Способ получения препарата бактериальной

Технология получения бактериальных концентратов

ОСОБЕННОСТИ ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КОНЦЕНТРАТОВ

Основной задачей технологии производства бактериальных препаратов на основе живых микроорганизмов заключается в обеспечении таких условий получения и переработки микробной массы, при которых в готовой продукции сохранилось бы максимальное число жизнеспособных клеток и не утрачивались бы их полезные свойства.

В зависимости от способа консервирования различают жидкие, замороженные и сухие бактериальные препараты

СУХИЕ ПРЕПАРАТЫ. Достоинством сухих препаратов («Бифиформ», «Линекс», «Бактисубтил» и др.) следует считать то, что бактерии находятся как бы в состоянии спячки. Поэтому они не так чувствительны к перепадам температурного режима, их проще хранить. Однако, в случае использования сухих препаратов или сухих заквасок прямого внесения, не всегда можно говорить о получении эффективного продукта питания, так как большинство штаммов молочнокислых бактерий при сушке значительно изменяют свою активность, находясь в глубоком анабиозе и восстанавливают её только лишь после 3—5 делений после попадания в благоприятную для размножения среду. Им требуется порядка (8—10) часов для перехода к активному физиологическому состоянию, однако к этому времени большая их часть уже может быть естественным образом элиминирована из кишечника. Для того чтобы хоть какая-то часть бактерий закрепилась в кишечнике, их концентрация в сухих препаратах должна быть не менее, чем 10 10-12 живых бактерий в 1 грамме сухого порошка. Столь высокую концентрацию живых бактерий получить в условиях распылительной сушки или лиофилизации практически невозможно, т. к. от 10-25% популяций бактерий – пробиотиков гибнет, а сохранившие жизнеспособность бактерии резко снижают свою пролиферативную активность, в результате чего основная доля бактерий – пробиотиков при их назначении проходит через кишечник человека и животных транзитом, оказывая лишь минимальное лечебно-профилактическое действие и не проявляя способности к колонизации (заселению) данной экологической ниши. Недостатком также следует считать высокую себестоимость производства сухих концентратов вследствие того, что оборудование для сушки (лиофилизации), располагающееся в технологической цепочке производства концентрата, настолько дорогостоящее, что далеко не каждое предприятие может позволить себе его закупить.

ЖИДКИЕ ПРОБИОТИКИ. В отличие от сухих, в жидких пробиотиках бактерии постоянно находятся в активном состоянии. Главное достоинство жидких пробиотиков заключается в том, что бактерии в них находятся в живой биологически активной форме. Свое благотворное воздействие они оказывают незамедлительно — сразу после приема препарата, что выгодно отличает жидкие пробиотики от аналогичных сухих препаратов.

Кроме живых бактерий, жидкие пробиотики содержат продукты их жизнедеятельности: весьма полезные для организма человека биологически активные вещества: незаменимые аминокислоты, органические кислоты, витамины, интерфероностимулирующие и иммуномодулирующие вещества. Указанные метаболиты синтезируются пробиотическими микроорганизмами не только в специально подобранной питательной среде, но и в иных пищевых средах, а также в кишечнике человека.

Жидкие пробиотики благодаря своим поистине уникальным лечебным, профилактическим, общеукрепляющим действиям охватывают практически все области медицины. Длительная апробация в ведущих клиниках во многих регионах России показала высокую эффективность их применения в гастроэнтерологии, проктологии, акушерстве и гинекологии, педиатрии, хирургии и травматологии, фтизиатрии, дерматовенерологии, онкологии, в спортивной медицине, косметологии, в гидроколонотерапии и других областях.

Жидкие пробиотики одинаково полезны и безопасны и для взрослых, и для детей. Жидкие пробиотики намного дешевле сухих препаратов (по количеству содержащихся в них живых бактерий), что объясняется отлаженными технологиями культивирования и отсутствием стадии сушки. Комплексное использование жидких пробиотиков дает возможность более результативно стабилизировать микрофлору кишечника, обмен веществ и укрепить иммунитет.

ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ЦИКЛ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Цикл получения бакконцентратов состоит из приготовления питательной среды и инокулята, накопления биомассы бактерий, выделения и концентрирования биомассы.

