Функциональная оценка подвижности бактерий а) метод «раздавленной капли»
1. На середину предметного стекла наносят 1 каплю бульонной культуры бактериологической петлей или стерильной пастеровской пипеткой. При её наличии на МПА вначале наносят каплю физиологического раствора и эмульгируют в ней 1 петлю микробов, взятых со среды.
2. Накрывают покровным стеклом, края которого смазаны вазелиновым маслом и, прижимают его к предметному так, чтобы не образовались пузырьки воздуха, и жидкость не вышла за края стекла. Капля «раздавливается» между ними. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному.
З. На покровное стекло наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с объективом х90, окуляром х7 при слегка опущенном конденсоре.
В случаях работы с относительно крупными бактериями можно пользоваться сухими объективами х40 и даже х8 и обойтись без иммерсионного масла.
Б) метод «висячей капли»
При определении подвижности бактерий выполняется по тому же принципу, но с различием в монтаже камеры.
1. Берут покровное (не предметное), стекло, наносят на него 1 каплю исследуемой микробной взвеси.
2. Накрывают перевёрнутым предметным стеклом с луночкой, но с таким расчётом, чтобы капля оказалась в её центре. Для сцепления стёкол края лунки смазывают вазелиновым маслом. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Капля оказывается висячей над лункой. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.
З. Микроскопию проводят так же, как в предыдущем методе.
Оценка результата:неподвижные микробы в препаратах «раздавленной» и «висячей» капли создают картину броуновского движения, подвижные – проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения «вращаясь» вокруг своей оси.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ БАКТЕРИЙ МЕТОДОМ ПОСЕВА:
1. Метод шукевича:
Испытуемую культуру бактерий засевают в конденсационную воду косого МПА, не прикасаясь к его поверхности.
Ставят в термостат при +37С° на 18-24 часа.
Учёт результатовведут по феномену роения, в процессе которого растущая культура ползёт по «косячку» вверх. Неподвижная культура развивается только в конденсате, а «косячок» МПА остаётся стерильным.
2. Метод посева в столбик полужидкой среды по пешкову:
Испытуемую культуру осторожно бактериальной петлёй засевают в столбик 1-1,5 % МПА.
Ставят в термостат при +37С° на 18-24 часа.
Учёт результатовпроизводят по характеру роста: а)неподвижныебактерии растут строго по ходу укола; б)подвижныебактерии дают рост, напоминающий ёршик с расходящимися в стороны шипами. Оценка роста проводится визуально.
Источник
Приготовление прапаратов для микроскопии
Микробиология: методы Правила работы в микробиологической лаборатории Приготовление прапаратов для микроскопии Исследование окрашенных препаратов Кровь: микробиологическое исследование Микроскопия вирусов Питательные среды Стерилизация лабораторного оборудования Среды для дрожжей и грибов
Приготовление прапаратов для микроскопии
Прежде чем подробно излагать методы приготовления препаратов, необходимо отметить, что от качества приготовления препарата в значительной степени зависит результат микроскопии.
Предметные и покровные стекла, употребляемые для приготовления препаратов, нуждаются в специальной подготовке. Стекла должны быть чистыми и хорошо обезжиренными. Это может быть достигнуто разными способами. Стекла кипятят 15 минут в 1% растворе соды (или в мыльной воде), споласкивают водой, кладут в слабую соляную кислоту и, наконец, хорошо промывают водой.
Хранят стекла в сосудах (банках) с притертыми пробками в смеси равных количеств спирта и эфира или в 96° спирте или промытыми и вытертыми досуха.
1) Исследование микроорганизмов в живом состоянии
Исследование микроорганизмов в живом состоянии применяется главным образом для изучения формы и подвижности бактерий, реже при реакции агглютинации.
Исследование в висячей и раздавленной капле.
Исследование проводят либо в висячей, либо в раздавленной капле, т. е. в капле на предметном стекле, покрытом покровным.
Для висячей капли необходимо иметь специальное предметное стекло с луночкой.
Препарат «висячая капля»
«Висячей каплей» удобнее пользоваться для наблюдения подвижности микробов, их развития, размножение прорастанием спор.
Для приготовления препарата небольшую каплю суспензии микроорганизмов наносят на покровное стекло, переворачивают его каплей вниз и помещают на специальное предметное стекло с углублением в центре. (рис. 1).
Рис.1 «Висячая капля» Условные обозначения:
1- предметное стекло с углублением в центре,
2 – покровное стекло,
3 – капля суспензии микроорганизмов.
