Способы окраски по романовскому гимза

Содержание

Окрашивание по Романовскому
Содержание
Приготовление красителя
Специальный стандартный раствор Гимза
Методика окраски
Результат окраски
См. также
Источники
Полезное
Смотреть что такое «Окрашивание по Романовскому» в других словарях:
Окраска по Романовскому

Окрашивание по Романовскому

Окрашивание по Романовскому — Гимзе — цитологический метод окрашивания микроорганизмов, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для изучения методом световой микроскопии. Предложена в 1904 [1] году Густавом Гимзой. В авторской версии название красителя — «Giemsasche Lözung für die Romanowsky färbung» (Раствор Гимзы для окраски по Романовскому) [2] . Окрашивает ацидофильные образования в различные оттенки красного цвета, базофильные — в цвета от пурпурного до синего.

Содержание

Приготовление красителя

Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчета 1-2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20 — 25 минут при 37 °C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии.

Красящую смесь Романовского-Гимзы, которая имеет в основе краску Романовского Райта, в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объемов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.

Специальный стандартный раствор Гимза

Состав красителя:

Азур 1 — 3,772 г Эозин — 2,165 г Метиленовая синька (медиц.) — 1,563 г Метанол (ЧДА) — 750,0 мл Глицерин (ЧДА) — 256,0 мл

Методика окраски

Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером, но рН буфера зависит от вида мазка: для мазка костного мозга — 5,8 — 6,0, для мазка крови — 6,4 — 6,5, для выявления простейших — 6,8, малярийного плазмодия — 7,0 — 7,2.
Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии.

Результат окраски

Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток — в голубой, ядра — в красный. При окрашивании простейших их цитоплазма приобретает голубой цвет, а ядра — красно-фиолетовый.

Результаты окрашивания мазков крови

цитоплазма лимфоцитов окрашивается в сине-голубой цвет, их ядра — в цвета от интенсивно пурпурного до фиолетового;
цитоплазма моноцитов окрашивается в мутный голубовато-серый цвет, их ядра — в более светлый пурпурно-красный, нежная азурофильная зернистость;
гранулы базофилов окрашиваются в интенсивный сине-фиолетовый цвет;
гранулы эозинофилов окрашиваются в оранжево-розовый цвет;
гранулы нейтрофилов окрашиваются в цвета от пурпурного до фиолетового;
ядра лейкоцитов фиолетово-красного цвета с хорошо видимой структурой хроматина; хорошо выделяются ядрышки;
грануломеры тромбоцитов окрашиваются в красный, гиаломеры — в голубой;
розовая окраска гемоглобина.

См. также

Источники

↑ Giemsa G (1904). «Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Methylenazur-Methylenblau-Eosin-Färbemethode zur Erzielung der Romanowsky-Nochtschen Chromatinfärbung.». Centralbl f Bakt etc37: 308–311.
↑Безруков А. В. Окраска по Романовскому: к вопросу о приоритете / К 120-й годовщине открытия эффекта Романовского. – 12 с.

Wikimedia Foundation . 2010 .

Полезное

Смотреть что такое «Окрашивание по Романовскому» в других словарях:

Окрашивание микробов — Окраска микроорганизмов (крашение микробов) комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в… … Википедия

Окраска по Романовскому — Гимзе цитологический метод окраски простейших, бактерий, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) при световой микроскопии. Предложена в 1904[1] году Густавом Гимзой. В авторской версии название красителя «Giemsasche… … Википедия

Романовский, Дмитрий Леонидович — В Википедии есть статьи о других людях с такой фамилией, см. Романовский. Дмитрий Леонидович Романовский Дмитрий Леонидович Романовский (1861 1921) российский врач терапевт … Википедия

Кариотип — Рис. 1. Изображение набора хромосом (справа) и систематизированный женский кариотип 46 XX (слева). Получено методом спектрального кариотипирования. Кариотип совокупность признаков (число, размеры, форма и т. д.) полного набора… … Википедия

Набор хромосом — Рис. 1. Изображение набора хромосом (справа) и систематизированный женский кариотип 46 XX (слева). Получено методом спектрального кариотипирования. Кариотип совокупность признаков (число, размеры, форма и т.д.) полного набора хромосом, присущий… … Википедия

