Способ окраски по романовскому гимзе

Содержание

Окраска по Романовскому — Гимзе
Окраска по Романовскому — Гимзе
Содержание
Приготовление красителя
Специальный стандартный раствор Гимза
Методика окраски
Результат окраски
См. также
Полезное
Смотреть что такое «Окраска по Романовскому — Гимзе» в других словарях:
Метод окраски микропрепаратов по Романовскому-Гимзе
Комментарии к статье «Метод окраски микропрепаратов по Романовскому-Гимзе»
Метод Романовского-Гимза
Окраска по Романовскому

Окраска по Романовскому — Гимзе

Окраска по Романовскому — Гимзе — цитологический метод окраски простейших, бактерий, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) при световой микроскопии. Предложена в 1904 году Густавом Гимзой. Окрашивает ацидофильные образования в различные оттенки красного цвета, базофильные — в цвета от пурпурного до синего.

Содержание

Приготовление красителя

Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчета 1-2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20 — 25 минут при 37 °C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии.

Красящую смесь Романовского-Гимзы, которая имеет в основе краску Романовского Райта, в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объемов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя). Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней. Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.

Специальный стандартный раствор Гимза

Состав красителя:

Азур 1 — 3,772 г Эозин — 2,165 г Метиленовая синька (медиц.) — 1,563 г Метанол (ЧДА) — 750,0 мл Глицерин (ЧДА) — 256,0 мл

Методика окраски

Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером, но рН буфера зависит от вида мазка: для мазка костного мозга — 5,8 — 6,0, для мазка крови — 6,4 — 6,5, для выявления простейших — 6,8, малярийного плазмодия — 7,0 — 7,2.
Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии.

Результат окраски

Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток — в голубой, ядра — в красный. При окрашивании простейших их цитоплазма приобретает голубой цвет, а ядра — красно-фиолетовый.

См. также

Wikimedia Foundation . 2010 .

Полезное

Смотреть что такое «Окраска по Романовскому — Гимзе» в других словарях:

Окраска по Романовскому — Гимзе цитологический метод окраски простейших, бактерий, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) при световой микроскопии. Предложена в 1904[1] году Густавом Гимзой. В авторской версии название красителя «Giemsasche… … Википедия

Окраска по Романовскому-Гимзе — цитологический метод окраски простейших, бактерий, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для облегчения их световой микроскопии. Краситель состоит из эозина, метиленового синего и азура, растворённых в метаноле или в… … Википедия

Окраска по Гимзе — Окраска по Романовскому Гимзе цитологический метод окраски простейших, бактерий, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для облегчения их световой микроскопии. Краситель состоит из эозина, метиленового синего и азура,… … Википедия

Окраска микроорганизмов — (крашение микробов) комплекс методов и приёмов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в прикладной… … Википедия

Окрашивание по Романовскому — Гимзе цитологический метод окрашивания микроорганизмов, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для изучения методом световой микроскопии. Предложена в 1904[1] году Густавом Гимзой. В авторской версии название… … Википедия

Крашение микробов — Окраска микроорганизмов (крашение микробов) комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в… … Википедия

Окрашивание микробов — Окраска микроорганизмов (крашение микробов) комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в… … Википедия

Лейшманио́зы — (leishmanioses) группа трансмиссивных протозойных болезней, вызываемых жгутиковыми простейшими рода Leishmania, переносчиками которых служат москиты, относящиеся к роду Phlebotomus. Вне зависимости от вида лейшмании в своем жизненном цикле… … Медицинская энциклопедия

Список паразитов человека — Паразиты человека это паразиты, заражению которыми подвержен человек. Общее определение слова «паразит» касается не только многоклеточных и простейших, живущих за счёт своего хозяина и во вред последнему, но также вирусов, бактерий и грибов … Википедия

Бакте́рии — (греч. baktērion палочка) одноклеточные микроорганизмы с примитивной цитоплазмой и ядром без ядрышка и ядерной оболочки. Относятся к прокариотам. Наряду с другими микроорганизмами широко распространены в почве воде, воздухе, заселяют… … Медицинская энциклопедия

Источник

Метод окраски микропрепаратов по Романовскому-Гимзе

Метод окраски микропрепаратов по Романовскому-Гимзе — это один из самых популярных методов окрашивания бактерий, простейших, а так же клеточных структур и тканей самых различной структуры. Данный м метод используется в том числе и для исследований крови посредством световой оптической микроскопии. Окраска по Пинчуну-Романовского-Гимзе впервые была предложена в 1904 году Густавом Гимзой.

Посредством данного метода окраске подлежат ацидофильные образования в разные оттенки красного цвета. Образования базофильного характера окрашиваются в цвет от пурпурного до синего.