Анализ технологии производства бактериальных препаратов показал, что перспективным является совершенствование первых – базовых этапов, которые должны лечь в основу разработки последующих стадий. Поэтому важное значение имеет этап накопления биомассы микроорганизмов, эффективность которого в большей степени зависит от условий культивирования и активности посевного материала.

Одним из наиболее распространенных приемов интенсификации роста бактерий является оптимизация состава питательных сред. Идеальный бактериальный препарат должен готовиться с использованием стандартной питательной среды.

Молочнокислые бактерии различаются по потребности в стимуляторах роста, в связи с этим предложены различные питательные среды для выращивания мезофильных, термофильных молочнокислых стрептококков и ацидофильных палочек. В качестве источника углерода они могут использовать моно- и дисахариды, органические кислоты. На обычных питательных средах они не развиваются, а растут на средах с добавлением аминокислот, гидролизатов белков мяса, лактоальбумина, казеина, различных видов муки. Положительно влияет на рост микроорганизмов добавление кукурузы, моркови, картофеля, дрожжевого автолизата, а так же некоторые пептиды, пурины, жирные кислоты.

Размножение бифидобактерий обусловлено наличием факторов роста. Многие виды нуждаются в биотине, пантотеновой кислоте, цистеине, аминосахарах, коферменте А, олигосахарах, некоторых ненасыщенных жирных кислотах и др. В синтетических средах бифидобактериям для роста необходимы железо, магний, фосфаты, хлориды калия и натрия, в некоторых случаях марганец.

Молоко как среду накопления клеток молочнокислых бактерий, без специальной предварительной обработки использовать невозможно из-за коагуляции белков, что очень затрудняет отделение клеток. В связи с этим были проведены многочисленные исследования по использованию для накопления биомассы жидкой среды, состоящей из стандартных компонентов, а также молочной сыворотки с добавлением необходимых факторов роста. В качестве стимуляторов роста различными авторами было рекомендовано использовать дрожжевой автолизат, кукурузный экстракт, микроэлементы.

При культивировании анаэробных микроорганизмов необходимы компоненты для уплотнения среды. В большинстве случаев для этих целей применяют агар-агар. В качестве альтернативного решения, для снижения затрат и повышения функциональных характеристик готового продукта, представляется возможным частичная или полная замена агара на полисахариды растительного происхождения со способностью к гелеобразованию.

В процессе производства бактериальных препаратов важным этапом является культивирование микроорганизмов. Основными факторами, ограничивающим рост микроорганизмов в периодических процессах являются исчерпание питательных сред и накопление в культуральной среде токсических продуктов метаболизма. Поэтому в микробиологической практике находят режимы дробной подачи некоторых субстратов в зону роста.

Однако проблема сохранения жизнеспособности и основных свойств микробов при производстве бактериальных препаратов состоит не только в подборе комплекса питательных веществ для их роста. Важную роль при этом отводится условиям культивирования бактерий.

Цикл развития культуры начинается с засева среды. Засев осуществляется в таком количестве, которое обеспечивает начало роста микроорганизмов с минимальной задержкой. Для многих молочнокислых бактерий активный «омоложенный» посевной материал применяется в количестве 1-3% от объема среды. Посевной материал, попав в свежую полноценную среду, постепенно начинает размножаться. Через определенное время в стационарной фазе масса клеток в питательной среде достигает максимального уровня.

Немаловажную роль для роста бактерий играют буферные свойства среды. Для поддержания оптимальной для роста буферной емкости среды используют натриевые или калиевые соли лимонной, фосфорной или уксусной кислот.

Следующим необходимым этапом при получении бактериальных препаратов является отделение биомассы от культуральной среды. Для этой цели используют сепараторы или бактофуги. При этом эффект выделения бактериальных клеток из культуральной жидкости определяется формой клеток, плотностью питательной среды, режимом бактериотделения.

Существенно влияет на активность полученных препаратов и на их стойкость продолжительность выращивания клеток перед их отделением.

