
11.2. Аспирационный метод
Аспирационный метод (метод Кротова) основан на использовании щелевого аппарата конструкции Ю. А. Кротова. Прибор, смонтированный в портативном ящике, состоит из узла для отбора пробы, куда на специальную площадку помещают чашку Петри без крышки, электромотора, вентилятора и ротаметра. Вентилятор, вращаясь с частотой 4-5 тыс. об/мин, засасывает воздух, струя которого ударяется о поверхность питательной среды в чашке Петри, оставляя на ней мироорганизмы. Воздух выходит из прибора через ротаметр. Для равномерного распределения микроорганизмов на поверхности среды диск с чашкой вращается с частотой 60 об/мин. Скорость протягивания воздуха составляет 25 дм 3 /мин. При определении общей численности бактерий количество пропущенного воздуха должно составлять 100 дм 3 . Засеянные чашки вынимают из аппарата, закрывают их крышками, помещают на 24 ч в термостат при температуре 37 °С, затем вынимают и оставляют при комнатной температуре на 24 ч. Подсчитывают число выросших колоний и производят перерасчет на 1 м воздуха:
где а — количество выросших на чашке колоний; V — объем пропущенного через прибор воздуха; 1000 — искомый объем воздуха, дм 3 .
Кроме количественной, дается качественная характеристика микрофлоры воздуха. Для этого проводят описание колоний бактерий, выросших на чашках Петри, и готовят микроскопические препараты из этих колоний. Описание колоний бактерий проводят, как это указано в разд. 5.3.
Результаты исследования оформляют в виде таблицы по форме табл. 11.1, микроскопические препараты из колоний зарисовывают в тетрадь.
Таблица 11.1. Изучение морфологии колоний бактерий, выросших на МПА
Источник
4.Определение микробного числа воздуха
Методы микробиологического исследования воздуха подразделяют на седиментационные и аспирационные. Наиболее простым является седиментационный метод Коха: стерильные чашки Петри с плотной питательной средой открывают в местах отбора проб воздуха и выдерживают в течение определенного времени (5-30 мин), после чего закрывают и термостатируют.
По количеству выросших колоний подсчитывают микробное число воздуха, пользуясь правилом Омелянского, в соответствии с которым считают, что на поверхность питательной среды площадью 100 см2 в течение 5 мин оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 л воздуха. Каждая микробная клетка дает начало одной колонии. Зная количество выросших колоний и время экспозиции, вычисляют количество микробов, содержащихся в 1 м 3 (1000 л) воздуха.
Для определения микробной загрязненности воздуха расплавляют на водяной бане стерильные среды МПА и СА и разливают каждую в 3 стерильные чашки Петри (всего 6 чашек). Чашки ставят в месте отбора проб и открывают на 5, 10 и 15 мин. Время выдержки отмечают на крышке чашки.
Затем чашки с МПА термостатируют при 37° С 48 ч, а с СА — при 24° С 6-7 суток, перевернув их вверх дном. Подсчет колоний ведут на следующем занятии.
5. Определение микробного числа воды
Микробное число воды — это общее количество микроорганизмов, содержащееся в 1 мл воды. Для санитарно-микробиологического исследования водопроводной воды пробы берут из уличных водоразборов и кранов внутренних водопроводов. Краны обжигают, затем полностью открывают и спускают воду 10 мин., а затем отбирают пробы воды с соблюдением требований асептики, не смачивая пробки, в количестве не менее 0,5 л. Если вода подвергалась хлорированию, то ее собирают в колбы, содержащие 2 мл 1,5%-ого стерильного раствора тиосульфата натрия. При посеве в агаризованную среду 1 мл воды вносят в пустую стерильную чашку Петри, куда затем наливают 10-12 мл расплавленного МПА (45° С) и тщательно перемешивают. После застывания агара посевы инкубируют при 37° С 24 ч. Из одной пробы воды засевают 3 параллельных чашки и не только на МПА, но и на сусло — агар для выявления роста дрожжей и грибов, в этом случае посевы инкубируют 2-З суток при температуре 24° С.
6. Определение микробной загрязненности предметов обихода и рук
Для анализа микробной загрязненности столов, оборудования, полотенец, халатов, рук персонала используют тампонный метод. Для этого готовят ватные тампоны, стерилизуют их, погружают в пробирки с 2 мл стерильной воды или изотонического раствора хлорида натрия, при этом тампон не должен касаться поверхности жидкости, смачивают тампон непосредственно перед взятием проб. Для отбора проб с плоских крупных поверхностей (столы) используют трафареты из проволоки или жести, которые предварительно стерилизуют фламбированием; затем накладывают их на поверхность стола, производят смыв влажным тампоном (салфеткой) с поверхности 100 см2, ограниченной трафаретом; тампон помещают в пробирку, добавляют еще 8 мл жидкости и тщательно прополаскивают тампон (салфетку) с последующим отжимом его.
Общую микробную загрязненность определяют, засевая 1 мл смыва, в глубину расплавленного МПА в чашке Петри, как это описано для определения микробного числа воды. Посевы выращивают сутки при 37° С, подсчитывают количество выросших колоний и определяют общую микробную загрязненность данного объекта. Для выявления дрожжей и грибов делают посев на сусло-агар.
Смывы с рук получают, тщательно протирая ладони, межпальцевые и подногтевые пространства влажным стерильным тампоном на деревянной пилочке. Тампон погружают в ту же пробирку, в которой он смачивался, добавляют еще 8 мл стерильной воды. Смывы с поверхности предметов содержатся в 10 мл стерильной воды (2 мл для увлажнения салфетки, 8 мл доливают к смывам), поэтому исходный смыв уже разведен 1:10. Для приготовления разведения 1:100 1 мл исходного смыва (1:10) помещают в пробирку и доливают к нему 9 мл стерильной водопроводной воды. Берут две стерильные чашки Петри, нумеруют их со стороны дна (№ 1 и 2). В первую чашку вносят 1 мл исходного разведения смыва (1:10), во вторую — 1 мл разведения 1:100. Заливают в каждую чашку 15-30 мл расплавленного и охлажденного до 35° С МПА. После застывания агара посев термостатируют при 37° С сутки. Параллельно ведут посев на 2 чашки со стерильным СА. Этот посев выдерживают при 24° С 4- 5 суток.
В отчете по данной работе указать классификацию и способы стерилизации питательных сред, этапы подготовки микробиологических материалов для количественного учета чашечным методом, схему подготовки разведении и посева, описать конкретную задачу.
Вопросы для самоконтроля
Что называется чистой культурой микроорганизмов?
Каково назначение чистых культур микроорганизмов?
Как выделяют чистые культуры по методу Коха?
Как выделяют чистые культуры по методу Дригальского?
Какие счетные камеры вам известны?
Что из себя представляет счетная камера Горяева?
Из каких этапов складывается процесс изготовления исследуемого препарата для проведения количественного учета с помощью счетных камер?
Каковы размеры бактериальных клеток?
Способы измерения микроорганизмов.
Как определить цену окуляр-микрометра?
Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.
Источник
