Подвижность бактерий, методы выявления подвижности
Бактерии, образующие жгутики – подвижны. Поэтому о подвижности бактерий можно судить но наличию
Методы выявления подвижности:
1. Окраска жгутиков по Леффлеру.
2. Исследование интактной культуры:
а) метод «раздавленная капля» — на середину предметного стекла наносят каплю суточной культуры бактерий и осторожно накрывают ее предметным стеклом так, чтобы жидкость не растеклась за его края и в нее не попадали пузырьки воздух.
б) метод ‘висячая капля» каплю бактерий наносят на середину покровного стекла, накладывают на него специальное предметное стекло с углублением, смазанным вокруг вазелином так, чтобы капля находилась в центре лунки, затем препарат осторожно переварачивают.
Далее культуру исследуют в тёмном поле микроскопа или фазовом контрасте.
11. Принципы систематики микробов. Систематическое положение микробов. Таксономические категории. Понятие и критерии вида.
Систематика устанавливает положение живых существ в органическом мире, а также разрабатывает принципы, методы, правила классификации, номенклатуры и идентификации микроорганизмов.
1) Монофилитический принцип — все живое от одного предка.
2) Генетический принцип — установление связи между организмами на генетическом уровне и их иерархии, деление на группы, связи между собой.
Подходы систематики: геносистематика, хемосистематика, феносистематика и др.
Номенклатура установление соподчинённости и связи между МБ.
Органический мир делится на: надцарства, царства, типы, классы, порядки, семейства, роды, виды,
Все таксоны до вида определяются одним словом, вид — бинарное название(первое слово родовое
название, второе — видовое), подвид три елова(род, вид, название подвида).
Реально существует только вид — совокупность свободно скрещивающихся популяций, происходящих от
одного предка, обладающих общим генофондом, экологическим единством и репродуктивной изоляцией.
Подвидовые категории: варианты у бактерий типы у вирусов.
Критерии вида:
а) морфологический; б) территориальные свойства(способность окрашиваться); в) биохимический, г)
серологический (антигенная структура); д) биологический; е) экологический, ж) географический
Классификация микроорганизмов:
I. надцарство Прокариот
1 царство бактерий
1.1. тип Скотобактерии
1.1.1. класс Бактерии
1.1.1.1. порядок Истинные бактерии
1.1 1.2 порядок Спирохеты
1.1.1.3 порядок Акгиномицеты
1.1.2. класс Рикетти
1.1.2.1. порядок Рикетти
1.1.2.2. порядок Хламидии
1.1.3. класс Моликутес
1.1.3.1. порядок Микоплазмы
III. Царство Вирусов
1. царство Грибов
По классификации Берджи царство Прокариот делится на четыре отдела:
1. Gracilicutes-тонкостенные, грамотрицательные
2. Firmicutes — толстостенные, граммположительные
3. Tenericutes лишены клеточной стенки(сюда включены микоплазмы)
4. Mendosicutes — архебактерии, стенки дефектные, лишены пептидогликана, особенности строения рибосом, мембраны и РНК.
Источник
Лабораторная работа № 7
Методы определения подвижности микроорганизмов.
Теоретические пояснения:
Подвижность бактерий важный видовой признак и производится при диагностических исследованиях: результат учитывают при идентификации микроорганизмов. У подвижных видов способность самостоятельного поступательного (и вращательного) движения обусловлена наличием жгутиков — специальных тонких нитевидных образований. Жгутики бывают различной длины. Их диаметр настолько мал, что они невидимы в световом микроскопе (менее 0,2 мкм). У разных групп бактерий количество и расположение жгутиков неодинаково. Жгутики плохо воспринимают красители. Методы сложной окраски искажают подлинный вид жгутиков, поэтому в лабораториях окраску жгутиков не осуществляют, а исследуют бактерии в живом состоянии. В зависимости от расположения и количества жгутиков микробы подразделяют (рис. 8):
а) монотрихи — микроорганизмы, имеющие на одном из полюсов один жгутик, движения активные, поступательные (псевдомонас);
б) лофотрихи — микробы, имеющие на одном из полюсов пучок жгутиков (листерии);
в) амфитрихи — микробы, имеющие жгутики на обоих полюсах микробной клетки;
г) перитрихи — микробы, у которых жгутики расположены по всей поверхности клетки (E. coli).