Многие исследователи рекомендуют отделять клетки в конце логарифмической, перед началом стационарной фазы роста, что обеспечивает максимальный выход клеток и их стойкость. Затем в зависимости от выбранного способа консервирования биомассы производится розлив во флаконы и хранение, замораживание или высушивание.

Необходимо отметить, что спектр видов бактериальных препаратов, постоянно расширяется. Это связано со стремлением улучшить органолептические свойства продуктов, повысить их функциональные качества.

Одним из перспективных направлений является разработка новых поливалентных и комбинированных препаратов с иммобилизованными пробиотическими бактериями различных таксономических групп. Пока выпускаются только два сорбированных пробиотика бифидумбактерин форте и пробифор, представляющих собой высушенную микробную массу живых бифидобактерий, иммобилизованных на активированном угле. Механизм терапевтического действия этих препаратов отличается тем, что искусственно созданные сорбированные на частичках угля микроколонии бифидобактерий находятся в ином физико-химическом состоянии, что обеспечивает более интенсивное их взаимодействие с пристеночным слоем слизистой кишечника и заселение кишечника бифидобактериями, что существенно повышает их антагонистическую активность.

Поиск и применение новых технологических приёмов для повышения функциональных показателей пробиотиков является одной из главных задач биотехнологии. В настоящее время наряду с биологической активностью ингредиентов для создания препаратов необходимо оценивать и источник их выделения. Применение натуральных пищевых волокон состоящих в комплексе с биологически ценными веществами для стимулирования активности и жизнеспособности бифидобактерий позволит повысить пробиотические свойства бактериального концентрата и их устойчивость при технологической обработке и длительном хранении.

Некоторые технологии получения бакконцентратов:

Источник

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ BACILLUS SUBTILIS Российский патент 1998 года по МПК A61K35/74 A01N63/00 C12N1/20 C12N1/20 C12R1/125

Описание патента на изобретение RU2105562C1

Изобретение относится к технологии производства сухих бактериальных препаратов для сельского хозяйства, медицины и пищевой промышленности.

Известен способ получения бактериального препарата на основе штамма Bacillus subtilis c-3102 (заявка ЕПВ N 0287699, кл. C 12 N 1/20, опубл. 26.10.88). Способ включает суспензионное культивирование штамма бактерий в питательной среде, содержащей источник углерода, источник азота, неорганические вещества, витамины, аминокислоты, при pH 6 8 и температуре 35 40 o C в течение от 0,5 до 7 дней. Бактериальную культуру отделяют от питательной среды, промывают и концентрируют. Полученный продукт высушивают и смешивают с добавками-наполнителями для получения фармацевтических или ветеринарных препаратов.

Недостатком данного способа является сложность технологии получения препарата, т.к. способ включает операции по отмывке бактериальных клеток от компонентов питательной среды, а затем концентрирование бактерий центрифугированием. Препарат имеет малые сроки хранения, т.к. содержит живые бактерии в виде вегетативных палочек, которые не могут длительно сохранять свои биологически активные свойства.

Известен другой способ получения бактериального препарата на основе Bacillus subtilis (заявка Японии N 13-31171, кл. A 61 K 35/74, опубл. 02.05.91), включающий культивирование штамма бактерий на зерне или продукте его измельчения с последующими сушкой и дополнительным измельчением полученного продукта. Препарат используют в качестве кормовой добавки для домашних животных и птиц.

Недостатком данного способа является низкая чистота полученного препарата, вследствие чего он имеет узкую область применения (только как кормовая добавка для животных). Кроме того, препарат также имеет малые сроки хранения, т.к. содержит живые бактерии, которые не могут длительно сохранять свои биологически активные свойства.

Известен способ получения препарата для защиты растений от болезней (пат РФ N 2019966, кл. A 01 N 63/00, опубл. 1994), включающий суспензионное культивирование штамма бактерий Вас. subtilis ИПМ-215 до максимального накопления биомассы с последующим снижением концентрации основных компонентов питательной среды для перевода бактерий в споровую форму. Полученную культуральную жидкость со спорами бактерий подвергают сушке и смешивают с наполнителем. В качестве наполнителя используют диаммоний фосфат, поверхностно-активные вещества (ОП-7 или ОП-10) и сульфитно-дрожжевую бражку. Препарат имеет следующее соотношение компонентов, мас. сухой концентрат культуральной жидкости (титр спор не менее 40•10 9 спор/г) 40 65, ПАВ 4 7, сульфитно-спиртовая бражка остальное.