Если имеют дело с культурой на жидкой среде, то маленькую капельку культуры прямо наносят на тщательно вымытое покровное стекло; если же имеется культура на плотной среде, то на покровное стекло предварительно наносят маленькую капельку водопроводной воды или физиологического раствора, затем петлей прикасаются к культуре и приставшие к ней бактерии размешивают в приготовленной капельке. Можно также заранее приготовить взвесь микроорганизмов в физиологическом растворе и взять капельку из нее. В том и в другом случае на покровное стекло накладывают предметное стекло с луночкой посередине, края которой предварительно обмазаны вазелином. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает. Под микроскопом край капли сначала отыскивают со слабым увеличением и при суженной диафрагме, а потом исследуют препарат при помощи более сильной сухой системы.
При пользовании простыми предметными стеклами материал (физиологический раствор и культуру) наносят на предметное стекло, которое покрывают покровным. Капельки материала надо брать такой величины, чтобы они заполняли все пространство между покровным и предметным стеклом и не выступали за края покровного. Препарат можно рассматривать как с сухими системами, так и с иммерсионной. Очень хорошо рассматривать живые бактерии с помощью фазово-контрастной или аноптральной установки . Препараты на простых предметных стеклах быстро высыхают, поэтому, если их приходится рассматривать не тотчас, а спустя некоторое время, их помещают во влажную камеру (чашку Петри), на дно которой положено 2—3 влажных кружка фильтровальной бумаги, покрытых двумя сухими.
Источник
Метод висячей капли
Метод висячей капли в микробиологии часто применяется для изучения препаратов под микроскопом. Такой препарат изготавливают для изучения микроорганизмов в жидкой среде и для изучения жидких микропрепаратов. При помощи этого метода также удобно наблюдать за тем, как прорастают споры. Конечно, в продаже имеется множество готовых микропрепаратов, их удобно использовать не только в школе, но и дома. Однако нет ничего сложного в том, чтобы заняться самостоятельным приготовлением и сделать препарат висячая капля.
Препарат висячая капля
Как уже отмечалось, висячая капля в микробиологии используется для изучения поведения микробов, плесени и так далее. Чтобы сделать препарат, нужно приобрести красители и специальный инструмент. Важно следовать инструкции и выполнять все условия, иначе эксперимент попросту не удастся, а микропрепарат испортится.
Приготовление препарата висячая капля
Алгоритм действий следующий:
Приготовьте покровное стекло.
Нанесите на него каплю суспензии с микроорганизмами. Используйте для этого биологическую петлю.
Переверните стеклышко таким образом, чтобы капля свисала.
Поместите образец над лункой покровного стекла, на котором по центру имеется специальное углубление. Важно! Капля не должна прикасаться к стеклу, она должна свободно висеть.
Чтобы загерметизировать камеру предварительно смажьте края углубления покровного стеклышка вазелином. После всех проведенных манипуляций можете проводить наблюдения за «подопытными» микроорганизмами.
Приобрести все необходимое оборудование для испытаний можно в интернет-магазине «Четыре глаза».
4glaza.ru Апрель 2020
Использование материала полностью для общедоступной публикации на носителях информации и любых форматов запрещено. Разрешено упоминание статьи с активной ссылкой на сайт www.4glaza.ru.
Производитель оставляет за собой право вносить любые изменения в стоимость, модельный ряд и технические характеристики или прекращать производство изделия без предварительного уведомления.
Источник
Метод раздавленной капли
Метод раздавленной капли можно использовать не только в лабораторных, но и в домашних условиях. Это исследование непременно понравится и взрослым, и детям. Важное условие – под рукой должно быть все самое необходимое. А именно: микроскоп и предметные и покровные стекла. Купить их можно в интернет-магазине «Четыре глаза».
Суть метода заключается в исследовании живых объектов, включая клетки тканей, различных культур, бактерии и так далее. Препарат «Раздавленная капля» давно и успешно применяется в микробиологии. Сам образец можно купить в готовом виде, но куда более интересно приготовить его самостоятельно.
Приготовление препарата «Раздавленная капля»
Раздавленная капля в микробиологии дает возможность изучить жизнь и размножение многих микроорганизмов. Чтобы провести эксперимент, достаточно иметь немного воды из любого природного водоема. Заранее подготовьте также предметное и покровное стекла, а также стерильную пипетку и любое средство для обезжиривания поверхности. Дальше рекомендуется следовать простой инструкции:
Обезжирьте поверхность предметного стекла.
Нанесите капельку воды на стекло таким образом, чтобы капля попала в самый центр.
Медленно и аккуратно накройте предметное стекло покровным, убедитесь, что внутрь не попали пузырьки воздуха. Также важно, чтобы «раздавленная капля» не выступала за края покровного стекла.
Капля будет находиться в специальной герметичной камере, поэтому храниться может на протяжении длительного времени.
