Способы определения количества эритроцитов крови

Взятие крови на эритроциты. Подсчет эритроцитов в крови.

У стройство камеры Горяева.

Камера Горяева имеет 2 сетки, и это позволяет одновременно произвести подсчет и эритроцитов и лейкоцитов. Камера изготовлена из толстого стекла, имеет глубину 0,1мм и площадь сетки камеры – 9 мм 2 .

Подготовка счетной камеры Горяева

Протереть корпус камеры с сеткой и покровное стекло насухо

Притереть покровное стекло к поверхности камеры Горяева до появления «радужных колец» (колец Ньютона)

Пипеткой отобрать каплю разведенной крови из пробирки, предварительно перемешав содержимое и поднести пипетку к краю покровного стекла. Камера заполняется по принципу капиллярности.

Кровь должна заполнить равномерно все пространство камеры с сеткой.

Камеру оставляют на 1-2 минуты для оседания форменных элементов, и затем производят подсчет с помощью микроскопа при малом увеличении (объектив х 8, окуляр х 10), конденсор опущен, диафрагма закрыта).

Источники ошибок при подсчете форменных элементов крови.

Образование сгустка. Взятие крови следует производить быстро и ловко, т.к. образование сгустка приводит к снижению количества форменных элементов.

Образование пузырька воздуха в счетной камере Горяева

Неправильное притирание покровного стекла искажает объем камеры и, следовательно, результат исследования.

К подсчету форменных элементов приступают через 1-2 минут после заполнения камеры

Недоброкачественность разводящей жидкости может привести к разрушению клеток

Недостаточное количество подсчитанных квадратов, нарушение техники подсчета в квадрате.

Устройство сетки камеры Горяева

Правила подсчета форменных элементов в сетке камеры Горяева.

Реактивы и оборудование:

0,9% р-р хлорида натрия

пипетка на 5 мл

Эритроциты – это красные кровяные тельца, их диаметр составляет 7,5 – 8,3 мкм. Нормальные показатели эритроцитов в крови составляют для мужчин 4,0 – 5,1 х 10 12 /л, у женщин – 3,7 – 4,7 х 10 12 /л.

Для подсчета эритроцитов кровь разводят в 200 раз. В сухую пробирку отмеривают 4 мл разводящей жидкости – 0,9% р-ра хлорида натрия. Пипеткой Сали набирают 0,02 мл крови. Обтирают носик пипетки сухой ваткой и вносят кровь на дно пробирки с разводящей жидкостью, затем пипетку Сали промывают в верхнем слое жидкости (3 раза). Содержимое пробирки перемешивают и оставляют стоять в штативе до момента счета. Рекомендуется считать эритроциты в ближайшие 2-3 часа после взятия крови, а при анемиях – сразу после взятия, так как эритроциты могут разрушиться.

Подсчет эритроцитов в 1 литре крови производят в счетной камере Горяева. Подсчет производят в 5 больших квадратах, разделенных на 16 маленьких по диагонали сетки камера Горяева (80 малых квадратов). Объем 1 малого квадрата составляет 1/4000 мкл. Разведение крови составляет 200 раз (4 мл 0,9% р-ра хлорида натрия и 0,02 мл крови), площадь сетки камеры Горяева 9 мм 2 , глубина камеры 0,1 мм.

Расчет количества эритроцитов в 1 литре крови производят, исходя из разведения крови, числа сосчитанных квадратов, объема 1 малого квадрата по формуле:

где: Х – это количество эритроцитов сосчитанных в камере Горяева.

Сокращенная формула подсчета эритроцитов в 1 литре крови:

Эритроциты = Х х 10 000 х 10 6 /л

Источник

Способы определения количества эритроцитов крови

Эритроциты (красные кровяные клетки) – самые многочисленные клетки крови, содержащие гемоглобин. Их основная функция – доставлять кислород к тканям и органам.

Определение количества эритроцитов является неотъемлемой частью общего анализа крови и отдельно не производится.

Число эритроцитов, количество эритроцитов, подсчет количества эритроцитов.

