Подсчет тромбоцитов ручным способом

Подсчет тромбоцитов по Фонио

Общий анализ крови позволяет получить ценную диагностическую информацию. Часто в лабораториях используют автоматические гематологические счетчики, позволяющие оценить количество лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов и некоторых других форменных элементов крови. Несмотря на удобство проведения автоматического подсчета, наиболее информативными считаются методы микроскопического исследования. Один из них – тромбоциты по Фонио.

Что такое тромбоциты

Тромбоцитами называют безъядерные клетки крови, которые синтезируются тканями красного костного мозга. Цикл их жизнедеятельности составляет около 7 суток, после чего они утилизируются в печени и селезенке. У тромбоцитов процесс старения выражен более, чем у других форменных элементов крови.

Как и другие составляющие крови, тромбоциты делятся на молодые, зрелые и старые. У здорового человека количество зрелых клеток не должно превышать 95%. Если при анализе обнаруживается большая концентрация молодых телец, это свидетельствует о развитии некоторых заболеваний, среди которых можно назвать многочисленные повреждения кровеносных сосудов и прочее. Кроме молодых, в плазме крови нередко обнаруживаются старые тромбоциты. Такое явление говорит о нарушении процесса производства и утилизации клеток.

Роль в организме

Тромбоциты принимают активное участие в процессах, связанных с образованием тромбов. Они также производят специальное вещество, необходимое для регенерации тканей, стимуляции деления клеток, регулировки уровня проницаемости клеточных мембран и поддержания эластичности сосудов.

Ценное значение количественный и качественный состав тромбоцитов имеет при диагностике заболеваний сердца и сосудов. Высокое количество этих телец называется тромбоцитозом, пониженное – тромбоцитопенией.

В чем заключается метод Фонио

Подсчет тромбоцитов по Фонио – это анализ, помогающий выявить точное количество этих телец в крови, диагностировать многие заболевания у человека. При этом подсчет тромбоцитов осуществляется в мазке крови на тысячу эритроцитов, после чего это число пересчитывается в соотношении на 1 микролитр или литр. Методика считается очень точной, применяется для диагностики многих патологий.

Для проведения анализа кровь берется из пальца. Общее количество тромбоцитов в единице крови называется коагулограммой. Этот вид исследования назначают каждому пациенту, ведь анализ помогает заподозрить и выявить многие болезни.

Подготовка к анализу

На результат анализа тромбоцитов по Фонио могут повлиять некоторые факторы. В связи с этим необходимо правильно подготовиться к сдаче крови. Пациенту накануне перед забором биологического материала следует учесть следующие рекомендации:

• сдача крови должна проводиться через 8 часов после последнего приема пищи, так как многие продукты способны повлиять на цветовой показатель форменных элементов крови;
• накануне перед анализом нельзя заниматься спортом. Если человек выполнял любые физические нагрузки, результат исследования может быть неточным;
• забор материала осуществляется в утреннее время;
• наиболее точную информацию можно получить при сдаче крови повторно. Это помогает проследить за концентрацией тромбоцитов в динамике.

Кроме этого, врачу следует обязательно сообщить, принимались ли до этого какие-либо медикаментозные средства. Многие лекарства также способны исказить результат.

Подсчет тромбоцитов по Фонио

При подсчете тромбоцитов лаборант применяет несколько видов реактивов. Это этилендиаминтетраацетат натрия или сульфат магния. Реактивы берутся с помощью пипетки СЕЭ-метра.

Анализ проводится в несколько этапов:

1. В пробирку добавляют один из реактивов и кровь с помощью пипетки. Количество реактива берется до отметки 75, объем крови – до отметки К.
2. Полученную массу хорошо перемешивают и используют для изготовления мазков.
3. Если применяется магния сульфат, мазок окрашивается по методу Романовского-Гимзе на протяжении 120 минут и 45 минут, если лаборант берет этилендиаминтетраацетат натрия. При этом тромбоциты окрашиваются в фиолетово-розовый цвет.