Воду стоит наносить пипеткой или специальной петлей. Важно проследить, чтобы в образце не появилось лишнего воздуха. Чтобы предотвратить высыхание, препарат хранят во влажной камере.
4glaza.ru Апрель 2020
Использование материала полностью для общедоступной публикации на носителях информации и любых форматов запрещено. Разрешено упоминание статьи с активной ссылкой на сайт www.4glaza.ru.
Производитель оставляет за собой право вносить любые изменения в стоимость, модельный ряд и технические характеристики или прекращать производство изделия без предварительного уведомления.
Источник
Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Освоить и овладеть методами исследования бактерий на подвижность.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ. Выделенные чистые культуры бактерий на МПБ. Обычные предметные стекла и с лунками, вазелин. Таблицы, схемы, рисунки.
Выделив чистую культуру на жидкой питательной среде, определяют подвижность этих бактерий.
Подвижность или ее отсутствие у бактерий является одним из многих признаков для определения их вида.
Органами движения у некоторых видов бактерий являются жгутики. Они состоят из белковых веществ, отличающихся от белков тела клетки. Жгутики – очень тонкие образования, диаметр их 0,02-0,05 мкм. Они во много раз длиннее бактерий.
Передвижение бактерий связано со спиралевидными движениями жгутиков.
Рассмотреть жгутики у бактерий под обычным световым микроскопом невозможно, так как их малые размеры лежат за пределами разрешающей способности микроскопа. Обнаруживают жгутики у бактерий различными способами. Строение их и другие детали изучаются методом электронной и фазово-контрастной микроскопии. Расположение и количество жгутиков можно рассмотреть под световым микроскопом, применяя «сверхокраску» по методу Леффлера. Сложность и недоступность этих методов исключает их использование в условиях практических лабораторий. По расположению жгутиков подвижные микробы условно разделяют на 3 группы.
1. Монотрихи – бактерии с одним жгутиком на конце.
2. Лофотрихи – бактерии с пучком жгутиков на одном конце.
3. Перитрихи – бактерии со жгутиками по всей поверхности тела (рис. 33).
Практически изучение микробов в живом состоянии применяется для определения подвижности, то есть косвенного подтверждения наличия жгутиков. Движение микробов можно наблюдать в препаратах «раздавленная капля» или «висячая капля». Микроскопируют эти препараты сухим или иммерсионным объективом. Лучшие результаты получают при микроскопировании в темном поле зрения.
Метод «раздавленной» капли. На середину предметного стекла наносят каплю исследуемого материала. Каплю накрывают покровным стеклом так, чтобы не появились пузырьки воздуха; жидкость должна заполнять все пространство и не выступать за края стекла.
Рис.33. Расположение жгутиков у бактерий
Недостатком метода «раздавленной» капли является быстрое высыхание препарата. При длительном микроскопировании препарата рекомендуют смазывать края покровного стекла вазелином. Кроме того, можно использовать метод «висячей» капли.
Метод «висячей» капли. Для приготовления этого препарата используют специальные предметные стекла с углублением («лункой») в центре. Небольшую каплю исследуемого материала наносят на середину покровного стекла, края лунки предварительно смазывают вазелином. Предметное стекло накладывают на покровное так, чтобы капля находилась в центре лунки. Затем его осторожно переворачивают, чтобы капля свисала в центре герметично закрытой полости лунки. В такой замкнутой полости капля защищена от высыхания (рис. 34).
При микроскопии таких препаратов в проходящем свете для получения большей контрастности слегка затемняют поле зрения; конденсор при этом опускают, поступление света регулируют вогнутым зеркалом. Вначале пользуются малым увеличением (объектив х8), после того как обнаружат край капли, устанавливают объектив х40 или иммерсионный.
При недостаточном опыте иногда ошибочно принимают пассивное молекулярное (броуновское) движение за истинное – активное. Следует учитывать, что при активном движении с помощью жгутиков бактерии могут пересекать все поле зрения и совершать круговые движения.
Рис. 34. Препарат «висячая» капля для исследования бактерий на подвижность
Задания для самостоятельной работы
1. Приготовить препараты «раздавленная» и «висячая» капли из чистых культур бактерий из МПБ.
2. Провести микроскопию приготовленных препаратов с целью установления подвижности бактерий. Полученные результаты внести в бланк экспертизы.
Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
1. 1. Бактерии, имеющие пучок жгутиков на одном из полюсов клетки.
2. Бактерии, имеющие один жгутик.
3. Бактерии, имеющие жгутики на всей поверхности клетки.
2. Бактерии, имеющие жгутики (подвижные):
Б. Кишечная палочка.
Г. Сибиреязвенная палочка.
3. Бактерии прикрепляются к поверхности клеток при помощи:
