На главную
Контакты
Меню сайта
Причина отравления вод океана.
Американские ученые из штата Мичиган полагают, что в качестве главной причины отравления вод Мирового океана ртутью являются бактерии.
Секрет выживания лягушек.
Американским ученым удалось выяснить, как лягушкам удается продолжать жить даже после глубокой заморозки.
Секрет долголетия ночницы.
Биологи уже давно считают, что продолжительность жизни животного определяется очень просто: чем оно больше, тем дольше живет.
Методы хранения культур микроорганизмов
Основные задачи хранения культур
: поддержание их жизнеспособности, сохранение стабильности таксономически важных признаков, а также любых других определенных свойств, представляющих интерес для науки и практики.
В коллекциях жизнеспособность микроорганизмов поддерживается преимущественно следующими методами
: 1) периодическими пересевами (субкультивирование); 2) под минеральным маслом; 3) высушиванием; 4) лиофилизацией; 5) в условиях низких и ультранизких температур.
— традиционный метод хранения культур (чаще всего аспорогенных) и заключается он в пересевах культур на свежие питательные среды один-два раза в месяц. Между пересевами микроорганизмы хранят в темноте при температурах 5 — 20°С. При использовании этого метода хранения культур должны быть соблюдены три условия
: 1) подходящая поддерживающая среда; 2) идеальная температура хранения; 3) необходимая частота пересевов.
Преимуществом методаявляется простота и удобный визуальный контроль за чистотой культуры или ее морфологической изменчивостью, а к недостаткам
следует отнести возможность заражения, краткосрочность хранения, трудоемкость работы и большой расход реактивов.
Хранение под минеральным маслом
заключается в следующем: культуру микроорганизмов выращивают на благоприятной агаризованной питательной среде и заливают стерильным вазелиновым маслом. Слой масла (0,5 — 1,0 см) замедляет скорость обменных процессов микроорганизмов и предохраняет поверхность среды от высыхания. Покрытые маслом культуры хранят в холодильнике. Большинство сапрофитных бактерий сохраняют жизнеспособность в течение 8 — 14 лет, дрожжи и мицелиальные грибы пересевают через 2 — 3 года.
Хранение под маслом имеет следующие преимущества
: относительно длительное сохранение стабильности свойств микроорганизмов, сокращение затрат на пересевы, возможность использования в любой микробиологической лаборатории. Недостаток метода
— слабая разработанность протоколов для многих групп бактерий.
— простейший метод хранения микроорганизмов, в процессе которого происходит обезвоживание микробных клеток. В высушенных (до остаточной влажности 10 — 12%) клетках биохимические реакции приостанавливаются или протекают очень медленно. Процесс высушивания лучше всего переносят спорообразующие виды. Широко применяют воздушное высушивание микроорганизмов на различных адсорбентах: в стерильной почве, песке, глине, фильтровальной бумаге, стеклянных бусах, крахмале и т.д. Адсорбенты защищают микроорганизмы от сильного высыхания, связывают свободную воду и поддерживают определенный уровень влажности. Разновидностью метода является L-высушивание: микроорганизмы в суспензионной среде высушивают под вакуумом в стеклянных ампулах, погруженных в водяную баню с контролируемой температурой.
. Высушенные культуры микроорганизмов легко хранить и транспортировать, они широко используются для хранения хлебопекарных и кормовых дрожжей, бактериальных удобрений (нитрагин, азотобактерин), энтомопатогенных препаратов.
заключается в удалении воды из замороженных суспензий под вакуумом, т.е. при этом вода испаряется, минуя жидкую фазу. Выживаемость лиофилизированных клеток зависит от специфических особенностей вида и штамма, стадии роста и концентрации клеток, состава защитных сред, режима лиофилизации, условий реактивации. После лиофилизации для выведения клеток из состояния анабиоза создают условия, снижающие осмотический шок и стресс, возникающий при вскрытии ампул. Лучше всего восстановление свойств происходит на богатых натуральных средах.
. Этот метод считается одним из самых экономичных и эффективных методов длительного хранения микроорганизмов. При его использовании многие разнородные группы бактерий и бактериофагов сохраняются в жизнеспособном состоянии 30 и более лет. Недостаток метода
— сложная и недостаточно разработанная технология способа хранения, требуется специальное оборудование.
Хранение микроорганизмов при низких и ультранизких температурах
используется в тех случаях, когда культуры не выдерживают лиофилизации (некоторые автотрофные бактерии, спирохеты, микоплазмы, водные фикомицеты, различные вирусы). Микроорганизмы замораживают либо в рефрижераторах (от — 12°С до — 80°С) либо используют рефрижераторы с азотом: газово-фазовый (- 150°С) или жидко-фазовый (- 196°С). Считается, что грамположительные бактерии более устойчивы к замораживанию, чем грамотрицательные. Чтобы оживить замороженные культуры, их быстро оттаивают при 37°С.
Биоразнообразие мицелиальных грибов
Введение Грибы являются компонентами практически всех морских сообществ. Они разлагают органическое вещество автохтонного и аллохтонного происхождения. Они являются сапротрофами, пара .
Самоорганизация в синергетике
Введение Синергетика — новое направление междисциплинарных исследований, использующее нелинейное мышление для выявления общих закономерностей самоорганизации, становления устойч .
Ботанические сады Украины
Введение В своем реферате я рассмотрю один из главных туристических ресурсов, который всегда пользовался большой популярностью среди туристов. Это ботанический сад. Только здесь можно .
Источник
4. Методы хранения культур микроорганизмов
Основные задачи хранения культур: поддержание их жизнеспособности, сохранение стабильности таксономически важных признаков, а также любых других определенных свойств, представляющих интерес для науки и практики.
В коллекциях жизнеспособность микроорганизмов поддерживается преимущественно следующими методами: 1) периодическими пересевами (субкультивирование); 2) под минеральным маслом; 3) высушиванием; 4) лиофилизацией; 5) в условиях низких и ультранизких температур.
Субкультивирование – традиционный метод хранения культур (чаще всего аспорогенных) и заключается он в пересевах культур на свежие питательные среды один-два раза в месяц. Между пересевами микроорганизмы хранят в темноте при температурах 5 – 20 °С. При использовании этого метода хранения культур должны быть соблюдены три условия: 1) подходящая поддерживающая среда; 2) идеальная температура хранения; 3) необходимая частота пересевов.
Преимуществом метода является простота и удобный визуальный контроль за чистотой культуры или ее морфологической изменчивостью, а к недостаткам следует отнести возможность заражения, краткосрочность хранения, трудоемкость работы и большой расход реактивов.
Хранение под минеральным маслом заключается в следующем: культуру микроорганизмов выращивают на благоприятной агаризованной питательной среде и заливают стерильным вазелиновым маслом. Слой масла (0,5 – 1,0 см) замедляет скорость обменных процессов микроорганизмов и предохраняет поверхность среды от высыхания. Покрытые маслом культуры хранят в холодильнике. Большинство сапрофитных бактерий сохраняют жизнеспособность в течение 8 – 14 лет, дрожжи и мицелиальные грибы пересевают через 2 – 3 года.
Хранение под маслом имеет следующие преимущества: относительно длительное сохранение стабильности свойств микроорганизмов, сокращение затрат на пересевы, возможность использования в любой микробиологической лаборатории. Недостаток метода – слабая разработанность протоколов для многих групп бактерий.
Высушивание – простейший метод хранения микроорганизмов, в процессе которого происходит обезвоживание микробных клеток. В высушенных (до остаточной влажности 10 – 12 %) клетках биохимические реакции приостанавливаются или протекают очень медленно. Процесс высушивания лучше всего переносят спорообразующие виды. Широко применяют воздушное высушивание микроорганизмов на различных адсорбентах: в стерильной почве, песке, глине, фильтровальной бумаге, стеклянных бусах, крахмале и т. д. Адсорбенты защищают микроорганизмы от сильного высыхания, связывают свободную воду и поддерживают определенный уровень влажности. Разновидностью метода является L-высушивание: микроорганизмы в суспензионной среде высушивают под вакуумом в стеклянных ампулах, погруженных в водяную баню с контролируемой температурой.
Преимущества метода. Высушенные культуры микроорганизмов легко хранить и транспортировать, они широко используются для хранения хлебопекарных и кормовых дрожжей, бактериальных удобрений (нитрагин, азотобактерин), энтомопатогенных препаратов.
Лиофилизация заключается в удалении воды из замороженных суспензий под вакуумом, т. е. при этом вода испаряется, минуя жидкую фазу. Выживаемость лиофилизированных клеток зависит от специфических особенностей вида и штамма, стадии роста и концентрации клеток, состава защитных сред, режима лиофилизации, условий реактивации. После лиофилизации для выведения клеток из состояния анабиоза создают условия, снижающие осмотический шок и стресс, возникающий при вскрытии ампул. Лучше всего восстановление свойств происходит на богатых натуральных средах.