С помощью микроскопа производится подсчет тромбоцитов и эритроцитов до тысячи красных телец крови. Чтобы узнать количество тромбоцитов, их умножают на число эритроцитов в 1 микролитре, после чего делят полученную цифру на тысячу. Получить наиболее достоверные результаты помогает специфический окрас исследуемых клеток. Именно поэтому многие специалисты при постановке диагноза используют метод подсчета тромбоцитов по Фонио.

Преимущества методики

Способ подсчета эритроцитов по Фонио успешно применяется многими врачами на протяжении многих лет. Техника имеет ряд преимуществ, среди которых выделяют:

• при рассмотрении крови под микроскопом лаборант четко видит исследуемый материал, цвет, форму, число клеток;
• при необходимости анализ можно проводить в любое время суток;
• метод прост в использовании, что связано с простой формулой, но в то же время очень информативен.

О чем могут свидетельствовать низкие показатели

Тромбоцитопения или пониженная концентрация эритроцитов в крови у человека свидетельствует о развитии различных нежелательных состояний. К наиболее частым причинам низких показателей относят:

• радиационное облучение больного;
• воздействие на организм свинца и прочих вредных веществ;
• патологии системы кроветворения;
• коллагенозы у пациента (совокупность заболеваний, касающихся соединительной ткани);
• наследственную предрасположенность;
• хронический нефрит.

У больных с тромбоцитопенией наблюдаются такие клинические проявления, как частые носовые кровотечения, кровоточивость десен, подкожные геморрагии. У женщин заболевание проявляется в виде обильных и длительных месячных.

Лечение такого состояния подразумевает устранение основной причины, повлекшей за собой нарушение. При этом используется терапия с помощью медикаментозных средств. В особо тяжелых случаях проводится удаление селезенки или трансплантация костного мозга.

Причины повышенных показателей

При повышении числа рассматриваемых клеток на единицу крови речь идет о тромбоцитозе. Как правило, это вторичная патология, возникающая на фоне следующих состояний:

• лечение с помощью некоторых медикаментов;
• перенесенное оперативное вмешательство;
• удаление селезенки;
• обильные кровопотери;
• воспаление оболочки головного мозга;
• патологии почек и печени;
• развитие онкологических образований;
• железодефицитная анемия.

Норма клеток у различных групп населения

При проведении анализа по методу Фонио используется норма от 120 до 400 тыс. клеток в кубическом миллиметре исследуемого материала. Колебание границ зависит от возраста пациента и его половой принадлежности. У женщин, мужчин и детей отклонения в пределах этих границ считаются нормой.

• дети до года – от 100 до 420 тыс. на мм 3 ;
• дети от года – от 180 до 320 тыс. на мм 3 ;
• мужчины – от 180 до 400 тыс. на мм 3 ;
• женщины от 180 до 340 тыс. на мм 3 .

У подростков уровень тромбоцитов может снижаться до 70 тыс. на мм3. У мужчин максимальное количество этих телец отмечается в возрасте 40 лет. Такие отклонения обязательно учитываются при постановке диагноза, объясняются физиологическими и возрастными особенностями организма.

Что влияет на уровень тромбоцитов в крови

Уменьшение или рост рассматриваемых клеток не всегда свидетельствует о развитии какой-либо патологии. Иногда уровень этих телец колеблется вследствие интенсивных и регулярных физических нагрузок, при неправильном питании. Многим людям может показаться странным тот факт, что при потере крови уровень тромбоцитов возрастает. Это объясняется попыткой организма компенсировать потерю крови повышенной выработкой ее форменных элементов.

Часто показатели повышены у людей, употребляющих алкоголь на протяжении длительного времени. Нарушается норма тромбоцитов во время приема медикаментов с тромбоцитопеническим действием. Повлиять на результаты анализа может даже безобидное кровотечение из носа.