Момент окрашивания:

Перед началом окрашивания готовый краситель жидкого вида разводят в дистиллированной воде в соотношении 1-2 капель красителя на 1 мг воды. Мазки окрашиваются во влажной камере при температуре 37 °C в течение 20-25 минут. После завершения окраски мазки промываются проточной водой, сушатся на воздухе, а затем исследуются с помощью масляных импрессий.

Красящую смесь Романовского-Гимзы, в основе которой имеется краска Романовского Райта, растворяют в виде порошка в смеси равноправных объемах глицерина и метилового спирта в соотношении 800 мг красителя к 100 мл растворителя.

Краситель обладает плохой растворимостью, поэтому его следует перетереть с растворителем в количественном соотношении 300мг к 100 мг, затем, добавлять краситель при этом постоянно помешивать массу до получения требуемой концентрации. На приготовление красителя требуется несколько дней. Следует акцентировать внимание на том, что в качестве растворителей нужно применять химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как именно примеси являются причиной ухудшения свойств красителя. 100 % этиловый спирт может стать идеальной заменой метиловому спирту. Готовую красящую смесь следует хранить в плотно закрытом сосуде в прохладном сухом месте.

Специальный раствор Гимза. Составляющие красителя:

Азур 1 — 3,772 г
Эозин — 2,165 г
Метиленовая синька (медиц.) — 1,563 г
Метанол (ЧДА) — 750,0 мл
Глицерин (ЧДА) — 256,0 мл

Метод окрашивания:

Мазки, акцентированные в метиловом спирте, окрашивают на протяжении 40-120 минут раствором, в состав которого входят 1 мл приготовленной краски жидкой формы, 2 мл главного буферного раствора и 47 мл дистиллированной воды. Используют фосфатный буфер, на рН которого оказывает влияние вид мазка:

мазок костного мозга — 5,8 — 6,0;
мазок крови — 6,4 — 6,5;
выявление простейших — 6,8;
малярийные плазмодия — 7,0 — 7,2.

Ополаскивание проводят в дистиллированной воде, затем высушивают и изучают при иммерсии.

Результаты окрашивания:

Амастиготы Leishmania tropica, находящиеся – в макрофагах. Увеличение 10×100, окрашивание по Гимзе.

Бактерии вследствие окрашивания приобретают фиолетово-красный оттенок, цитоплазма клеток — голубой цвет, ядра — красный. Вследствие окраски простейших их цитоплазма становится голубого цвета, а ядра — красно-фиолетового.

Исследование «развернутого белка» имеет огромную область в биофизике и биохимии, адаптация АСМ под изучение «развернутого белка» заставила создать целую научную область и экспериментальную базу. В итоге это привело к техническому улучшению силовой спектроскопии, инструментальных возможностей, силы разрешения.

Ветеринария — это наука, которая занимается профилактикой и лечением травм и болезней животных, а также защитой человека от заражений общими для них инвазионными (возбуждаемыми животными паразитами) и инфекционными болезнями.

Комментарии к статье «Метод окраски микропрепаратов по Романовскому-Гимзе»

Владимир Григорьев: Цитата: «Окраска по Пинчуну-Романовского-Гимзе впервые была предложена в 1904 году Густавом Гимзой.»
Для справки: метод двойной окраски препаратов крови (катионный краситель азур B + анионный краситель эозин Y ) впервые предложен в 1889 г. российским врачом Ч. И. Хенцинским. В 1891 г. Д. Л. Романовский опубликовал свою диссертацию «К вопросу о паразитологии и терапии болотной лихорадки», имевшей сенсационный эффект для медицины того времени. Препараты крови Д. Л. Романовский окрашивал по методу своего российского коллеги. Соответственно, с работой Романовского Д.Л., получил мировую известность и метод окрашивания предложенный Ч. И. Хенцинским. В 1904 г. Г. Гимза (Gustav Giemsa) предложил улучшение одного из технологических аспектов раствора Романовского (добавление глицерина увеличивало растворимость и стабильность красителей). Работа Г. Гимзы называлась «Giemsasche Lözung für die Romanowsky färbung» (Раствор Гимзы для окраски по Романовскому), т.е. Гимза красил по Романовскому, в отличии от автора статьи.
Работа с микроскопами предполагает точность и самодисциплину, поэтому такая неаккуратность несколько настораживает. С глубоким уважением, Григорьев В.А.

Источник

Метод Романовского-Гимза

Окраска по Романовскому-Гимза является одним из основных методов при изучении морфологии риккетсий, хламидий, спирохет, простейших, а также при исследовании форменных элементов крови.

Техника. Краситель Романовского-Гимза состоит из азура, эозина и метиленового синего. Непосредственно перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды нейтральной реакции прибавляют 10 капель краски и тотчас же наливают на препарат, предварительно фиксированный жидким фиксатором, на один час. Затем краску сливают, препарат промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. Окрашивание происходит быстрее (30-40 минут), если препарат с краской поместить в термостат при 37°С. К 10 мл дистиллированной воды нейтральной или слабо щелочной реакции непосредственно перед окраской препарата прибавляют 10 капель краски и тот час же наливают на фиксированный препарат (или погружают препарат в стаканчик с краской). Через 1 час краску сливают, препарат промывают водой, высушивают на воздухе и исследуют. Если поместить препарат с краской в термостат при 37º, то окрашивание происходит быстрее (30-40 минут).

Результаты окрашивания зависят от свойства воды, поэтому следует проверять ее реакцию.

Микроскопическая картина. Риккетсии окрашиваются в розово-красный цвет, ядра эукариотических клеток – в красно-фиолетовый, а цитоплазма – в голубой.

Метод Здродовского

Техника. Препарат тонким слоем наносят на стекло, фиксируют на пламени и окрашивают разведенным карболовым фуксином (10-15 капель фуксина на 10 мл дважды дистиллированной воды) в течение 5 минут; затем препарат слегка обесцвечивают погружением на 1-3 секунды в слабую (0,01%) соляную кислоту, промывают водой и докрашивают в течение 30 секунд 1% раствором водного метиленового синего. Тонкий мазок фиксируют на пламени горелки. Окраску производят разведенным карболовым фуксином (10-15 капель фуксина на 10 мл дистиллированной воды) в течение 5 минут. Окрашенный препарат промывают водой, а затем обесцвечивают в растворе органической или минеральной кислоты (0,5% лимонная кислота, 0,01% соляная кислота) в течение 2-3 секунд. Затем препарат промывают водой и докрашивают 0,5% раствором метиленовой синьки в течение 0,5 минуты.

Микроскопическая картина. Риккетсии окрашиваются в рубиново-красный цвет, в то время как клетки хозяина обесцвечиваются кислотой и дополнительно окрашиваются в голубой (протоплазма) или синий (ядра) цвет (рис.20).

Источник

Окраска по Романовскому


	Гематология: методы Взятие крови из пальца Исследование морфологии эритроцитов Морфология лейкоцитов Методы исследования фагоцитоза in vitro Окраска по Райту Окраска по Лейшману. Окраска по Май-Грюнвальду Окраска по Нохту Окраска по Романовскому Окраска по Фрейфельд Определения Т- и В-лимфоцитов в периферической крови. Получение лейкоконцентрата Приготовление и фиксация мазков крови Приготовление мазков крови унифицированным методом Ретикулоциты Цитопатология клеток крови. Эритроцитометрия Эритроциты

Окраска по Романовскому

Азур-эозин по Романовскому

Окрашивание различных элементов клеток в разные цвета и оттенки смесью основных (азур II) и кислых (водорастворимый желтый эозин) красок.

Потенциальный риск применения набора – класс 2б.

При работе с набором необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

При работе с биологическими жидкостями следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как исследуемый материал является потенциально инфицированным, способным длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

Все использованные материалы дезинфицировать в соответствии с требованиями МУ-287-113.

Посуда и аппаратура.

•цилиндры мерные вместимостью 25 -1000 мл;

•калий фосфорнокислый однозамещенный;

•натрий фосфорнокислый двузамещенный;

•Штатив для мазков.

•Кювета со стеклянным мостиком для окраски.

Приготовление забуференной воды:

Взвесить на аналитических весах с точностью ±0,01 г 9,50 г натрия фосфорнокислого двузамещенного

безводного или 22,70 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного; навеску перенести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довести до 1000 мл дистиллированной водой и тщате льно перемешать (раствор 1).

Взвесить на аналитических весах с точностью ±0,01 г 9,07 г калия фосфорнокислого однозамещенного; навеску внести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довестидо 1000 мл дистиллированной водой и тщательно перемешать (раствор 2).

Внести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл 63 мл раствора 1 и 37 мл раствора 2, довести до 1000 мл дистиллированной водой и определить рН полученной

забуференнойводы на рН-метре; рН должен находиться в диапазоне 6,8 — 7,2. Полученную забуференную воду можно хранить при комнатной температуре (+18/+25°С).

В продаже имеется готовый раствор краски Романовского, а также сухая краска Романовского (Гимзы), из которой приготовляют раствор следующим образом: 3,8 г сухой краски Романовского растворяют в 250 мл чистого метилового или этилового спирта (последний хуже).

Раствор оставляют на 3—5 сут, часто взбалтывая для лучшего растворения краски.

