Питательная среда для глубинного способа

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИОМАССЫ ГРИБА BLAKESLEA TRISPORA ВКПМ F-117 — ПРОДУЦЕНТА КАРОТИНА Российский патент 2009 года по МПК C12N1/20 C12R1/645

Описание патента на изобретение RU2348685C2

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к питательным средам для культивирования продуцентов каротинсодержащей биомассы.

Известна питательная среда Циглера для культивирования продуцентов каротинсодержащей биомассы, включающая соевую муку 4,7%, кукурузную муку — 2,3%, масло подсолнечное — 4%, калий фосфорнокислый однозамещенный — 0,05%, витамин B₁ — 0,0002% и воду — остальное (Cigler A., Arnold U., Ancelerson R.F. Microbiological production carotinoides. 1958, V7, p 94-98).

Недостатком питательной среды Циглера является невысокая биосинтетическая способность продуцента и применение пищевого сырья для ее приготовления.

Наиболее близкой по технической сущности и достигаемому техническому результату является питательная среда для глубинного культивирования биомассы гриба Blakeslea trispora — продуцента каротина, содержащая соевое масло — 43%, размельченную кукурузу, калий фосфорнокислый однозамещенный — 0,05%, витамин В₁ — 1 мг/%, β-ионон — 0,1% (US 2890989, 16.06,1959). Однако данная питательная среда не обеспечивает достаточно высокую биосинтетическую способность продуцента каротина.

Техническим результатом является повышение биосинтетической способности продуцентов каротинсодержащей биомассы и удешевление питательной среды.

Техническая задача решается тем, что питательная среда для глубинного культивирования биомассы гриба Blakeslea trispora ВКПМ F-117 — продуцента каротина содержит гречневую мучку (отход крупяного производства), калий фосфорнокислый однозамещенный, масло подсолнечное, витамин B₁, β-ионон, водопроводную воду при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Гречневая мучка — 7-8

Масло подсолнечное — 3,75-4,00

Витамин B₁ — 0,0002-0,0005

Водопроводная вода — остальное

Сущность изобретения заключается в том, что повышение биосинтетической способности продуцента каротина обеспечивается высокой концентрацией в гречневой мучке углеводородов изопреноидной природы — каротиноидов и терпенов.

Высокое содержание белка (30%) в гречневой мучке увеличивает биосинтетическую способность продуцентов каротина. Наличие стеринов (3%) в гречневой мучке также способствует повышению биосинтетической способности продуцентов каротина.

Установлено, что достижение более высокой биосинтетической способности продуцентов каротина возможно при использовании гречневой мучки, имеющей следующий химический состав (табл.1).

Таблица 1 Химический состав гречневой мучки Продукт Влажность, % В % на сухое вещество Белок Жир Крахмал Клетчатка Зола Гречневая мучка 13,0 30,6 7,5 27,5 14,2 7,0

Интенсификации процесса биосинтеза могут способствовать витамины и минеральные вещества (табл 2 и 3).

Таблица 2 Содержание витаминов в гречневой мучке, мг/% Продукт В₁ В₂ PP Е Каротиноиды Гречневая мучка 0,40 0,31 6,88 4,12 0,15

Таблица 3 Минеральный состав гречневой мучки, мг/% Продукт Минеральные элементы Калий Кальций Фосфор Цинк Медь Марганец Железо Кобальт Гречневая мучка 11200 3400 7800 59 10,6 38,8 90,0 0,19

На увеличение биосинтетической способности продуцентов каротина могут оказывать влияние жирные кислоты. Содержание основных жирных кислот представлено в табл.4.

Таблица 4 Жирнокислотный состав липидов гречневой мучки Жирная кислота Содержание, % от суммы С _12:0 0,10 С _14:0 0,72 С _14:1 0,02 С _15:0 0,14 С _15:1 0,03 С _16:0 20,24 C _16:1 0,20 С _{16:1(9-цис)} 0,82 С _17:0 0,09 С _17:1 0,05 С _18:0 2,03 С _{18:1(9-цис)} 31,37 С _{18:1(11-транс)} 1,69 С _18:2 34,17 С _18:3(ω-3) 2,09 С _20:0 1,27 С _20:1 2,56 С _22:0 1.46 С _22:1 0,95 Сумма насыщенных кислот 26,05 Сумма ненасыщенных кислот 73,95

Основным представителем жирных кислот является линолевая кислота, обладающая высокой биологической ценностью. Гречневая мучка содержит полиненасыщенные жирные кислоты ω-3 и ω-6.

Питательную среду готовят следующим образом. Гречневую мучку просеивают через сито диаметром 1 мм. Соли в заданном количестве растворяют в холодной водопроводной воде. В солевой раствор добавляют гречневую мучку, подсолнечное масло. Среду стерилизуют при 121°С в течение 45-60 мин, затем охлаждают

В ферментативные колбы, содержащие 50 мл среды, засевают культуру штамма микроорганизма в количестве 5-10% от объема среды в соотношении объемов 1:10.

Проводят глубинное брожение в течение 4-6 дней при 26-28°С в аэробных условиях при непрерывном перемешивании и аэрации в соотношении количества подаваемого воздуха 1/2:1 к объему питательной среды.

По истечении 36-48 часов от начала брожения загружают в количестве 0,099 вес. ч. β-ионон. По достижения максимальной концентрации каротина мицелий отделяют от жидкости фильтрацией.

Культивирование продуцента Blakeslea Trispora ВКМП-117 проводят в лабораторных колбах-качалках V=730 мм. Использовали питательную среду следующего состава, мас.%: гречневая мучка 7%, масло подсолнечное 4%, KH₂PO₄ 0,05%, витамин B₁ 0,0005%, β-ионон 0,099% и вода — до 100%. В ферментативные колбы, содержащие 50 мл среды, засевают двухдневную культуру гриба B₁ Trispora в количестве 10% от объема среды, в соотношении объемов, равном 1:10. Выращивание проводят при 26°С и перемешиванием при 220 об/мин. Спустя 48 часов от начала ферментации в колбы загружают 0,099 мас.ч. β-ионона, от объема среды.