Недостатком является низкая чистота получаемого препарата, т.к. он содержит компоненты среды культивирования, что ограничивает область его применения (только как средство защиты растений). Данная технология получения спор бактерий не позволяет получить высокий титр этих спор (не более 4• 10 10 спор/г), т. е. клетки бактерий находятся в разных условиях в процессе спорообразования, в связи с чем часть бактерий гибнет, не успев образовать опоры. Кроме того, технология получения препарата сложна и имеет высокие энергозатраты, т.к. предусматривает сушку препаратов.

Известен способ получения бактериального препарата на основе Bacillus subtilis путем культивирования штамма бактерий Bacillus subtilis ВКМ В-1666 на плотной питательной среде с последующим отделением клеток от среды и лиофильным высушиванием их (авт. свид. СССР N 1708350, кл. A 61 K 35/66, 1992).

Данный способ имеет те же недостатки, что и вышеописанный.

Задачей предлагаемого изобретения является создание такого способа получения бактериального препарата на основе Bacillus subtilis, который обеспечивал бы повышение титра спор бактерий и чистоту препарата, а также упрощение технологии его получения.

Указанная задача решается тем, что в способе получения бактериального препарата, включающем культивирование бактерий Bac.subtilis на питательной среде до максимального накопления биомассы, перевод бактерий в споровую форму и последующее смешение их с наполнителем, согласно изобретению перед смешением с наполнителем споры бактерий Bac.subtilis отделяют от питательной среды, а в качестве наполнителя используют смесь сахара и крахмала при соотношении биомассы спор бактерий и крахмала не более 1:1 и биомассы спор бактерий и сахара не более 1:50.

При увеличении соотношения спор бактерий и крахмала более 1:1 не все споры будут иммобилизованы на крахмал, что снизит качество приготовляемого препарата.

При увеличении соотношения спор бактерий и сахара более 1:50 не обеспечиваются требуемые условия консервации спор бактерий и оптимальное перераспределение влаги в массе препарата, что снижает сроки его хранения.

Споры бактерий Bac.subtilis получают путем охлаждения биомассы до температуры, не превышающей 10 o C, и выдерживания при этой температуре не менее 1 сут.

В качестве питательной среды при культивировании бактерий используют плотный питательный агар, включающий пептоно-дрожжевой или мясопептонный экстракт. Причем поверхность питательной среды покрывают полупроницаемой мембраной с последующим нанесением на нее посевной дозы бактерий Bac.subtilis в концентрации, не превышающей 10 8 кл./мл. Отделение наработанной биомассы бактерий в споровой форме от питательной среды осуществляют путем снятия биомассы бактерий с поверхности полупроницаемой мембраны с помощью стеклянного шпателя.

Для обеспечения иммобилизации бактериальных спор на частицах крахмала предварительно приготавливают смесь сахара и крахмала в соотношении 1:1, которую перемешивают с биомассой бактерий при соотношении биомассы и смеси указанных компонентов наполнителя не более 1:3 с последующим введением в полученную смесь остальной части сахара.

При предварительном смешении крахмала с сахаром в соотношении 1:1 снижается потребность в физиологическом растворе в несколько раз, т.е. процесс иммобилизации спор бактерий на частицы крахмала осуществляется при минимальном разбавлении смеси. При увеличении соотношения биомассы спор бактерий и смеси сахара с крахмалом более 1:3 не все споры бактерий могут быть иммобилизованы на частицах крахмала.

При получении препарата используют концентрат спор бактерий Bac.subtilis (после снятия с полупроницаемой мембраны) с титром не менее 3•10 10 спор/г при следующем соотношении компонентов, мас.

Споры бактерий Bac.subtilis 0,1 1,0
Крахмал 1,0 3,0
Сахар Остальное
Увеличение чистоты препарата обеспечивается за счет культивирования бактерий на поверхности полупроницаемой мембраны, вследствие чего компоненты питательной среды практически не смешиваются с биомассой бактерий и не загрязняют ее, а последняя представляет собой готовый концентрат, не требующий фильтрации или центрифугирования.