Затем прибавляют 250 мл чистого глицерина и вновь оставляют на 3—5 сут, периодически взбалтывая. Приготовленная таким образом краска хорошо сохраняется длительное время в темных бутылях в шкафу, где нет ни кислот, ни щелочей.

Вновь полученный или приготовленный раствор красителя Романовского перед употреблением оттитровывают, т. е. окрашивают несколько фиксированных мазков крови в течение 25—40 мин различно разведенной краской (1—2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды). По хорошо окрашенному препарату устанавливают нужное количество капель краски на 1 мл воды и время окрашивания.

(методика окраски): Мазки необходимо зафиксировать фиксатором-красителем по Май-Грюнвальду или типа Лейшмана в течение 2-3 минут. Непосредственно

перед окраской приготовить рабочий раствор: смешать краситель с забуференной водой в соотношении 1:20 — 1:45 и профильтровать.

Полученный рабочий раствор красителя можно использовать в течение 6 ч асов.

Зафиксированные мазки крови поместить в рабочий раствор красителя, по истечении 20-45 мин препараты промыть проточной водой 1-2 сек, высушить на воздухе и микроскопировать.

Окраска форменных элементов крови должна быть следующей:

эритроциты — розовые, розовые с серым или бежевым оттенком, бежево-коричневые;

тромбоциты — розово-фиолетовые или фиолетовые;

ядра лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов — фиолетовые;

цитоплазма лимфоцитов — голубая, серо-голубая или сине-голубая;

цитоплазма моноцитов- серо-голубая;

цитоплазма нейтрофилов — бледно-розовая или розово-серая;

зернистость нейтрофилов — фиолетовая или красно-фиолетовая;

зернистость эозинофилов- оранжево-красная, розово-красная или розово-фиолетовая;

зернистость базофилов- фиолетовая

Окраска по Романовскому в модификации Филипсона.

Применение красителей-фиксаторов, которыми мазки крови в первый период одновременно фиксируются и частично окрашиваются, а во второй период, после разбавления красителей -фиксаторов дистиллированной водой, докрашиваются окончательно.

Посуда и аппаратура — см. «Окраска по Романовскому».

1.Одну часть готовой краски Романовского и 3 части этилового спирта (ректификата) тщательно смешивают. Краска сразу же пригодна к употреблению, но можно готовить ее и заранее.

2. Дистиллированная вода нейтральной реакции.

Приготовленный краситель наливают на нефиксированный мазок, покрывая его полностью и

через 1 — 1мин30 сек, не сливая красителя, прибавляют к нему но каплям примерно столько же дистиллированной воды, следя за тем, чтобы вода при соединении с красителем не сливалась с мазка. Через 20—30 мин краситель смывают водой и мазок высушивают.

Этим способом клетки окрашиваются хорошо, но иногда, по-видимому, от недоброкачественности спирта в эритроцитах обнаруживаются мелкие пузырьки, мешающие определению степени насыщения их гемоглобином.

Способы быстрой окраски мазков краской Романовского по Алексееву.

Одновременная фиксация и окраска мазков с применением для ускорения окрашивания по первому способу подогрева дистиллированной воды и по второму способу — подогрева разведенной краски Романовского.

Посуда и аппаратура.

1. Глазные пипетки.

3. Темная бутыль с притертой пробкой емкостью 1 л. Остальное — см. «Окраска по Романовскому».

1. Разведенная краска Романовского (1,5 капли краски на 1 мл дистиллированной воды).

2. Краситель Лейшмана для второго метода (растворяют 4 г сухой краски в 1 л метилового спирта и хранят в темной посуде).

3. Чистый метиловый спирт.

4. Нейтральная дистиллированная вода.

5. Фильтровальная бумага.

1. На сухой нефиксированный мазок наносят глазной пипеткой 6—10 капель краски Романовского, распределяя ее той же пипеткой равномерным слоем. Через 30 с другой пипеткой добавляют к краске по каплям удвоенное количество подогретой до 50—60° дистиллированной воды. Покачиванием препарата перемешивают краску с водой и оставляют на 3 мин в покое, затем смывают ее дистиллированной водой и высушивают мазок фильтровальной бумагой. При этом методе окраски частично гемолизируются эритроциты, однако клетки белой крови не изменяются.

При втором способе, приводимом ниже, результаты получаются лучшей окраска препаратов мало отличается от обычной окраски по Романовскому.

2. На сукой нефиксированный мазок наливают равномерным слоем 10—12 капель краски Лейшмана. Через 20—30 с, не сливая краску, добавляют к ней нагретый до 50—60° раствор краски Романовского в количестве, способном удержаться на препарате. Через 3 мин, не сливая краску, смывают ее сильной струей дистиллированной воды и высушивают препарат фильтровальной бумагой.

Источник