Рис.8. Типы расположения жгутиков у бактерий
Есть виды микроорганизмов, обладающие подвижностью, но жгутиков не имеют (спирохеты, лептоспиры). Их движение обусловлено импульсивными сокращениями двигательного фибриллярного аппарата микробной клетки. Для определения подвижности у бактерий необходимо использовать культуру не старше суточного возраста, так как старые культуры утрачивают способность передвигаться.
Цель работы: ознакомиться с методами определения подвижности микроорганизмов.
Материалы и оборудование: предметные и покровные стекла, микроскопы, иммерсионное масло, спиртовки, спички, пробирки со скошенным агаром, пробирки с полужидким агаром, культуры микроорганизмов, бактериологические петли, бактериологические иглы, термостат, фильтровальная бумага, дистиллированная вода.
Ход работы:
Определение подвижности бактерий методом «висячая капля».
Каплю молодой (18-20 часовой) бульонной культуры бактерий бактериологической петлей наносят на покровное стекло. Специальным предметным стеклом с углублением (луночкой) накрывают каплю культуры так, чтобы покровное стекло с каплей находилось в центре луночки и прилипло к предметному стеклу (края луночки предварительно слегка смазывают вазелином). Препарат перевертывают стеклом вверх, и капля «повисает» над луночкой. Препарат микроскопируют при затемненном поле зрения, сначала при малом, затем при среднем или большом увеличении. На светлом фоне микробы темно-серые.
Для этого каплю микробной взвеси наносят в конденсат скошенной плотной питательной среды в пробирке. Подвижные микроорганизмы, передвигаясь из конденсата, растут на поверхности среды; неподвижные виды размножаются только в конденсате среды («не заходя» на поверхность агара).
Метод «раздавленная капля».
Каплю бактериальной взвеси наносят на обычное предметное стекло, осторожно накрывают покровным стеклом и слегка придавливают пальцем. Микроскопию проводят, так же как и в методе «висячая капля».
Метод посева уколом в полужидкий агар.
Для этого бактериологической петлей производят посев исследуемой культуры уколом до дна пробирки с полужидкой питательной средой. Подвижная культура растет по всей питательной среде, образуя равномерное помутнение, а неподвижная — только по уколу в виде стержня, сохраняя прозрачность незасеянного участка среды.
Вопросы для самоконтроля:
1. Почему для исследования жгутиков бактерий используют бактерии в живом состоянии?
2. Чем отличается перитрих от лофотриха?
3. В чем суть метода Шукевича?
4. Как определить подвижность бактерий при посеве уколом в полужидкий агар?
Источник
Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Освоить и овладеть методами исследования бактерий на подвижность.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ. Выделенные чистые культуры бактерий на МПБ. Обычные предметные стекла и с лунками, вазелин. Таблицы, схемы, рисунки.
Выделив чистую культуру на жидкой питательной среде, определяют подвижность этих бактерий.
Подвижность или ее отсутствие у бактерий является одним из многих признаков для определения их вида.
Органами движения у некоторых видов бактерий являются жгутики. Они состоят из белковых веществ, отличающихся от белков тела клетки. Жгутики – очень тонкие образования, диаметр их 0,02-0,05 мкм. Они во много раз длиннее бактерий.
Передвижение бактерий связано со спиралевидными движениями жгутиков.
Рассмотреть жгутики у бактерий под обычным световым микроскопом невозможно, так как их малые размеры лежат за пределами разрешающей способности микроскопа. Обнаруживают жгутики у бактерий различными способами. Строение их и другие детали изучаются методом электронной и фазово-контрастной микроскопии. Расположение и количество жгутиков можно рассмотреть под световым микроскопом, применяя «сверхокраску» по методу Леффлера. Сложность и недоступность этих методов исключает их использование в условиях практических лабораторий. По расположению жгутиков подвижные микробы условно разделяют на 3 группы.
1. Монотрихи – бактерии с одним жгутиком на конце.
2. Лофотрихи – бактерии с пучком жгутиков на одном конце.
3. Перитрихи – бактерии со жгутиками по всей поверхности тела (рис. 33).
Практически изучение микробов в живом состоянии применяется для определения подвижности, то есть косвенного подтверждения наличия жгутиков. Движение микробов можно наблюдать в препаратах «раздавленная капля» или «висячая капля». Микроскопируют эти препараты сухим или иммерсионным объективом. Лучшие результаты получают при микроскопировании в темном поле зрения.
Метод «раздавленной» капли. На середину предметного стекла наносят каплю исследуемого материала. Каплю накрывают покровным стеклом так, чтобы не появились пузырьки воздуха; жидкость должна заполнять все пространство и не выступать за края стекла.
