Причины пирогенности растворов для инъекций контроль пирогенности способы обеспечения пирогенности

КОНТРОЛЬ ПИРОГЕННОСТИ

ПИРОГЕННЫЕ ВЕЩЕСТВА. МЕТОДЫ ДЕПИРОГЕНИЗАЦИИ

Пирогенные вещества (от слов «пир» — огонь, «генан» — производить) впервые были выделены из загнивающего мяса Бердон-Сандерсеном в 1875 г. Пирогенные вещества образуют грамотрицательные бактерии. Установлено, что пирогенную реакцию вызывают живые и мертвые микробные клетки, а также продукты их жизнедеятельности. При попадании в кровь пирогенные вещества вызывают у человека и животных лихорадку, озноб, повышение температуры тела, падение артериального давления, цианоз, рвоту, понос, нейропению, лейкоцитоз.

Пирогенная активность грамположительных микроорганизмов в 10000 – 100000 раз слабее.

По химическому составу пирогенные вещества — это высокомолекулярные соединения липополисахаридной природы с молекулярной массой до 8000000 и размером частиц от 50 нм до 1 мкм. Молекула пирогена состоит из 3 частей:

1) общий полисахарид, он одинаков для многих грамотрицательных бактерий;

2) иммуноспецифическая полисахаридная цепь, характерная для каждого вида микробов;

3) липид А (токсичная часть) — именно он вызывает пирогенную реакцию организма. Представляет собой дисахарид глюкозамин, к которому амидными и эфирными связями присоединяются жирные кислоты.

Пирогены являются термостабильными веществами. Они не разрушаются при температуре стерилизации 120 о С и 132°С. Поэтому при приготовлении лекарственных форм для инъекций очень важно строгое соблюдение асептики. Кроме того, применяют следующие методы депирогенизации:

1) химические — обработка материалов 0,5-1% раствором калия перманганата, подкисленном серной кислотой; или нагревание в течение 1 часа при t=100°С в растворе пероксида водорода;

2) адсорбционные — поглощение пирогенов активированным углем, целлюлозой;

3) термический — прокаливание при t 180°С и выше;

4) механические — отделение пирогенов мембранным фильтрованием.

Испытания на пирогенность воды и растворов для инъекций проводят в соответствии с ГФ РБ Т 1, С.268. Ежеквартально испытание на пирогенность инъекционных растворов и воды для инъекций осуществляют в бактериологических лабораториях биологическим методом. Метод основан на измерении температуры тела кроликов после введения растворов испытуемых веществ.

Испытание проводят на здоровых взрослых кроликах обоего пола массой не менее 1,5 кг., желательно от 2,0 до 3,5 кг. Каждый кролик должен содержаться индивидуально в спокойном помещении при однородной подходящей температуре. В течение недели, предшествующей опыту, кролики не должны терять в массе. Температура тела кроликов должна быть в пределах 38,5-39,5 0 С (измеряется ректально, используют термометр или электрическое устройство). При уборке клеток и взвешивании животных оберегают от возбуждения (шум и резкие движения). Испытуемые лекарственные средства, вода для инъекций, шприцы и иглы должны быть стерильными и апирогенными. Предварительное испытание на животных проводят в соответствии с ГФ РБ. При испытании на пирогенность воды для инъекций из нее готовят изотонический раствор натрия хлорида. Растворы подогревают до температуры 37 0 С и медленно вводят в крайнюю вену уха каждого из кроликов в течение не более 2 минут, если иное не предписано в частной статье. Определение исходной и максимальной температуры проводят в соответствии с ГФ РБ. При определении исходной температуры кролики, у которых два последовательных значения температуры варьируются в пределах, превышающих 0,2 о С, изымаются из испытания.

Воду для инъекций или раствор лекарственного средства считают непирогенными, если сумма повышений температуры у трех кроликов меньше или равна 1,4 о С. Если эта сумма превышает 2,2 о С, то воду для инъекций или раствор лекарственного средства считают пирогенными. В случае, когда сумма повышения температуры у 3 кроликов находится в пределах от 1,5 до 2,2 о С, испытание повторяют дополнительно на 5 кроликах. В этом случае воду для инъекций или раствор лекарственного средства считают непирогенными, если сумма повышений температуры у всех 8 кроликов не превышает 3,7 0 С. Если же эта сумма равна 3,8 0 С или больше, воду для инъекций или раствор лекарственного средства считают пирогенными.

Источник

ОФС.1.2.4.0005.15 Пирогенность

Содержимое (Table of Contents)

ОФС.1.2.4.0005.15 Пирогенность

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Пирогенность ОФС.1.2.4.0005.15

Взамен ГФ XII, ч.1, ОФС42-0061-07

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на испытание пирогенности инъекционных растворов и фармацевтических субстанций, из которых они изготавливаются. Испытание основано на измерении температуры тела у кроликов до и после инъекции.

Содержание животных и подготовка их к проведению испытания

Каждого кролика содержат в отдельной клетке на полноценном пищевом рационе, ограждая от раздражающих воздействий (акустических, оптических и других). В помещениях, где находятся животные и проводятся испытания, поддерживают постоянную температуру воздуха 20 ± 3 ºС. Перед испытанием проводят осмотр животных и отбирают здоровых кроликов одного пола, не альбиносов, с массой тела от 2,0 до 3,5 кг, которые не теряли в массе в течение предыдущей недели.

За 18 часов до испытания кроликов лишают корма без ограничения воды. Во время опыта животные не получают ни корма, ни воды. Кроликов, впервые предназначенных для опыта или не участвовавших в опыте более четырех недель, предварительно готовят к процедуре испытания, осуществляя все рабочие операции (осмотр, взвешивание, измерение температуры тела) за исключением инъекции.

Кролики, ранее бывшие в опыте, могут быть использованы повторно через трое суток, если введенное им лекарственное средство было апирогенным. При повышении температуры тела у животного на 0,6 ºС и более, кролик может быть использован для дальнейших опытов не ранее, чем через две недели.

Если испытуемое лекарственное средство обладает антигенными свойствами, то порядок повторного использования животных для испытаний указывают в фармакопейной статье.

Материалы и оборудование

Посуда для разведения, шприцы и иглы для инъекций должны быть стерильными и апирогенными, что обеспечивается нагреванием при температуре 250ºС в течение 30 минут или 200ºС в течение 60 минут.

Для разведения испытуемых лекарственных средств используют 0,9 % раствор натрия хлорида для инъекций, если в фармакопейной статье не указан другой растворитель. Все растворители должны быть стерильными и апирогенными.

Ректальную температуру у кроликов измеряют с точностью до 0,1ºС медицинским максимальным ртутным или электронным термометром с термочувствительным датчиком. Термометр или датчик вводят в прямую кишку кролика на глубину от 5 до 7,5 см в зависимости от массы тела животного.

Введение испытуемого лекарственного средства

Испытуемое лекарственное средство вводят в ушную вену кролика, если в фармакопейной статье не указан другой путь введения. Объем инъецируемого раствора должен составлять не менее 0,2 мл и не более 10 мл на 1,0 кг массы тела животного. Перед введением раствор подогревают до температуры 37,0 ± 2ºС.

Тест-дозу испытуемого лекарственного средства, объём вводимого раствора и, если необходимо, скорость введения указывают в фармакопейной статье.

Проведение испытания

Испытание лекарственного средства проводят на группе из трех кроликов с исходной температурой 38,5-39,5 ºС.

Перед опытом, с интервалом не менее 30 минут, у каждого кролика дважды измеряют температуру тела. Различия в показаниях температуры у одного и того же животного не должны превышать 0,2ºС. В противном случае кролика исключают из испытания. За исходную температуру принимают величину последнего результата измерения.

Раствор испытуемого лекарственного средства вводят животным сразу после второго измерения температуры.

Измерения температуры после внутривенного введения испытуемого лекарственного средства проводят с интервалом не более 30 минут на протяжении трех часов. При других путях парентерального введения – на протяжении пяти часов.

Учет результатов

Испытание лекарственного средства можно проводить поэтапно. На каждом этапе используют трех кроликов. Максимальное число этапов не должно превышать четырех.

По окончании каждого из этапов испытания определяют максимальное изменение температуры (Dt) тела каждого кролика по сравнению с исходным значением. Изменение температуры тела животного ниже исходной величины принимают за нулевое и не учитывают.

Для трех кроликов определяют сумму индивидуальных максимальных повышений температур (S Dt). Значения S Dt, полученные на разных этапах испытания, последовательно суммируют, а результаты сравнивают с уровнями, указанными в Таблице 1.

После первого этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 1,2 ºС (Таблица 1, колонка 3), а индивидуальное повышение температуры ни у одного из трех кроликов не превышает 0,5 ºС (колонка 4).

Если результат, полученный на первом этапе, превышает 1,2 ºС (колонка 5) или зарегистрировано индивидуальное повышение температуры более чем на 0,5 ºС хотя бы у одного из трех кроликов (колонка 6), то необходимо перейти к проведению следующего этапа испытания.

После второго этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 2,8ºС (колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС отмечено не более, чем у одного из шести кроликов (колонка 4).

Если результат, полученный на втором этапе испытания, больше 2,8ºС, но меньше 4,3ºС (колонка 5), или более, чем у одного животного зарегистрировано индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС (колонка 6), то необходимо перейти к проведению следующего этапа испытания.

После третьего этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 4,5ºС (колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС отмечено не более, чем у двух из девяти кроликов (колонка 4).

Если результат, полученный на третьем этапе испытания, больше 4,5ºС, но меньше 6,0ºС (колонка 5), или зарегистрировано индивидуальное повышение температуры свыше 0,5 ºС более, чем у двух животных (колонка 6), то необходимо перейти к проведению следующего этапа испытания.

После четвертого этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 6,6 ºС (колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5 ºС отмечено не более, чем у трех из двенадцати кроликов (колонка 4).

Лекарственное средство признают пирогенным, если результат на втором или последующих этапах испытания выше, чем величины, указанные в колонке 7. Лекарственное средство признают пирогенным и в том случае, если в результате четырех этапов испытания зарегистрировано индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС более, чем у трех кроликов из двенадцати.

Таблица 1 — Оценка результатов испытания

* При индивидуальном повышении температуры свыше 0,5 о С более, чем у трех кроликов из двенадцати, лекарственное средство признают пирогенным.

Источник

Проблема пирогенности лекарственных средств

Вы будете перенаправлены на Автор24

Пирогены и механизм их действия

Пирогенность – это способность химических агентов или каких-либо других веществ вызывать у организма, в который они попали, ответную реакцию в виде лихорадки.

Пирогены — это вещества, способные вызывать лихорадку (повышение температуры тела) в случае либо поступления в организм из внешней среды, либо путем непосредственного образования в нем самом.

Пирогены могут быть:

• экзогенными (первичными);
• эндогенными (вторичными).

Следует отметить, что непосредственно саму лихорадочную реакцию могут запустить только вторичные пирогены, которые высвобождаются нейтрофилами и макрофагами.

Экзогенные пирогены могут иметь как инфекционную, так и неинфекционную природу. Они представляют собой продукты метаболизма непатогенных или же патогенных бактерий и непосредственно не влияют на центр терморегуляции организма, в который они попали. Их пирогенный эффект реализуется опосредованно, через образование вторичных, эндогенных, пирогенов в самом организме.

К наиболее известным и изученным экзогенным пирогенам относятся липополисахариды клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Также подобными способностями обладают метаболиты стероидных гормонов, интерфероногенная двуспиральная РНК, синтетические хемотоксические пептиды, они способствуют высвобождению из лейкоцитов вторичных пирогенных веществ, простагландинов, интерферона и др.

Эндогенные (лейкоцитарные) пирогены высвобождаются в кровь при разрушении мембраны лейкоцитов (нейтрофилов и макрофагов). Такими веществами являются интерлейкины и интерфероны, и именно они непосредственно оказывают воздействие на центр терморегуляции, вызывая развитие лихорадочной реакции организма.

Готовые работы на аналогичную тему

Механизм действия пирогенов.

Экзогенные пирогены являются для организма чужеродными агентами, поэтому с целью их нейтрализации гранулоциты и клетки иммунной памяти вступают с ними во взаимодействие, в результате данной реакции происходит высвобождение из лейкоцитов вторичных пирогенных веществ.

Далее лейкоцитарные пирогены проникают в центральную нервную систему, оказывают воздействие на тормозные интернейроны, расположенные в передней области гипоталамуса, на мембранах которых имеются специфические рецепторы. Эти рецепторы взаимодействуют с пирогенами, тем самым активируя аденилатциклазную систему, что приводит к повышению содержания в клетках цАМФ (цикличного аденозинмонофосфата ) – вещества, способного изменять чувствительность центра терморегуляции в отношении температурных (холодовых и тепловых) сигналов.

Пирогенность лекарственных средств

Одним из главных требований, предъявляемых к качеству лекарственных средств, является их апирогенность. В первую очередь оно применимо в отношении растворов для инъекций.

Апирогенность лекарственных средств означает достоверное отсутствие в них химических веществ и продуктов метаболизма микроорганизмов, являющихся пирогенными веществами.

Источником пирогенных агентов в лекарственных препаратах чаще всего являются грамотрицательные бактерии, а также вирусы и грибы.

Помимо этого, оказать пирогенное действие могут также некоторые химические вещества, такие как, например, нуклеинат натрия, продукты термоокислительного распада пластмасс, суспензия кальция фосфата и др.

Медицинские растворы, предназначенные для инъекционного введения, могут вызывать лихорадочную реакцию в случае присутствия в них либо убитых бактерий, либо продуктов их распада.

Во избежание такого воздействия на организм содержание бактерий в дистиллированной воде, используемой для приготовления растворов для инъекций, не должно превышать 10-15 бактерий в 1 мл.

Готовые лекарственные препараты, предназначенные для парентерального введения, помимо контроля на стерильность должны также подвергаться и проверке на пирогенность, так как в случае наличия у них такого свойства у человека, получившего такой препарат, может развиться тяжелое лихорадочное состояние. В зависимости от степени выраженности вызванной пирогенной реакции, а также от состояния здоровья человека, последствия могут быть самыми различными, вплоть до летального исхода.

Современные методы контроля пирогенности фармацевтических препаратов

Все конечные продукты фармацевтического производства лекарственных препаратов необходимо в обязательном порядке проверять на наличие пирогенов (чаще эндотоксинов бактерий).

Для проведения тестов лекарственных средств на пирогенность в настоящее время используются два метода:

• биологический метод на присутствие пирогенов с помощью экспериментов на кроликах;
• бактериологический тест на присутствие эндотоксинов с помощью так называемого ЛАЛ-теста (лимулус-амебоцитного лизата).

Биологический метод контроля пирогенности на кроликах официально применяется с начала 40-х годов прошедшего столетия и обеспечивает безопасность в отношении пирогенности многих лекарственных препаратов.

Тем не менее, у этого метода имеется ряд существенных недостатков.

Например, он может использоваться только как разрешающий или запрещающий тест, то есть он является качественным. Также результаты его находятся в существенной зависимости от индивидуальных особенностей конкретного животного и его состояния на момент проведения теста. Плюс ко всему биологический метод не предоставляет возможности проверки некоторых групп лекарственных средств, к примеру, седативных препаратов.

Возможность быстрой количественной оценки пирогенного действия примесей в лекарственных препаратах на производстве стала реальной с начала 80-х годов прошлого века, когда был введен ЛАЛ-тест. Он практически везде стал заменой тесту на кроликах.

В основе данной методики лежит способность лизата амебоцитов (клеток гемолимфы мечехвостов — реликтовых животных) специфическим образом реагировать на эндотоксины грамотрицательных бактерий.

Наиболее распространенные методики ЛАЛ-теста:

• гель-тромб тест;
• кинетико-турбидиметрический количественный метод;
• хромогенный метод;
• колориметрический метод.

Источник