Высокий титр спор бактерий (до 10 10 спор/г) обеспечивается за счет создания одинаковых условий спорообразования для каждой бактериальной клетки.

Иммобилизация спор бактерий на крахмале обеспечивает им дополнительную механическую защиту, предотвращает слипание спор бактерий и обеспечивает более равномерное их распределение в массе наполнителя.

Сахар является не только сорбентом-наполнителем, но и оказывает на препарат стабилизирующий и консервирующий эффект, создает более мягкие условия для хранения спор бактерий.

Кроме того, предлагаемый способ значительно упрощает технологию получения препарата как на этапах культивирования (в технологии отсутствует использование дорогих ферментеров, не требуются очистка и концентрирование препарата), так и на этапах получения готовой его формы (удаление или перераспределение влаги совмещено с получением готовой формы препарата).

Методика культивирования бактерий Bac. subtilis.

Для получения препарата используют штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-4759, обладающий антивирусной и антибактериальной активностью, способный наряду с подавлением патогенной и условно патогенной микрофлоры продуцировать α-2 интерферон человека и характеризующийся безвредностью для теплокровных.

Культивирование штамма бактерий осуществляют на плотной питательной среде следующего состава:
Агар-агар 20 г/л
Пептон 12 г/л
Дрожжевой экстракт 5 г/л
NaCl 5 г/л
Вода До 1л
Канамицин 50 мг/л
На 1 л агаризованной среды требуется 25 30 мл бактерий с титром около 10 8 кл/мл. Питательную среду формируют в емкости в виде слоя, на который укладывают полупроницаемую мембрану, например целлофановую пленку. Сверху на пленку наносят посевную дозу штамма бактерий. Культивирование осуществляют в термостате при температуре 34 37 o C в течение 20 24 ч. Далее емкость переносят в термостат с температурой 6 10 o C и выдерживают при этой температуре в течение 1 сут. до образования спор бактерий. При указанном способе культивирования может быть получен титр спор 3х10 10 спор/г. Споры бактерий снимают стеклянным шпателем с поверхности целлофановой пленки и собирают в стерильную емкость. Указанные споры бактерий представляют собой чистый концентрат биомассы, из которой приготавливают препарат.

Методика культивирования штамма бактерий Bac. subtilis N 534, депонированного во Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов под N 1666 D.

Культивирование штамма бактерий осуществляют на плотной питательной среде. Для этого 3%-ный стерильный мясопептонный агар объемом 250 мл размещают к емкость. На плотную питательную среду укладывают целлофановую пленку. Сверху на пленку наносят с соблюдением асептики 10 мл взвеси производственного штамма B. subtilis ВКМ N B-1666 D, содержащей по 10 8 бактериальных клеток в 1 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида. Емкость помещают в термостат с температурой 36 37 o C. Через 24 ч с соблюдением асептики емкость с выросшей культурой переносят в термостат с температурой 7 o C и выдерживают при этой температуре в течение 1 сут. до образования спор бактерий. Споры бактерий снимают стеклянным шпателем с поверхности целлофановой пленки и чистую биомассу собирают в стеклянную емкость. При указанном способе культивирования может быть получен титр спор 3х10 10 спор/г.

Приготовление готовой формы препарата на основе Bac. subtilis ВКПМ В-4759.

Вначале приготавливают смесь сахара с крахмалом в соотношении 1:1. Далее к 5 ч. полученной смеси наполнителя добавляют 1 ч. биомассы спор бактерий и перемешивают.

При этом происходит иммобилизация спор бактерий на частицах крахмала. Далее в полученную смесь вводят сахар при соотношении биомассы спор бактерий и сахара 1:300. В результате получают готовый концентрированный препарат при следующем соотношении компонентов, мас.

Споры бактерий Bac. subtilis ВКПМ В-4759 с титром 3•10 10 спор/г 0,33
Крахмал 0,82
Сахар Остальное до 100%
Остаточная влажность препарата составляет 2 5%
Пример 4.