Преимущества метода. Этот метод считается одним из самых экономичных и эффективных методов длительного хранения микроорганизмов. При его использовании многие разнородные группы бактерий и бактериофагов сохраняются в жизнеспособном состоянии 30 и более лет. Недостаток метода – сложная и недостаточно разработанная технология способа хранения, требуется специальное оборудование.
Хранение микроорганизмов при низких и ультранизких температурах используется в тех случаях, когда культуры не выдерживают лиофилизации (некоторые автотрофные бактерии, спирохеты, микоплазмы, водные фикомицеты, различные вирусы). Микроорганизмы замораживают либо в рефрижераторах (от – 12 °С до – 80 °С) либо используют рефрижераторы с азотом: газово-фазовый (– 150 °С) или жидко-фазовый (– 196 °С). Считается, что грамположительные бактерии более устойчивы к замораживанию, чем грамотрицательные. Чтобы оживить замороженные культуры, их быстро оттаивают при 37 °С.
Преимущества криогенного сохранения микроорганизмов: малая вероятность заражения культуры, сохранение в стабильном состоянии свойств микроорганизмов, небольшие временные и материальные затраты, возможность использования замороженных культур в качестве прямого инокулята. Недостаток метода – сложная и недостаточно разработанная технология способа хранения, требуется специальное оборудование.
Источник
Методы хранения культур микроорганизмов
Автор: Пользователь скрыл имя, 24 Апреля 2012 в 20:45, курсовая работа
Краткое описание
Необходимым условием успешной работы с микроорганизмами является правильное поддержание их с целью сохранения не только жизнеспособности клеток, но и таксономических, а также любых других, важных для исследователя свойств. Общего ме¬тода, одинаково пригодного для хранения многочисленных и разнообразных групп микроорганизмов, пока не существует.
Оглавление
Введение — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — 3
Глава 1. Хранение микроорганизмов- — — — — — — — — — — — — — — — -4
1.1 Периодические пересевы на питательные среды- — — — — -4
1.2.Хранение под минеральным маслом- — — — — — — — — — — — — — 4
1.3 Хранение в лиофилизированном состоянии- — — — — — — — — 5
1.4.Хранение при низких и сверхнизких температурах- — — -6
1.5.Хранение в глицероле- — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — -7
1.6.Хранение в дистиллированной воде или
1%-ном растворе хло¬рида натрия- — — — — — — — — — — — — — — — 7
1.7.Хранение в высушенном состоянии на адсорбентах- — — 8
1.8.Оценка жизнеспособности микроорганизмов
после длительного хранения- — — — — — — — — — — — — — — — — — — 8
Глава 2. Экспериментальные часть.- — — — — — — — — — — — — — — 9
2.1 Методы длительного хранения коллекции
микроорганизмов кафедры микробиологии МГУ- — — — 9
2.2 Сравнение способов хранения молочнокислых
Бактерий- — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — 16
Заключение- — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — 23
Список литературы- — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — — -24
Файлы: 1 файл
Методы хранения культур микроорганизмов.doc
Молочно-кислые бактерии были лиофилизированы позднее, и в настоящее время срок хранения ампул составляет 13-18 лет. За этот срок сохранили жизнеспособность все 16 лиофилизированных культур молочно-кислых бактерий: Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei (2 штамма), Lactobacillus «caucasicus», Lactobacillus delbrueckii (2 штамма), Lactococcocus lactis (2 штамма), Lactococcocus lactis subsp. cremoris (2 штамма), Lactococcocus lactis subsp. diacetilactis, Lactobacillus lindneri, Lactobacillus pentoaceticum (2 штамма), Lactobacillus plantarum (2 штамма).
На основании многолетних наблюдений по хранению большого числа микроорганизмов под вазелиновым маслом 6 и продолжающихся в настоящее время исследований были установлены оптимальные и предельные сроки хранения под маслом для микроорганизмов, принадлежащих к различным таксономическим группам. Некоторые культуры микроорганизмов сохраняли жизнеспособность под вазелиновым маслом без пересевов в течение 10-12 лет. Это бактерии родов Azotobacter (7-10 лет), Bacillus (8-12 лет), Мусobacterium (7-10 лет). Для Pseudomonas fluoresces Pseudomonas putida и была установлена зависимость продолжительности хранения от состава среды, на которой хранились под маслом эти бактерии: на синтетической среде они сохраняли жизнеспособность 10-14 лет, а на мясопептонном агаре только 5-7 лет. Некоторые микроорганизмы требуют частых пересевов (0.5-1 год) при хранении под маслом, например бактерии родов Acetobacter,Cluconobacter, Lactobacillus, Lactococcus (табл. 3).