Синонимы английские

Red blood cell count, RBC count, RCC, red cell count, erythrocyte count, red count.

*10 12 /л (10 в ст. 12 на литр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную, капиллярную кровь.

Общая информация об исследовании

В ходе этого теста подсчитывается количество эритроцитов в определенном объеме крови – в литре или в микролитре.

Эритроциты, которые образуются в костном мозге, доставляют кислород к органам и тканям, а также способствуют переносу углекислого газа от органов и тканям к легким, где он выдыхается. Это происходит за счет того, что они содержат белок гемоглобин, который легко вступает в связь с кислородом и углекислым газом.

Изменение количества эритроцитов, как правило, сопряжено с изменениями уровня гемоглобина. Когда количество эритроцитов и уровень гемоглобина снижены – у пациента анемия, когда повышена – полицитемия.

В норме продолжительность жизни эритроцита – около 120 дней. Организм старается поддерживать примерно одинаковое число циркулирующих эритроцитов. При этом старые эритроциты уничтожаются в селезенке, а новые образуются в костном мозге.

Если баланс между образованием и разрушением эритроцитов нарушается из-за потери эритроцитов, их разрушения или уменьшения их образования, то развивается анемия. Наиболее частые причины потери эритроцитов – это острое или хроническое кровотечение либо гемолиз (разрушение в кровяном русле). Организм возмещает такие потери, увеличивая производство эритроцитов в костном мозге. Этот процесс регулирует гормон эритропоэтин, образующийся в почках.

Снижаться продукция эритроцитов может, когда нарушается нормальная работа костного мозга. Причиной подобного нарушения может быть инфильтрация мозга опухолевыми клетками или угнетение его функции под воздействием радиации, химиотерапии, из-за нехватки эритропоэтина (образующегося в почках вещества, которое стимулирует образование эритроцитов) или из-за недостатка веществ, необходимых для образования гемоглобина (железа, витамина B₁₂, фолиевой кислоты).

Снижение производства эритроцитов приводит к уменьшению их циркуляции в кровяном русле, недостатку гемоглобина и его способности переносить кислород, а следовательно, к слабости и утомляемости.

В свою очередь, число эритроцитов увеличивается при более активной работе костного мозга. К этому могут приводить разные причины, например чрезмерный уровень эритропоэтина, повышающее число эритроцитов хроническое расстройство (истинная полицитемия) или курение.

Для чего используется исследование?

• Тест на эритроциты, вместе с гемоглобином и гематокритом, применяют, чтобы выявить любые варианты анемии или полицитемии.
• Эти показатели обычно входят в так называемый клинический (общий) анализ крови. Кроме того, он включает в себя определение различных характеристик эритроцитов (формы, размеров, объема), которые, как правило, позволяют уточнить вариант анемии.

Когда назначается исследование?

Обычно исследование входит в рутинный общий анализ крови, который делается как планово, так и при различных болезнях и патологических состояниях, перед хирургическими вмешательствами.

Повторно его обычно назначают пациентам, страдающим от кровотечений или хронической анемии.

Что означают результаты?

Возраст

Пол

Эритроциты, *10^12/л

Источник

Работа № 3. Определение количества эритроцитов в крови

3.1. Подсчет количества эритроцитов в камере Горяева

Принцип метода состоит в подсчете эритроцитов в камере Горяева. Для уменьшения концентрации форменных элементов и создания удобной для подсчета их концентрации кровь предварительно разводится стандартным образом.

Ход работы

Пипеткой отмерьте 4 мл разводящего раствора (3,5% раствор NaCl) и вылейте в сухую пробирку. Капилляр Сали обработайте раствором цитрата натрия.

Из прокола пальца (работа № 1) выпустите свежую каплю крови, приставьте к ней кончик капилляра Сали и наполните его до отметки 0,02. Это соответствует объему 0, 02 мл или 20 мкл. Вытрите кончик капилляра и выпустите кровь в пробирку с разводящим раствором. Полученное таким образом разведение крови — 1:200.