Приготовление готовой формы препарата на основе Bac. subtilis ВКМ NB-1666 D.

Вначале приготавливают смесь сахара с крахмалом в соотношении 1:1. Далее к 3 ч. полученной смеси наполнителя добавляют 1 ч. биомассы спор бактерий и перемешивают. В полученную смесь добавляют физиологический раствор, объем которого равен объему биомассы бактерий, и интенсивно перемешивают. При этом происходит иммобилизация спор бактерий на частицах крахмала. Далее в полученную смесь вводят сахар при соотношении биомассы спор бактерий и сахара 1: 200. В результате получают готовый концентрированный препарат при следующем соотношении компонентов, мас.

Споры бактерий Bac. subtilis ВКМ NB-1666 D с титром 3,0х10 10 спор/г — 0,49
Крахмал 0,74
Сахар Остальное до 100%
Остаточная влажность препарата составляет не более 5%
Пример 5.

Данные по хранению препаратов Bac.subtilis в концентрированной форме при температуре 24 o C приведены в табл.1.

Из табл. 1 следует, что в течение 12 месяцев хранения препаратов Bac.subtilis в споровой форме при температуре 24 o C их титр практически не изменился, что подтверждает высокую термостабильность препаратов в споровой форме, обеспечивающую значительное упрощение технологии их применения в сельском хозяйстве и медицине.

Применение препаратов Bac. subtilis штаммов ВКПМ В-4759 и ВКМ В-1666.

Препарат на основе штамма Bac. subtilis ВКПМ NB-4759 обладает антивирусной и антибактериальной активностью и может быть использован для профилактики и лечения животных и человека. Кроме того, экспериментальные данные подтверждают возможность использования данного препарата как средства защиты плодов растений от фитофтороза.

Препарат на основе штамма Bac. subtilis 534 ВКМ NB-1666 используют для профилактики и лечения гнойно-воспалительных процессов различной локализации /гнойные раны, остеомиелит, сепсис, пневмония и др./, пищевой аллергии, дисбактериоза у теплокровных животных и человека.

При использовании препарата в виде концентрата, полученного предлагаемым способом /пример 3 и 4/, как профилактического и лечебного средства для человека его смешивают с пищевой добавкой, например глюкозой, сахаром в соотношении 1:100-1:200.

Концентрат препарата при использовании его как кормовой добавки для животных смешивают с наполнителем, например мукой или отрубями в соотношении 1: 200-1:300. Продукт повышает привес животных, улучшает эффективность использования кормов и предупреждает заболеваемость животных.

Средство защиты растений получают путем смешения концентрата с водой /перед применением/ или в сухом виде с торфом, мелом или золой в соотношении 1:200 -1:500.

Промышленная применимость. Изобретение может быть использовано в медицине, ветеринарии и в сельском хозяйстве как средство защиты растений.