Хранение при -20°С в 25%-ном растворе глицерина было испытано для 20 штаммов микроорганизмов. Жизнеспособность микроорганизмов проверили после 12 мес. хранения. Из 20 штаммов сохранили жизнеспособность 19 штаммов: Alcaligenessh., Arthrobacter chrystallopoetes, Azotobacer chroococcum, Brevibacterium citreum, Citrobacter freundii, Escherichia coli, Micrococcus liteus, Mycobacterium mucosum (3 штамма), Micobacterium smegmatis, Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens, Staphylococcus aureus, Rhodotorula aurantiaca, Rhodotorula glutinis, Rhodotorula rubra (3 штамма). Погиб один штамм Pseudomonas fluorescens. Хранение в этих условиях продолжается.
В дистиллированной воде и физиологическом растворе сохраняли жизнеспособность Р. aeruginosa, Р. fluorescens, Е. cjli, Staph. aureus — 1 год, В.subtlis, Gluconobacter oxydans, Rhodococcus cp.—2 года, Serratia marcescens— 7 лет.
На основании исследований, проведенных на кафедре микробиологии МГУ, было установлено, что для длительного хранения большого числа микроорганизмов в коллекции наиболее удобны метод лиофилизации и хранение под вазелиновым маслом. Лиофилизация обеспечивает более продолжительное сохранение культур, чем хранение под вазелиновым маслом. Предельные сроки хранения под вазелиновым маслом микроорганизмов различных таксономических групп колеблются от 1 до 12 лет. А лиофилизированные культуры сохранили жизнеспособность в течение 35-36 лет. Причем в этих ампулах наблюдается еще большое количество жизнеспособных клеток. Хранение лиофилизированных культур и под маслом продолжается.
Результаты по хранению микроорганизмов, полученные на кафедре микробиологии МГУ, согласуются с данными, изложенными в английском руководстве по хранению культур [1]. Однако в этом руководстве нет сведений о хранении в лиофилизированном состоянии таких бактерий, как Acetobacter, Azotobacter, Rhizobium, для которых на кафедре микробиологии количественно прослежена высокая выживаемость в течение 35-36 лет. Для некоторых бактерий в руководстве приводится выживаемость за более короткие сроки хранения, чем в настоящей работе.
На кафедре микробиологии установлена возможность более длительного хранения бактерий под вазелиновым маслом, чем указано в руководстве [1] . Это касается, например, родов Azotobacter, Bacillus, Pseudomonas(таблица 2).
МЕТОДЫ ДЛИТЕЛЬНОГО ХРАНЕНИЯ КОЛЛЕКЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ
Таблица2. Оптимальные интервалы пересевов микроорганизмов из-под масла и предельные сроки хранения.
| Микроорганизмы | Оптимальный возраст культуры для хранения, ч | Оптимальные интервалы между пересевами, годы | Предельные сроки хранения,годы | |
| Бактерии | ||||
| Acetobacter | 72 | 0.5 | 1 | |
| Alcaligenes | 24 | 2 | 6-8 | |
| Arthrobacter | 72 | 1 | 3-9 | |
| Azotobacter | 72 | 2 | 7-10 | |
| Bacillus | 96 | 5 | 8-12 | |
| Brevibacterium | 72 | 3 | 7 | |
| Caulobacter | 24-48 | 2 | 2 | |
| Citrobacter | 24 | 3 | 5 | |
| Gluconobacter | 48 | 0.5 | 1-5 | |
| Flavobacterium | 48-72 | 2 | 5 | |
| Erwinia | 24 | 2 | 5 | |
| Escherichia | 24 | 2 | 2 | |
| Lactobacillus | 24 | 1 | 2 | |
| Lactococcus | 24 | 1 | 2 | |
| Micrococcus | 24 | 1-3 | 7 | |
| Mycobacterium | 120 | 2-4 | 7-10 | |
| Nocardia | 72-96 | 3 | 4 | |
| Proteus | 24 | 3 | 6 | |
| Pseudomonas | 24-48 | 2 | 5-7*; 10-14** | |
| Rhizobium | 96 | 4 | 11 | |
| Serratia | 24 | 2 | 5 | |
| Staphylococcus | 24 | 2 | 2 | |
| Shewanella | 24 | 1 | 2 | |
| Streptomyces | 120 | 2 | 6-8 | |
| Дрожжи | ||||
| Candida | 96-120 | 3 | 6 | |
| Endomyces | 96-120 | 3 | 3 | |
| Hansenula | 96-120 | 1 | 2 | |
| Octosporomyces | 96-120 | 3 | 3.5 | |
| Pichia | 96-120 | 1 | 3 | |
| Rhodotorula | 96-120 | 2 | 3 | |
| Saccharomyces | 96-120 | 3 | 6 | |
| Schixosaccharomyces | 96-120 | 2 | 2.5 | |
* Хранение на МПА
** Хранение на синтетической среде
В настоящее время коллекция кафедры микробиологии МГУ насчитывает свыше 400 штаммов микроорганизмов. Надежность их сохранения обеспечивается с помощью использования различных вышеуказанных способов.