Методы нормализации показателей

Первое, что нужно сделать при обнаружении повышенных или пониженных показателей тромбоцитов в крови, это провести дальнейшее обследование пациента с целью выявления патологии, повлекшей за собой такое состояние. Главный метод терапии тромбоцитопении и тромбоцитоза – борьба с первопричиной. Если же нарушение развивается по безобидным причинам, повысить количество тромбоцитов можно с помощью таких способов:

• отказаться от вредных продуктов, исключить из рациона алкогольные напитки, красный виноград, зеленый чай, чернику, томаты;
• включить в ежедневный рацион яблоки, гречневую кашу, рыбные блюда, болгарский перец, печень;
• по назначению специалиста принимаются специальные медикаментозные средства;
• повысить количество клеток помогут витамины группы А, В и С.

Понизить концентрацию рассматриваемых элементов крови поможет отказ от экстремальных видов спорта, адекватная оценка стрессовых ситуаций, избегание конфликтов дома и на работе.

Для снижения тромбоцитов специалисты рекомендуют выполнять следующие правила:

• принимать ацетилсалициловую кислоту в соответствии с назначением лечащего врача;
• исключить из питания шиповник, гранат, манго и другие блюда, которые повышают уровень тромбоцитов;
• пить препараты магния курсами несколько раз в год;
• употреблять не менее полутора литров воды в сутки.

Подсчет тромбоцитов по методу Фонио – это один из наиболее точных методов исследования крови. С помощью такого анализа врач может выяснить многие патологии, подобрать соответствующее лечение для пациента. Проводится этот анализ также с профилактической целью, что необходимо для ранней диагностики заболеваний и недопущения развития серьезных последствий на их фоне.

Источник

Подсчет тромбоцитов ручным способом

Принцип прямого счисления заключается в следующем: разбавить кровь в пипетке Potain (предусмотренной красным шариком для эритроцитов и белым — для лейкоцитов и тромбоцитов), при этом разбавляющая жидкость разная, соответственно виду клеток.

К разбавляющим жидкостям относятся:
а) для эритроцитов:
— хлорид натрия —1 г.
— сульфат натрия — 5 г.
— сублимат — 0,5 г.
— дистилированная вода — 200 мл.

б) для лейкоцитов:
— ледяная укусусная кислота — 2 мл.
— 1% метиленблау — 1 капля
— дистилированная вода — до 100 мл.

в) для тромбоцитов: — щавелевокислый аммоний — 1 г.
— Nа₂ЭДТА — 0,01 г.
— дистилированная вода — 100 мл.

Пипетки Potain должны быть чистыми, совершенно сухими и цельными. До потребления пипетку испытать на проницаемость путем вдувания воздуха, после использования ее следует промыть проточной водой, с помощью трубки для вакуума, затем дистилированной водой. Через несколько дневные интервалы держать пипетку по 24 часа в серохроми-стой смеси, затем промывать тщательно проточной и дистилированной водой.

Высушивать в сушильном шкафу, при температуре 180°. Когда требуется срочное высушивание, пипетку промывать спиртом, а затем эфиром.

Разжижение крови. Набрать в пипетку кровь до деления 0,5, затем разбавляющую жидкость до деления 101 — в пипетку с красным шариком (для счисления эритроцитов) и до деления 11 в пипетку с белым шариком (для счисления лейкоцитов и тромбоцитов). Получаются следующие растворы: 1/200 для эритроцитов и 1/20 для лейкоцитов и тромбоцитов.

Счисление проводится в камере Бюркер-Тюрк или Горяева, к которой хорошо прикреплена чистая оригинальная пластинка.

Заполнение камеры для счисления. В течение 2 мин. хорошо встряхивать пипетку, затем отбросив первые 2—3 капли налить в камеру для счисления, на край пластинки, небольшое количество смеси, которое заполнит пространство в силу капиллярности. Нежелателен избыток смеси, поскольку он заполняет канавки гемоцитометра. Подождать выпадение форменных элементов крови (1—2 мин. в случае эритроцитов и лейкоцитов, 10—15 мин. во влажной камере — для тромбоцитов).