После тщательного перемешивания раствора крови небольшой каплей заполните подготовленную — с притертым стеклом камеру Горяева. Камеру перед заполнением промойте водой и насухо вытрите. На участок камеры, где нанесены сетки, уложите обезжиренное покровное стекло, при этом нижняя поверхность камеры должна находиться на третьих пальцах обеих рук, двумя вторыми пальцами придерживайте ее спереди. Двумя пальцами притрите покровное стекло, плавно продвигая его по поверхности прямоугольных пластинок до появления цветных колец Ньютона в местах соприкосновения покровного стекла с поверхностью пластинок камеры.

Каплю исследуемой жидкости пипеткой поместите перед щелью, образованной покровным стеклом и пластинкой камеры Горяева с нанесенной сеткой. Капля должна заполнить камеру самотеком (под действием капиллярных сил). Следите, чтобы в пространстве над сеткой не было пузырьков воздуха и избытка жидкости.

До начала подсчета оставьте счетную камеру на 1 — 2 мин для осаждения форменных элементов. Камеру положите на столик микроскопа и настройте его на малое увеличение (объектив 8 — 9, окуляр 10 или 15). Подсчет производите при несколько опущенном конденсоре. Хорошую контрастность обеспечивает фазово-контрастное устройство. Эритроциты считайте в пяти больших квадратах, состоящих из 16 малых (5  16 = 80 малых), расположенных по диагонали. Для записи результатов рекомендуется предварительно расчертить на листе 5 больших квадратов, разлинованных 4х4 и записывать найденное число эритроцитов в каждую клеточку. При подсчете необходимо помнить правило буквы «Г».

Подсчитав число эритроцитов в 80 маленьких квадратах (N) рассчитывают число клеток в 1 мкл (мм 3 ) крови (X). Для этого учитывается разведение в 200 раз, объем камеры над одним маленьким квадратиком 1/4000 мкл и то, что клетки подсчитывались в 80 таких квадратах. Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

Полученное количество эритроцитов можно также выразить в количестве на 1л крови (умножением полученного количества на 10 6 ), что является стандартной размерностью этого показателя.

Рекомендации по оформлению протокола работы. Выводы делаются исходя из того, что в норме количество эритроцитов должно составлять: 3,6-4,5 х 10 12 кл/л для женщин; 4,5 — 5 х 10 12 кл/л — для мужчин. После небольшой нагрузки – 5 — 5,5 х 10 12 кл/л.

Сразу после рождения количество эритроцитов составляет около 6,0 х 10 12 кл/л (колебания в пределах 5,4 — 7,2 х 10 12 кл/л). С конца первых — начала вторых суток жизни обычно происходит снижение числа эритроцитов в крови, наиболее выраженное на 5 — 7-й день. Минимального значения этот показатель достигает к 2 — 3 мес, а затем несколько увеличивается и в дальнейшем (с 5 — 6-го месяца) поддерживается на уровне взрослых.

Если количество эритроцитов выше нормы, то это явление называется эритроцитоз, а если меньше, то эритропения или анемия. Увеличение количества эритроцитов в крови (эритроцитоз) встречается при гемоконцентрации (ложный эритроцитоз), а также при усилении эритропоэза на фоне неизменной интенсивности гемолиза (истинный эритроцитоз). Уменьшение количества эритроцитов в крови может наблюдаться при гемодилюции (ложная эритропения).

Источник

Способы определения количества эритроцитов крови

В настоящее время методы изотопического разжижения чаще применяются для точного измерения объема эритроцитов в кровообращении (эритроцитной массы), а путем отведения — общего объема крови. Эти методы легко применяются и значительно точнее тех, которые используют окрашенные вещества.

В целях определения массы эритроцитов используется радиоактивный хром (Cr51) в виде хромата натрия. Cr51 излучает лучи гамма, энергия которых равняется 0,32 МЭВ, при этом он отвечает некоторым благоприятным условиям, таким как, слабая токсичность в отношении марки руемых им клеток; эмиссия сильная и способствует измерению на небольших объемах крови, также внешнему измерению; довольно короткий период полураспада (27,8 дней).

Метод заключается в следующем. Примерно 20 мл крови, отобранной на противосвертывающем веществе, маркируется достаточным количеством индикатора, с таким расчетом чтобы ввести, равную 0,3—0,5 микрокюри активность на каждый килограмм веса тела. Кровь подвергается инкубации в течение 30 мин. при температуре 37°С. Эритроциты промытые, соляным физиологическим раствором, инъецируются после точного определения объема.

Сохранить 1 мл введенных эритроцитов, равно как и использованный для инъекции шрпиц. Отбираются три пробы крови спустя 10, 20 и 30 минут после инъецирования. Из каждой пробы приготовляется гематокрит и гемоли-зуется 1 мл цельной крови, сапонином.

Объем эритроцитов расчитывается по формуле: Объем эритроцитов (в мл) = (R-r)xHct/P, где: R = общая инъецированная радиоактивность; r = активность воды, в которой промыли использованный шприц, Р = радиоактивность 1 мл цельной крови, Hct = гематокрит венозной крови.

Объем цельной крови выводится по формуле: Объем цельной крови = (Объем эритроцитов/Соматический гематокрит) х 100.

Общий (соматический) гематокрит тела получается умножением венозного гематокрита на коэффициент 0,92.

В определении кровяной и эритроцитной масс участвует относительно большое число факторов, в том числе, вес тела, состав организма, площадь тела, мышечное развитие, возраст и пр.; вот почему значение этих двух параметров нелегко определить. Установлено выражать значения объема крови в мл. крови на каждый кг. веса тела.

У детей и взрослых, равно как и у женщин и мужчин эти значения не одинаковы.

Норма следующая: для детей 23—29 мл/кг., для женщин 23—29 мл/кг.; для мужчин 26—32 мл/кг.

Измерение объема крови и эритроцитов весьма полезно для постановки диагноза полиглобулии, оценки течения этой болезни и результатов проводимого лечения.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Источник

Способы определения количества эритроцитов крови

Принцип прямого счисления заключается в следующем: разбавить кровь в пипетке Potain (предусмотренной красным шариком для эритроцитов и белым — для лейкоцитов и тромбоцитов), при этом разбавляющая жидкость разная, соответственно виду клеток.

К разбавляющим жидкостям относятся:
а) для эритроцитов:
— хлорид натрия —1 г.
— сульфат натрия — 5 г.
— сублимат — 0,5 г.
— дистилированная вода — 200 мл.

б) для лейкоцитов:
— ледяная укусусная кислота — 2 мл.
— 1% метиленблау — 1 капля
— дистилированная вода — до 100 мл.

в) для тромбоцитов: — щавелевокислый аммоний — 1 г.
— Nа₂ЭДТА — 0,01 г.
— дистилированная вода — 100 мл.

Пипетки Potain должны быть чистыми, совершенно сухими и цельными. До потребления пипетку испытать на проницаемость путем вдувания воздуха, после использования ее следует промыть проточной водой, с помощью трубки для вакуума, затем дистилированной водой. Через несколько дневные интервалы держать пипетку по 24 часа в серохроми-стой смеси, затем промывать тщательно проточной и дистилированной водой.

Высушивать в сушильном шкафу, при температуре 180°. Когда требуется срочное высушивание, пипетку промывать спиртом, а затем эфиром.

Разжижение крови. Набрать в пипетку кровь до деления 0,5, затем разбавляющую жидкость до деления 101 — в пипетку с красным шариком (для счисления эритроцитов) и до деления 11 в пипетку с белым шариком (для счисления лейкоцитов и тромбоцитов). Получаются следующие растворы: 1/200 для эритроцитов и 1/20 для лейкоцитов и тромбоцитов.

Счисление проводится в камере Бюркер-Тюрк или Горяева, к которой хорошо прикреплена чистая оригинальная пластинка.

Заполнение камеры для счисления. В течение 2 мин. хорошо встряхивать пипетку, затем отбросив первые 2—3 капли налить в камеру для счисления, на край пластинки, небольшое количество смеси, которое заполнит пространство в силу капиллярности. Нежелателен избыток смеси, поскольку он заполняет канавки гемоцитометра. Подождать выпадение форменных элементов крови (1—2 мин. в случае эритроцитов и лейкоцитов, 10—15 мин. во влажной камере — для тромбоцитов).