Работа частично финансировалась Министерством науки и технической политики Российской Федерации в рамках ГНТП «Средства обеспечения исследований по физико – химической биологии и биотехнологии», а также по проекту ГНТП «Биологическое разнообразие».
2.2.СРАВНЕНИЕ СПОСОБОВ ХРАНЕНИЯ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ.
Изучали влияние разных способов хранения, таких, как хранение под вазелиновым маслом и в лиофилизированном состоянии, а также при периодических пересевах ряда штаммов молочнокислых бактерий из коллекции культур микроорганизмов кафедры микробиологии МГУ им. М.В. Ломоносова. Были исследованы 20 штаммов родов Lactobacillus и Lactococcus по физиолого-биохимичес-ким свойствам, включая их жизнеспособность в процессе лиофилизации и длительного хранения, способность к накоплению органических кислот, а также их антибиотическую активность. Установлено, что хранение под маслом неэффективно для молочнокислых лактококков Lactococcus lactis subsp.1асtis, лиофилизация сохраняет достаточно большое число жизнеспособных клеток, но несколько снижает антибиотическую активность молочнокислых бактерий. Периодические пересевы лиофилизированных культур в обогащенные питательные среды (обрат) восстанавливали их физиологическую активность, включая их антимикробный спектр действия.
Ключевые слова: молочнокислые бактерии, лиофилизация, хранение под вазелиновым маслом, периодические пересевы, жизнеспособность, титруемая кислотность, антимикробный спектр действия.
В литературе часто встречаются факты, свидетельствующие о нестабильности ряда свойств у молочнокислых бактерий [1,2].
Традиционные методы поддержания культур микроорганизмов сводятся к их выращиванию на богатых питательных средах с частыми пересевами. При этом имеют место мутационные изменения и автоселекция, что часто приводит к потере у штаммов важных физиолого-биохимических свойств. Длительное хранение культур без потери ценных свойств у продуцентов возможно, если резко затормозить все протекающие в них жизненные процессы, в том числе и генетические перестройки. При этом культура переводится в состояние, близкое к анабиозу [3,4].
Известны многие способы хранения культур молочнокислых бактерий: при периодических пересевах, в 25%-ном растворе глицерина при -20°С, под слоем вазелинового масла на агаризо-ванной среде и в лиофильном состоянии 7. Ни один из известных способов хранения не является универсальным [4,8].
Задача данной работы состояла в изучении стабильности некоторых важных физиолого-биохимических свойств: жизнеспособности клеток, бродильной и антибиотической активностей у молочнокислых бактерий при разных условиях хранения.
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объектами исследований служили 20 культур молочнокислых бактерий из коллекции культур кафедры микробиологии МГУ. Были использованы различные способы хранения.
Лиофилизация. Культуры молочнокислых бактерий, выращенные на жидкой среде, соответствующей их физиологическим потребностям до стационарной стадии роста, центрифугировали с целью отделения клеток, ресуспендировали в защитной среде и лиофилизировали на установке фирмы «Крист» марки Бетта А (Германия) под вакуумом при температуре -30°С до остаточной влажности 2.5-4.0%. В качестве защитной среды использовали водный раствор, содержащий 10 г/л желатина и 100 г/л сахарозы как криопротекто-ры, снижающие величину активности воды и изменяющие осмотическое давление в среде, что повышало устойчивость микроорганизмов к дегидратации. Лиофильно высушенные штаммы хранили в ампулах при 4°С в условиях бытового холодильника. После лиофилизации и в процессе длительного хранения культуры восстанавливали в обезжиренном стерильном молоке (обрате) и определяли количество жизнеспособных клеток посредством высева из серии разведений в физиологическом растворе на модифицированную среду МК.5 следующего состава (г/л): дрожжевой экстракт — 5, глюкоза 20, К2НР04 • ЗН20 — 2.0, ацетат натрия — 5, цитрат аммония — 2, МgS04 • 7Н20 — 0.2 МnS04 — 0.05, твин-80 — 1 мл, цистеин 0.4%-ный -25 мл, агар-агар — 20, МПБ — 1 л (рН 6.2-6.5).