Хромосомный набор — Рис. 1. Изображение набора хромосом (справа) и систематизированный женский кариотип 46 XX (слева). Получено методом спектрального кариотипирования. Кариотип совокупность признаков (число, размеры, форма и т.д.) полного набора хромосом, присущий… … Википедия

Краситель Романовского — сочетает в своем составе эозинат (химически восстановленный эозин) и метиленовый синий, иногда с продуктами окисления последнего азуром А и азуром Б.[1] Краситель Романовского является прототипом ряда других красителей, которые применяют для… … Википедия

Краситель Романовского — Райта — Краситель Романовского сочетает в своем составе эозинат (химически восстановленный эозина) и метиленовый синий, иногда с продуктами окисления последнего азуром А и азуром Б.[1] Краситель Романовского является прототипом ряда других красителей,… … Википедия

19 февраля — ← февраль → Пн Вт Ср Чт Пт Сб Вс 1 2 3 4 5 6 7 … Википедия

Источник

Окраска по Романовскому


	Гематология: методы Взятие крови из пальца Исследование морфологии эритроцитов Морфология лейкоцитов Методы исследования фагоцитоза in vitro Окраска по Райту Окраска по Лейшману. Окраска по Май-Грюнвальду Окраска по Нохту Окраска по Романовскому Окраска по Фрейфельд Определения Т- и В-лимфоцитов в периферической крови. Получение лейкоконцентрата Приготовление и фиксация мазков крови Приготовление мазков крови унифицированным методом Ретикулоциты Цитопатология клеток крови. Эритроцитометрия Эритроциты

Окраска по Романовскому

Азур-эозин по Романовскому

Окрашивание различных элементов клеток в разные цвета и оттенки смесью основных (азур II) и кислых (водорастворимый желтый эозин) красок.

Потенциальный риск применения набора – класс 2б.

При работе с набором необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

При работе с биологическими жидкостями следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как исследуемый материал является потенциально инфицированным, способным длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

Все использованные материалы дезинфицировать в соответствии с требованиями МУ-287-113.

Посуда и аппаратура.

•цилиндры мерные вместимостью 25 -1000 мл;

•калий фосфорнокислый однозамещенный;

•натрий фосфорнокислый двузамещенный;

•Штатив для мазков.

•Кювета со стеклянным мостиком для окраски.

Приготовление забуференной воды:

Взвесить на аналитических весах с точностью ±0,01 г 9,50 г натрия фосфорнокислого двузамещенного

безводного или 22,70 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного; навеску перенести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довести до 1000 мл дистиллированной водой и тщате льно перемешать (раствор 1).

Взвесить на аналитических весах с точностью ±0,01 г 9,07 г калия фосфорнокислого однозамещенного; навеску внести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довестидо 1000 мл дистиллированной водой и тщательно перемешать (раствор 2).

Внести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл 63 мл раствора 1 и 37 мл раствора 2, довести до 1000 мл дистиллированной водой и определить рН полученной

забуференнойводы на рН-метре; рН должен находиться в диапазоне 6,8 — 7,2. Полученную забуференную воду можно хранить при комнатной температуре (+18/+25°С).

В продаже имеется готовый раствор краски Романовского, а также сухая краска Романовского (Гимзы), из которой приготовляют раствор следующим образом: 3,8 г сухой краски Романовского растворяют в 250 мл чистого метилового или этилового спирта (последний хуже).

Раствор оставляют на 3—5 сут, часто взбалтывая для лучшего растворения краски.

Затем прибавляют 250 мл чистого глицерина и вновь оставляют на 3—5 сут, периодически взбалтывая. Приготовленная таким образом краска хорошо сохраняется длительное время в темных бутылях в шкафу, где нет ни кислот, ни щелочей.

Вновь полученный или приготовленный раствор красителя Романовского перед употреблением оттитровывают, т. е. окрашивают несколько фиксированных мазков крови в течение 25—40 мин различно разведенной краской (1—2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды). По хорошо окрашенному препарату устанавливают нужное количество капель краски на 1 мл воды и время окрашивания.