Похожие патенты RU2105562C1

название	год	авторы	номер документа
ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SUBTILIS ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ГРИБНЫХ БОЛЕЗНЕЙ РАСТЕНИЙ	1995	Костровский В.Г. Леляк А.И. Ламанович Н.В. Варанд А.В. Репин В.Е.	RU2086128C1
ШТАММЫ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis И Bacillus amyloliquefaciens, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИЕ ВОССТАНОВЛЕНИЕ МИКРОБИОЦЕНОЗОВ ПОЧВЫ И ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА ЖИВОТНЫХ, ОБЛАДАЮЩИЕ БАКТЕРИЦИДНОЙ, ФУНГИЦИДНОЙ И ВИРУЛИЦИДНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ЭТИХ ШТАММОВ	2011	Леляк Анастасия Александровна Леляк Александр Иванович	RU2482174C2
ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS LICHENIFORMIS (ЕГО ВАРИАНТЫ), ОБЛАДАЮЩИЙ БАКТЕРИЦИДНОЙ И ФУНГИЦИДНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ЭТОГО ШТАММА	2010	Леляк Анастасия Александровна Леляк Александр Иванович	RU2440413C1
ШТАММЫ БАКТЕРИЙ BACILLUS SUBTILIS И BACILLUS LICHENIFORMIS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В КАЧЕСТВЕ КОМПОНЕНТОВ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВИРУСНЫХ И БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ, И ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ЭТИХ ШТАММОВ	1997	Щелкунов С.Н. Петренко В.А. Рязанкина О.И. Репин В.Е. Андреева И.С. Ильичев А.А. Белявская В.А. Сандахчиев Л.С. Серпинский О.И. Сиволобова Г.Ф. Синяков А.Н. Перминова Н.Г. Тимофеев И.В. Леляк А.И. Ноздрин Г.А. Катковский Л.П. Данилюк Н.К. Масычева В.И.	RU2142287C1
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ СПОРООБРАЗУЮЩИХ ШТАММОВ Bac. subtilis И Bac. licheniformis	2010	Иваненко Алексей Александрович	RU2432393C1
ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ ПРОБИОТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО	2006	Леляк Александр Иванович Малярчук Анастасия Александровна	RU2314819C1
ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЗУБНАЯ ПАСТА	1999	Леляк А.И. Катковский Л.П.	RU2155028C1
Средство для стимуляции регенерации ткани печени при парентеральном введении и способ стимуляции регенерации ткани печени на его основе	2017	Леляк Анастасия Александровна Леляк Александр Иванович	RU2643591C1
ЛЕЧЕБНО-КОСМЕТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО	2006	Леляк Александр Иванович Малярчук Анастасия Александровна	RU2314792C1
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ СПОРООБРАЗУЮЩИХ ШТАММОВ Bac. subtilis И Bac. licheniformis	2010	Иваненко Алексей Александрович	RU2432392C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 105 562 C1

Реферат патента 1998 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ BACILLUS SUBTILIS

Использование: изобретение может быть использовано в микробиологической промышленности, сельском хозяйстве, пищевой промышленности и касается получения сухих бактериальных препаратов в споровой форме. Сущность изобретения: способ включает культивирование бактерий bacillus subtilis на поверхности полупроницаемой мембраны, расположенной на плотной питательной среде, до максимального накопления биомассы, а также перевод бактерий в споровую форму путем охлаждения клеток до температуры, не превышающей 10 o С, и выдерживания их при этой температуре не менее суток, последующее смешение спор бактерий с наполнителем. Перед смешением с наполнителем споры отделяют от полупроницаемой мембраны. В качестве наполнителя используют смесь сахара и крахмала при соотношении биомассы спор бактерий и крахмала не более 1:1 и биомассы спор бактерий и сахара не более 1:50. Способ позволяет повысить чистоту продукта и упростить технологию получения препарата. 4 з.п. ф-лы, 1 табл.

Формула изобретения RU 2 105 562 C1

1. Способ получения бактериального препарата на основе Bacillus subtilis, включающий засев и культивирование бактерий на питательной среде до максимального накопления бактериальных клеток с последующей их сушкой, отличающийся тем, что бактериальные клетки переводят в споровую форму, полученные споры отделяют от питательной среды, а сушке подвергают указанные споры путем смешения их с наполнителем, в качестве которого используют смесь сахара и крахмала при соотношении спор бактерий и крахмала не более 1 1 и спор бактерий и сахара не более 1 50. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что перевод бактерий Bac. subtilis в споровую форму осуществляют путем охлаждения клеток до температуры, не превышающей 10 o С, и выдерживания их при этой температуре не менее суток. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что засев бактерий Bac. subtilis в концентрации не превышающей 10 8 кл. /мл, осуществляют на полупроницаемую мембрану, расположенную на питательной среде, а отделение спор бактерий осуществляют с поверхности указанной мембраны. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что перед смешиванием спор с наполнителем готовят смесь крахмала с сахаром в соотношении 1 1 с последующим введением туда спор бактерий, полученную смесь перемешивают и дополнительно вносят остальную часть сахара, получая при этом готовый препарат. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что при получении концентрата препарата используют споры бактерий Bac. subtilis с титром не менее 3 • 10 1 0 спор/г при следующем соотношении компонентов, мас.

Споры бактерий Bac. subtilis 0,1 1,0
Крахмал 1,0 3,0
Сахар Остальное

Источник