Восстановленные штаммы культивировали в ферментационных средах для изучения их физиолого-биохимических свойств как сразу после лио-филизации, так и в ряде пассажей и после 5, 7, 9, 14,15, 20, а Leuconostoc mesenteroides после 35 лет хранения. Бактерии рода Lactococcus, такие, как L. Lactis subsp. Lactis L. Lactis subsp. cremoris выращивали в обрате и в жидкой среде МКЗ вышеуказанного состава без агара, а бактерии рода Lactobacillus (L.acidophilus, L.bulgaricus, L.casei, L.lindneri. L.plantarum, L.pentoaceticum), Lactococcus lactis subsp.diacetilactis и Leuconostoc mesenteoides выращивали в 8°Б (Балг) сусле с дробиной (раздробленные проросшие зерна ячменя) с добавлением стерильного мела для нейтрализации продуктов обмена в течение 20-24 ч.
Лактококки культивировали при 30°С, а лактобациллы — при 37°С.
Хранение под вазелиновым маслом. Одновременно 13 штаммов хранили под стерильным медицинским вазелиновым маслом в полужидкой среде МRS того же состава, но с 0.15% агара. Для хранения под маслом культуры выращивали в пробирках с 10 мл полужидкой среды МRS в течение 48 — 72 ч. Затем среду нейтрализовали 10%-ным раствором NаНСОз и заливали стерильным маслом, чтобы высота слоя масла над поверхностью инкубационной среды была равна 1.5 см. Продолжительность хранения культур под слоем масла составляла 12 мес. В качестве контроля использовали культуры молочнокислых бактерий, хранившиеся в пробирках в виде молочного сгустка в условиях бытового холодильника при 4°С, которые периодически пересевали 1 раз в 30 сут в обрат и жидкие среды вышеуказанного состава применительно к конкретному штамму. По истечении срока хранения изучали изменение выживаемости бактерий, их бродильной активности и способности к синтезу бактериоцинов.
Затем культуру микроорганизмов переносили опять в обрат, культивировали при оптимальных для каждого штамма температурных режимах до образования молочного сгустка и закладывали для последующего срока хранения.
Количество живых клеток определяли прямым подсчетом колоний, выросших на чашках Петри после инкубирования на среде МКЗ с добавлением 2.5%-ного агар-агара, из серийных 10-кратных разведений в физиологическом растворе (0.8% NaCl) бактериальных суспензий после восстановления культур из лиофильного состояния и после разных условий хранения.
Как показатель бродильной активности молочнокислых бактерий (способности к накоплению органических кислот) определяли общую титруемую кислотность при росте их в жидких средах [11]. Общую титруемую кислотность выражали в градусах Тернера, как количество мл 0.1 N КаОН, необходимое для нейтрализации образовавшейся в процессе роста и развития кислоты (1°Т = 0.0075% молочной кислоты).
Поскольку одним из основных показателей физиолого-биохимической активности молочнокислых бактерий является их способность к синтезу бактериоцинов, различающихся по химической структуре и спектру антимикробного действия [1, 12-14], изучали их антибиотическую активность по отношению к разным группам микроорганизмов. В качестве тест-культур использовали 6 штаммов грамотриЦательных бактерий: Alcaligenec faecalis 82, Сотатопаз acidovorans45, Еscherichia соli 52, Pseudomonas fluorescens 80, Рroteus vulgaris 206, Serratia таrсеsсепs 208; 6 штаммов грамположительных бактерий: Ваcillus соаgи1апs 429, Ваcillus тусоides 32, Васillus subtilis 2, Мucrococcus luteus 128, Мусоbacterium smegmatis 377, Staphylococcus аиrеиs 144, а также три штамма дрожжей (Сапdida guilliermondii 217, Rhodotorula aurantiaca 226, Sассhаrотусеs сerevisiae 230), грибы (Аsреrgillus niger 369, Fиsаriuт охуsроrит).
Источник
