Способ использования предметного стекла

Подготовка предметных стёкол

библиографическое описание:
Подготовка предметных стёкол — .

код для вставки на форум:

Предметные стекла, применяемые для получения гистологических препаратов, необходимо предварительно подготовить. Исключение составляют готовые к использованию и специально упакованные импортные предметные стекла.

1. Мойка в тёплой мыльной воде или кипятят 2-3% растворе гидрокарбоната натрия.

2. Ополаскивают горячей водой.

3. Промывают проточной водой несколько часов.

4. Протирают тканью

помещают на несколько суток в смесь Никифорова:эфир+96%спирт.

Или на несколько дней помещают в крепкий раствор соляной кислоты

Или 100гр бихромата калия растворяют в 1000мл горячей воды, охлаждают и по стеклянной палочке по каплям добавляют концентрированную серную кислоту. Выдерживают 2-3 дня, промывают 1-2 дня.

Контроль: капля воды по обезжиренному стеклу расходится тонким слоем, а не собирается каплей.

6. Извлекают пинцетом, протирают и складывают в коробочку.

Для лучшей фиксации срезов на стекле его предварительно смазывают:

смесью белка с глицерином.(свежий яичный белок взбивают, фильтрируют через крупнопористый фильтр, смоченный дистиллированной водой, размешивают с равным количеством глицерина и добавляют несколько кристаллов тимола.Смесь хранится несколько месяцев.

15мл сыроватки крови+5мл дистиллированной воды+6мл-5% формалина и фильтруют. Она лучше за предыдущий, так как не даёт фон.

Для нанесения белка на обезжиренные предметные стекла в одну руку берут 5—6 стекол в виде веера, а в другую — чистую стеклянную палочку, которой наносят белок, прикасаясь к каждому стеклу. Затем белок растирают обезжиренным спиртом пальцем по поверхности стекла до его середины, прилагая большое усилие. Некоторые авторы рекомендуют натертые белком стекла прогревать в термостате, но опыт показывает, что это излишне, так как после переноса срезов на стекла их помещают в 34 термостат или на специальный столик для просушивания, где одновременно происходит коагуляция белка.

Разработан способ фиксации среза к предметному стеклу без предварительного натирания последнего белком с глицерином. В ванночку с теплой дистиллированной водой капают несколько капель жидкого казеинового клея и перемешивают. В полученную мутноватую жидкость опускают срезы, расправляют препаровальной иглой и вылавливают на чистое обезжиренное стекло. Этот способ дает неизменно хороший эффект и вокруг среза отсутствует окрашенный фон, как это часто бывает при применении белка.

похожие статьи

Атлас по судебно-медицинской гистологии / Пиголкин Ю.И., Кислов М.А., Должанский О.В., Филиппенкова Е.И., Крупин К.Н. — 2021.

Анализ недостатков судебно-гистологических исследований и пути их устранения / Гедыгушева Н.П., Буланова Э.В. // Матер. IV Всеросс. съезда судебных медиков: тезисы докладов. — Владимир, 1996. — №2. — С. 47-49.

Возможности установления некоторых причин смерти гистохимическими методами / Смирнов В.В., Смирнов В.В. // Матер. IV Всеросс. съезда судебных медиков: тезисы докладов. — Владимир, 1996. — №2. — С. 31-32.

Актуальные вопросы гистологического исследования при экспертизе живых лиц / Кулеша Н.В. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2018. — №17. — С. 125-128.

Источник

Предметное стекло микроскопа — Microscope slide

Стекло микроскопа представляет собой тонкий плоский кусок стекла , как правило , 75 на 26 мм (3 дюйма на 1) и около 1 мм толщиной, используется для объектов справедливы и для исследования под микроскопом . Обычно объект устанавливается (закрепляется) на предметном стекле, а затем оба вместе помещаются в микроскоп для просмотра. Такая компоновка позволяет быстро вставлять и извлекать из микроскопа несколько установленных на предметных стеклах объектов, маркировать, транспортировать и хранить в соответствующих футлярах для предметных стекол или папках и т. Д.

Предметные стекла микроскопа часто используются вместе с покровным стеклом или покровным стеклом, меньшим и более тонким листом стекла, который помещают поверх образца. Предметные стекла удерживаются на предметном столике микроскопа с помощью зажимов для предметных стекол, зажимов для предметных стекол или перекрестного стола, который используется для достижения точного дистанционного перемещения предметного стекла на предметном столике микроскопа (например, в автоматизированной / управляемой компьютером системе или при прикосновении слайд пальцами не подходит из-за риска загрязнения или неточности).

СОДЕРЖАНИЕ

История

Источником концепции были кусочки слоновой кости или кости , содержащие образцы, помещенные между дисками из прозрачной слюды , которые вставлялись в зазор между предметным столиком и объективом. Эти «ползунки» были популярны в викторианской Англии, пока Королевское микроскопическое общество не представило стандартизированные предметные стекла для стеклянных микроскопов.

Размеры и типы

Стандартное предметное стекло микроскопа имеет размеры около 75 мм на 25 мм (3 дюйма на 1 дюйм) и имеет толщину около 1 мм. Доступен ряд других размеров для различных специальных целей, таких как 75 x 50 мм для геологического использования, 46 x 27 мм для петрографических исследований и 48 x 28 мм для шлифов . Слайды обычно изготавливаются из обычного стекла, а их края часто шлифуются или полируются.

Предметные стекла для микроскопов обычно изготавливаются из стекла оптического качества , такого как натриево-кальциевое или боросиликатное стекло , но также используются специальные пластмассы. Стекла из плавленого кварца часто используются, когда важна ультрафиолетовая прозрачность, например, в флуоресцентной микроскопии .

Хотя обычные слайды являются наиболее распространенными, существует несколько специализированных типов. На предметном стекле с вогнутостью или полостью имеется одно или несколько неглубоких углублений («лунок»), предназначенных для удерживания более толстых предметов и определенных образцов, таких как жидкости и тканевые культуры . Слайды могут иметь закругленные углы для повышения безопасности или прочности, или срезанный угол для использования с зажимом скольжения или поперечным столом, где слайд фиксируется подпружиненным изогнутым рычагом, контактирующим с одним углом, заставляя противоположный угол скользите по рычагу, наклоненному под прямым углом, который не двигается. Если бы эта система использовалась с суппортом, который не имел бы этих срезанных углов, углы были бы сколами, и суппорт мог расколоться.

Сетка слайд отмечен сеткой линий (например, 1 мм сетка) , что позволяет размер объектов видны при увеличении , чтобы быть легко оценена и обеспечивает опорные участки для подсчета мелких объектов. Иногда один квадрат сетки сам подразделяется на более мелкую сетку. Слайды для специализированных приложений, таких как гемоцитометры для подсчета клеток, могут иметь различные резервуары, каналы и барьеры, вытравленные или отшлифованные на их верхней поверхности. Изготовитель может напечатать , обработать пескоструйным аппаратом или нанести на поверхность различные перманентные маркировки или маски , обычно с помощью инертных материалов, таких как ПТФЭ .

Некоторые слайды имеют на одном конце матовую или покрытую эмалью область для маркировки карандашом или ручкой. Слайды могут иметь специальные покрытия, нанесенные производителем, например, для химической инертности или повышенной адгезии клеток . Покрытие может иметь постоянный электрический заряд, чтобы удерживать тонкие или порошкообразные образцы. Обычные покрытия включают поли-L-лизин , силаны , эпоксидные смолы или даже золото .

Монтаж

Размещение образцов на предметных стеклах микроскопа часто имеет решающее значение для успешного просмотра. Этой проблеме уделялось много внимания в последние два столетия, и это хорошо развитая область с множеством специализированных, а иногда и довольно сложных техник. Образцы часто удерживаются на месте с помощью более мелких стеклянных покровных стекол .

Основная функция покровного стекла заключается в том, чтобы твердые образцы прижимались ровно, а жидкие образцы формировались в плоский слой одинаковой толщины. Это необходимо, потому что микроскопы с высоким разрешением имеют очень узкую область, в которой они фокусируются.

Покровное стекло часто выполняет несколько других функций. Он удерживает образец на месте (либо за счет веса покровного стекла, либо, в случае влажного монтажа, за счет поверхностного натяжения ) и защищает образец от пыли и случайного контакта. Он защищает линзу объектива микроскопа от контакта с образцом и наоборот; в масляной иммерсионной микроскопии или иммерсионной микроскопии в воде покровное стекло предотвращает контакт между иммерсионной жидкостью и образцом. Покровное стекло можно приклеить к предметному стеклу, чтобы изолировать образец, замедляя обезвоживание и окисление образца, а также предотвращая загрязнение. Используется ряд герметиков, включая коммерческие герметики, лабораторные препараты или даже обычный прозрачный лак для ногтей , в зависимости от образца. Не содержащий растворителей герметик, который можно использовать для образцов живых клеток, представляет собой «валап», смесь вазелина , ланолина и парафина в равных частях. Культуры микробов и клеток можно выращивать непосредственно на покровном стекле перед его помещением на предметное стекло, а образцы можно постоянно закреплять на стекле, а не на предметном стекле.

Покровные стекла доступны в различных размерах и толщинах. Использование неправильной толщины может привести к сферической аберрации и снижению разрешения и интенсивности изображения. Специальные объективы могут использоваться для получения изображений образцов без покровных стекол или могут иметь корректирующие кольца, которые позволяют пользователю приспособиться к альтернативной толщине покровного стекла.

Сухое крепление

При сухом креплении , простейшем виде крепления, объект просто помещается на направляющую. Сверху может быть помещено покровное стекло для защиты образца и объектива микроскопа, а также для того, чтобы образец оставался неподвижным и прижатым. Эта установка может быть успешно использована для просмотра таких образцов, как пыльца, перья, волосы и т. Д. Она также используется для исследования частиц, захваченных прозрачными мембранными фильтрами (например, при анализе переносимой по воздуху пыли ).

Мокрое крепление или временное крепление

При влажном креплении образец помещают в каплю воды или другой жидкости, удерживаемой между предметным стеклом и покровным стеклом за счет поверхностного натяжения . Этот метод обычно используется, например, для наблюдения за микроскопическими организмами, которые растут в воде пруда или других жидких средах, особенно при изучении их движения и поведения. Необходимо соблюдать осторожность, чтобы исключить пузырьки воздуха, которые могут мешать обзору и затруднять движения организмов. Примером временного влажного крепления является крепление из лактофуксина , которое обеспечивает как фиксацию образца, так и окрашивание фуксином .

Подготовленное крепление или постоянное крепление

Для патологических и биологических исследований образец обычно проходит сложную гистологическую подготовку, которая включает в себя его фиксацию для предотвращения разложения, удаление любой содержащейся в нем воды, замену воды парафином , разрезание его на очень тонкие срезы с помощью микротома , размещение срезов на предметное стекло микроскопа, окрашивая ткань различными красителями, чтобы выявить определенные компоненты ткани, очищая ткань, чтобы сделать ее прозрачной, и покрывая ее покровным стеклом и монтажной средой.

Посыпанное крепление

Крепление к стеклу описывает изготовление предметных стекол палинологического микроскопа путем суспендирования концентрированного образца в дистиллированной воде , помещения образцов на предметное стекло и обеспечения возможности испарения воды .

Монтажный носитель

Монтажа среда представляет собой раствор , в котором образец встроен, как правило , под покровным стеклом. Простые жидкости, такие как вода или глицерин, можно рассматривать как монтажную среду, хотя этот термин обычно относится к соединениям, которые затвердевают в постоянную основу. Популярные монтажные среды включают Permount , монтажную среду Хойера и альтернативный глицериновый гель. Свойства хорошей монтажной среды включают в себя показатель преломления, близкий к показателю преломления стекла (1,518), отсутствие реакции с образцом, стабильность во времени без кристаллизации, потемнения и т. Д. или изменение показателя преломления, растворимости в среде, в которой был приготовлен образец ( водной или неполярной , такой как ксилол или толуол ), не вызывая выцветания или выщелачивания пятна образца.

Примеры монтажных средств

Водный

Широко используется в иммунофлуоресцентной цитохимии, где невозможно заархивировать флуоресценцию. Временное хранение должно производиться в темном влажном помещении. Типичные примеры:

1. Глицерин-PBS (9: 1) с антипоглощением, например, любым из следующих
   1. п-фенилендиамин
   2. пропилгаллат
   3. 1,4-Диазабицикло (2,2,2) -октан (DABCO) (очень популярен)
   4. Аскорбиновая кислота
   5. Мовиол или Гельватол
2. Желатин
3. устанавливать
4. Vectashield
5. Продлить золото
6. CyGEL / CyGEL Sustain (для иммобилизации живых, незафиксированных клеток и организмов)

Безводный

Используется, когда требуется постоянное крепление

1. Permount (толуол и полимер a-пинена, b-пинена, дипентена, b-фелландрена)
2. Канадский бальзам
3. DPX ( D istrene 80 — коммерческий полистирол , А р lasticizer например , дибутилфталат и ксилол )
4. DPX новый (с ксилолом, но без канцерогенного дибутилфталата )
5. Энтеллан (с толуолом)
6. Энтеллан новый
7. Hempstead Halide Hoyer’s Medium (запатентованная формулировка традиционной среды Хойера, содержащая 60% хлорала , но не содержащая известных канцерогенов)
8. Neo-Mount (совместим с алифатическим neo-clear, но не совместим с ароматическими растворителями, такими как ксилол)

В отличие от других видов / значений слова «монтаж»

В отличие от монтажа, необходимого для стеклянных покровных стекол, подобный монтаж может быть выполнен для хранения более объемных образцов в стеклянных контейнерах в музеях. Однако для пробоподготовки используется совершенно другой тип монтажа , который может быть для биологических или небиологических материалов и далее подразделяется на процессы монтажа «горячего» (компрессионного) и «холодного» (литьевого) типа. Хотя это называется «монтаж», в гистологии он больше похож на встраивание, и его не следует путать с описанным выше монтажом. Термин «монтаж» в других областях имеет множество других значений.

Источник