Рис. 33. Расположение жгутиков у бактерий
Недостатком метода «раздавленной» капли является быстрое высыхание препарата. При длительном микроскопировании препарата рекомендуют смазывать края покровного стекла вазелином. Кроме того, можно использовать метод «висячей» капли.
Метод «висячей» капли. Для приготовления этого препарата используют специальные предметные стекла с углублением («лункой») в центре. Небольшую каплю исследуемого материала наносят на середину покровного стекла, края лунки предварительно смазывают вазелином. Предметное стекло накладывают на покровное так, чтобы капля находилась в центре лунки. Затем его осторожно переворачивают, чтобы капля свисала в центре герметично закрытой полости лунки. В такой замкнутой полости капля защищена от высыхания (рис. 34).
При микроскопии таких препаратов в проходящем свете для получения большей контрастности слегка затемняют поле зрения; конденсор при этом опускают, поступление света регулируют вогнутым зеркалом. Вначале пользуются малым увеличением (объектив х8), после того как обнаружат край капли, устанавливают объектив х40 или иммерсионный.
При недостаточном опыте иногда ошибочно принимают пассивное молекулярное (броуновское) движение за истинное – активное. Следует учитывать, что при активном движении с помощью жгутиков бактерии могут пересекать все поле зрения и совершать круговые движения.
Рис. 34. Препарат «висячая» капля для исследования бактерий на подвижность
Задания для самостоятельной работы
1. Приготовить препараты «раздавленная» и «висячая» капли из чистых культур бактерий из МПБ.
2. Провести микроскопию приготовленных препаратов с целью установления подвижности бактерий. Полученные результаты внести в бланк экспертизы.
Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
1. 1. Бактерии, имеющие пучок жгутиков на одном из полюсов клетки.
2. Бактерии, имеющие один жгутик.
3. Бактерии, имеющие жгутики на всей поверхности клетки.
2. Бактерии, имеющие жгутики (подвижные):
Б. Кишечная палочка.
Г. Сибиреязвенная палочка.
3. Бактерии прикрепляются к поверхности клеток при помощи:
Источник
ИЗУЧЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ БАКТЕРИЙ
Наиболее отчетливое движение бактерий видно в препарате «висячая капля» Подвижность клетки оживлено, передвигаются в поле зрения микроскопа в разных направлениях . В препарате «висячая капля» подвижность устанавливают только для форм, имеющих жгутики или способны передвигаться благодаря сокращению тела.
Для приготовления «висячей капли» исследуемый матерная наносят на середину обезжиренного покровного стекла Затем берут предметное стекло с лункой, вокруг лунки наносят тонкий слой вазелина и стекло, повернув лункой вниз прикладывают к покровному так . чтобы капля находилась в центре углубления. Предметное и покровное стекло переворачивают и капля оказывается герметично закрытой во влажной камере и защищенной от высыхания. Для того , чтобы стенки образовавшейся камеры не запотели, предметное стекло и лунку слегка увлажняют. Для исследования используют молодые (6-12-18 часовые, но не старые односуточные) бульонные культуры.
Препарат «раздавленная капля»:
На предметное стекло наносит каплю физиологического раствора в которую стерильной бактериологической петлей наносят микробную культуру в растирают ее в суспензию, после чего накрывают ее покровным стеклом так . чтобы в жидкости не образовалось пузырьков воздуха Излишки выступленной жидкости из-под стекла удаляют полосками фильтровальной бумаги. Препарат рассматривают с объективом на х 8, и на х 40.
При наблюдении под микроскопом можно заметить активное движение бактерий, которые перемещаются в различных направлениях с разной скоростью.
Способность двигаться обуславливается наличием у бактерий жгутиков. Они имеют вид гонких удлиненных нитей д=0,02-0,05 мм. Чтобы обнаружить жгутики применяют специальные методы их окраски(способ Пешкова , Леффлера). Длины жгутиков достигают по 30 мкм. По характеру расположения и числу жгутиков различают — монотрихи, — бактерии с одним жгутиком на одном конце клетки, — лофотрихи — бактерии с несколькими жгутиками на одном из концов клетки, и перитрихи — бактерии с большим числом жгутиков на всей поверхности бактериальной клетки. Характер движения бактерии зависит главным образом от расположения жгутиков и частично от их формы тела. Бактерии у которых жгутики находятся на одном конце тела двигаются обычно по прямой линии совершая легкое колебательное движение. У перитрихов движение сопровождается оживленным перевертыванием клетки в разные стороны.
Источник