Счисление эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Исследование проводить обычным оптическим устройством (объективом 10 х для лейкоцитов и 20 х или 40 х для эритроцитов и тромбоцитов, при этом конденсор располагается в среднем положении). Счисление проводить на следующих площадях;
— для эритроцитов — 5 квадратов (1/25 квадратиков по 1/400), т.е. 1/5 мм 2 ;
— для лейкоцитов — 4 квадрата, расположенные по углам камеры Бюркер-Тюрк, т.е. 4 мм 2 ;
— для тромбоцитов — одинаково с эритроцитами.

Из клеточных элементов, расположенных по линиям, отграничивающим площади счисления, подсчитывать лишь те из них, которые находятся вдоль одной вертикальной отграничивающей линии (напр. левой) и одной горизонтальной (напр. верхней).

Расчет эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. В целях определения числа форменных элементов на мм 2 учитывать площадь, вышину, разведение:
№ эритроцитов/мм 3 = № насчитанных эритроцитов х 5 х 10 х х 200 = № эритроцитов х 10 000;
№ лейкоцитов/мм 3 = № насчитанных лейкоцитов х 10 х 20 : 4 = = № насчитанных лейкоцитов х 50;
№ тромбоцитов/мм 3 = № насчитанных тромбоцитов х 5 х 10 х х 20 = число насчитанных тромбоцитов х 1000.

Отбор крови для подсчета тромбоцитов можно проводить также пипеткой Potain для эритроцитов, в таком случае отсасывать кровь до деления 1 а разбавляющую жидкость до деления 101. Получится разведение 1/100. Тромбоциты счислять с 200 квадратиков (1/2 мм2), полученную цифру умножить на 2000.

Поправка числа лейкоцитов в случае эритробластоза. Когда в крови находятся эритробласты число ядерных элементов, полученных при счислении, откоррегировать соответственно результату лейкоцитной формулы, по формуле: № лейкоцитов/мм3 = № ядерных элементов/мм3 х 100 / (100 + № эритробластов/100 лейкоцитов).

Количественное определение кровяных клеток основывается на их счислении на небольшом, предполагаемым однородным образце и обобщением результата на всю массу крови организма. Между полученным результатом и фактическим значением может возникнуть разница (погрешность), которая подвергается математическому расчету для определения степени точности каждого метода в отдельности.

Отклонения от строгого соблюдения технических указаний создают многочисленные причины погрешностей на протяжении всего процесса производимых в камере подсчетов. В том числе:
а) погрешности отбора,
б) ошибки аппаратуры,
в) техники,
г) неоднородного распределения в счислительной камере.

Когда проба отбирается одной пипеткой а счисление производится в одной камере погрешность определения числа эритроцитов составляет ±30%, лейкоцитов +20%, а тромбоцитов +30—40%. В то время как в отношении лейкоцитов и тромбоцитов такая погрешность незначительна, поскольку она меньше биологических колебаний, в отношении эритроцитов точность техники представляется неудовлетворительной.

В целях максимального снижения погрешности — и повышения точности счислений попимо строгого соблюдения технических указаний, пробы следует отбирать в 2 пипетки, а счисление проводить в 2 гемоцитометрах. В таких условиях наименьшая погрешность для эритроцитов уменьшается до +11%, для лейкоцитов и тромбоцитов до +16%. Однако электронное счисление представляет значительно большую степень точности. Так в отношении эритроцитов погрешность составляет +3%, для лейкоцитов+4%, а в отношении тромбоцитов +7,5%.

Тем не менее, счисление эритроцитов в камере остается наиболее сложный и в то же время наименее точный метод, причины, по которой его нельзя рассматривать как метод отбора. Единственным показанием к счислению эритроцитов является определение вида анемии.

При счислении тромбоцитов, независимо от метода, для проверки точности результата делается сопоставление с аспектом тромбоцитов на мазке крови.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Источник