Счисление эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Исследование проводить обычным оптическим устройством (объективом 10 х для лейкоцитов и 20 х или 40 х для эритроцитов и тромбоцитов, при этом конденсор располагается в среднем положении). Счисление проводить на следующих площадях;
— для эритроцитов — 5 квадратов (1/25 квадратиков по 1/400), т.е. 1/5 мм 2 ;
— для лейкоцитов — 4 квадрата, расположенные по углам камеры Бюркер-Тюрк, т.е. 4 мм 2 ;
— для тромбоцитов — одинаково с эритроцитами.

Из клеточных элементов, расположенных по линиям, отграничивающим площади счисления, подсчитывать лишь те из них, которые находятся вдоль одной вертикальной отграничивающей линии (напр. левой) и одной горизонтальной (напр. верхней).

Расчет эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. В целях определения числа форменных элементов на мм 2 учитывать площадь, вышину, разведение:
№ эритроцитов/мм 3 = № насчитанных эритроцитов х 5 х 10 х х 200 = № эритроцитов х 10 000;
№ лейкоцитов/мм 3 = № насчитанных лейкоцитов х 10 х 20 : 4 = = № насчитанных лейкоцитов х 50;
№ тромбоцитов/мм 3 = № насчитанных тромбоцитов х 5 х 10 х х 20 = число насчитанных тромбоцитов х 1000.

Отбор крови для подсчета тромбоцитов можно проводить также пипеткой Potain для эритроцитов, в таком случае отсасывать кровь до деления 1 а разбавляющую жидкость до деления 101. Получится разведение 1/100. Тромбоциты счислять с 200 квадратиков (1/2 мм2), полученную цифру умножить на 2000.

Поправка числа лейкоцитов в случае эритробластоза. Когда в крови находятся эритробласты число ядерных элементов, полученных при счислении, откоррегировать соответственно результату лейкоцитной формулы, по формуле: № лейкоцитов/мм3 = № ядерных элементов/мм3 х 100 / (100 + № эритробластов/100 лейкоцитов).

Количественное определение кровяных клеток основывается на их счислении на небольшом, предполагаемым однородным образце и обобщением результата на всю массу крови организма. Между полученным результатом и фактическим значением может возникнуть разница (погрешность), которая подвергается математическому расчету для определения степени точности каждого метода в отдельности.

Отклонения от строгого соблюдения технических указаний создают многочисленные причины погрешностей на протяжении всего процесса производимых в камере подсчетов. В том числе:
а) погрешности отбора,
б) ошибки аппаратуры,
в) техники,
г) неоднородного распределения в счислительной камере.

Когда проба отбирается одной пипеткой а счисление производится в одной камере погрешность определения числа эритроцитов составляет ±30%, лейкоцитов +20%, а тромбоцитов +30—40%. В то время как в отношении лейкоцитов и тромбоцитов такая погрешность незначительна, поскольку она меньше биологических колебаний, в отношении эритроцитов точность техники представляется неудовлетворительной.

В целях максимального снижения погрешности — и повышения точности счислений попимо строгого соблюдения технических указаний, пробы следует отбирать в 2 пипетки, а счисление проводить в 2 гемоцитометрах. В таких условиях наименьшая погрешность для эритроцитов уменьшается до +11%, для лейкоцитов и тромбоцитов до +16%. Однако электронное счисление представляет значительно большую степень точности. Так в отношении эритроцитов погрешность составляет +3%, для лейкоцитов+4%, а в отношении тромбоцитов +7,5%.

Тем не менее, счисление эритроцитов в камере остается наиболее сложный и в то же время наименее точный метод, причины, по которой его нельзя рассматривать как метод отбора. Единственным показанием к счислению эритроцитов является определение вида анемии.

При счислении тромбоцитов, независимо от метода, для проверки точности результата делается сопоставление с аспектом тромбоцитов на мазке крови.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Источник