(методика окраски): Мазки необходимо зафиксировать фиксатором-красителем по Май-Грюнвальду или типа Лейшмана в течение 2-3 минут. Непосредственно

перед окраской приготовить рабочий раствор: смешать краситель с забуференной водой в соотношении 1:20 — 1:45 и профильтровать.

Полученный рабочий раствор красителя можно использовать в течение 6 ч асов.

Зафиксированные мазки крови поместить в рабочий раствор красителя, по истечении 20-45 мин препараты промыть проточной водой 1-2 сек, высушить на воздухе и микроскопировать.

Окраска форменных элементов крови должна быть следующей:

эритроциты — розовые, розовые с серым или бежевым оттенком, бежево-коричневые;

тромбоциты — розово-фиолетовые или фиолетовые;

ядра лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов — фиолетовые;

цитоплазма лимфоцитов — голубая, серо-голубая или сине-голубая;

цитоплазма моноцитов- серо-голубая;

цитоплазма нейтрофилов — бледно-розовая или розово-серая;

зернистость нейтрофилов — фиолетовая или красно-фиолетовая;

зернистость эозинофилов- оранжево-красная, розово-красная или розово-фиолетовая;

зернистость базофилов- фиолетовая

Окраска по Романовскому в модификации Филипсона.

Применение красителей-фиксаторов, которыми мазки крови в первый период одновременно фиксируются и частично окрашиваются, а во второй период, после разбавления красителей -фиксаторов дистиллированной водой, докрашиваются окончательно.

Посуда и аппаратура — см. «Окраска по Романовскому».

1.Одну часть готовой краски Романовского и 3 части этилового спирта (ректификата) тщательно смешивают. Краска сразу же пригодна к употреблению, но можно готовить ее и заранее.

2. Дистиллированная вода нейтральной реакции.

Приготовленный краситель наливают на нефиксированный мазок, покрывая его полностью и

через 1 — 1мин30 сек, не сливая красителя, прибавляют к нему но каплям примерно столько же дистиллированной воды, следя за тем, чтобы вода при соединении с красителем не сливалась с мазка. Через 20—30 мин краситель смывают водой и мазок высушивают.

Этим способом клетки окрашиваются хорошо, но иногда, по-видимому, от недоброкачественности спирта в эритроцитах обнаруживаются мелкие пузырьки, мешающие определению степени насыщения их гемоглобином.

Способы быстрой окраски мазков краской Романовского по Алексееву.

Одновременная фиксация и окраска мазков с применением для ускорения окрашивания по первому способу подогрева дистиллированной воды и по второму способу — подогрева разведенной краски Романовского.

Посуда и аппаратура.

1. Глазные пипетки.

3. Темная бутыль с притертой пробкой емкостью 1 л. Остальное — см. «Окраска по Романовскому».

1. Разведенная краска Романовского (1,5 капли краски на 1 мл дистиллированной воды).

2. Краситель Лейшмана для второго метода (растворяют 4 г сухой краски в 1 л метилового спирта и хранят в темной посуде).

3. Чистый метиловый спирт.

4. Нейтральная дистиллированная вода.

5. Фильтровальная бумага.

1. На сухой нефиксированный мазок наносят глазной пипеткой 6—10 капель краски Романовского, распределяя ее той же пипеткой равномерным слоем. Через 30 с другой пипеткой добавляют к краске по каплям удвоенное количество подогретой до 50—60° дистиллированной воды. Покачиванием препарата перемешивают краску с водой и оставляют на 3 мин в покое, затем смывают ее дистиллированной водой и высушивают мазок фильтровальной бумагой. При этом методе окраски частично гемолизируются эритроциты, однако клетки белой крови не изменяются.

При втором способе, приводимом ниже, результаты получаются лучшей окраска препаратов мало отличается от обычной окраски по Романовскому.

2. На сукой нефиксированный мазок наливают равномерным слоем 10—12 капель краски Лейшмана. Через 20—30 с, не сливая краску, добавляют к ней нагретый до 50—60° раствор краски Романовского в количестве, способном удержаться на препарате. Через 3 мин, не сливая краску, смывают ее сильной струей дистиллированной воды и высушивают препарат фильтровальной бумагой.

Источник