При достижении максимальной концентрации каротиноидную массу отделяют фильтрацией.

Навеску биомассы 0,02 г помещают в бюкс, содержащей 0,5 мл трихлорэтилена и 7 мл ацетона.

После перехода пигментов в раствор биомассу дополнительно растирают в ступке до бесцветного состояния.

Раствор каротина в ацетоне переносят в мерную колбу на 200 мл. Объем доводят до метки ацетоном. Содержание каротина определяют фотометрически по стандартному раствору синтетического каротина. Содержание каротина в культуральной жидкости 166,7 мг/100 мл культуральной жидкости, что на 3,5% больше, чем на известной среде (161,3 мг/100 мл), содержание каротина в биомассе 45,9 г/кг, что на 6,5% больше чем на известной среде (43,1 г/кг).

Питательную среду готовят также, как в примере 1, отличием является то, что питательная среда содержит гречневую мучку в количестве 7,5%, витамина B₁ — 0,0002%, количество остальных компонентов аналогично примеру 1.

Согласно полученным результатам содержание каротина в культуральной жидкости составило 169,3 мг/100 мл культуральной жидкости, что на 4,4% больше чем на известной среде (161,3) мг/100 мл), содержание каротина в биомассе 47,1, что на 9,2% больше чем на известной среде (43,1).

Питательную среду готовят также, как и в примере 1 и 2, отличием является то, что питательная среда содержит гречневую мучку в количестве 8%, витамин В₁ — 0,0004%, количество остальных компонентов аналогично указанному в примерах 1 и 2.

При данном соотношении компонентов в среде содержание каротина в культуральной жидкости 181,1 мг/100 мл культуральной жидкости, что на 12% больше чем на известной среде, содержание каротина в биомассе 48,8 г/кг, что на 13,2% больше чем на известной среде (43,1).

При использовании запредельных значений концентраций гречневой мучки в питательной среде положительный эффект был невысоким.

Похожие патенты RU2348685C2

название	год	авторы	номер документа
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИОМАССЫ ГРИБА BLAKESLEA TRISPORA ВКПМ F-117 — ПРОДУЦЕНТА КАРОТИНА	2002	Никифоров А.Е. Никифорова Т.А. Севериненко С.М.	RU2245917C2
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА МИЦЕЛИАЛЬНОЙ МАССЫ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БЕТА-КАРОТИНА	1999	Кунщикова Инна Сергеевна Казарян Р.В. Кудинова С.П.	RU2177506C2
ПАРА ШТАММОВ ГЕТЕРОТАЛЛИЧНОГО ГРИБА BLAKESLEA TRISPORA КР 74 И КР 86, ПРОДУЦИРУЮЩАЯ БЕТА-КАРОТИН	2000	Кунщикова Инна Сергеевна Казарян Р.В. Кудинова С.П. Кунщикова Евгения Александровна	RU2177505C2
ПАРА ШТАММОВ ГЕТЕРОТАЛЛИЧНОГО ГРИБА BLAKESLEA TRISPORA F — 674(+) И F-551(-), ПРОДУЦИРУЮЩАЯ БЕТА-КАРОТИН	1993	Морозова Е.С. Васильченко Л.Г. Рязанова Е.М. Киселева А.И. Панова Н.А. Воронова Н.В.	RU2053301C1
ШТАММ ДРОЖЖЕЙ PHODOTORULA GRACILLIS — ПРОДУЦЕНТ КАРАТИНОИДОВ	1991	Харченко С.Н.	RU2028382C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИКОПИНА, ФОСФОЛИПИДОВ, ЖИРНЫХ КИСЛОТ И ЭРГОСТЕРИНА ПУТЕМ СОВМЕСТНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ (+) И (-) ШТАММОВ ГРИБА Blakeslea trispora	2004	Авчиева Пенкер Бабаевна Буторова Ирина Анатольевна Авчиев Марат Исламутдинович Деев Сергей Вячеславович Зорина Любовь Васильевна	RU2270868C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ КАРОТИНСИНТЕЗИРУЮЩИХ МИКРООРГАНИЗМОВ	2012	Червякова Ольга Петровна Шакир Ирина Васильевна Панфилов Виктор Иванович Кузнецов Александр Евгеньевич Суясов Николай Александрович	RU2553213C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИКОПИНА	1995	Ивакин А.Ф. Феофилова Е.П. Киселева А.И. Панова Н.А. Зырянов В.В. Гаврилов А.С. Терешина В.М. Кордюкова Н.П.	RU2102416C1
ШТАММ FLAVOBACTERIUM AQUATILE — ПРОДУЦЕНТ МАЛИНОВОГО ПИЩЕВОГО ПИГМЕНТА	1997	Бирюков В.В. Биттеева М.Б. Щеблыкин И.Н. Осипова В.Г. Коваленко Н.В. Темина А.В. Нетрусов А.И. Манаков М.Н. Мартемьянова Н.А.	RU2125071C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИКОПИНА	1997	Феофилова Е.П. Терешина В.М. Меморская А.С.	RU2115678C1

Реферат патента 2009 года ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИОМАССЫ ГРИБА BLAKESLEA TRISPORA ВКПМ F-117 — ПРОДУЦЕНТА КАРОТИНА

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда содержит гречневую мучку, масло подсолнечное, калий фосфорнокислый однозамещенный, витамин B₁, β-ионон, водопроводную воду. Изобретение позволяет повысить биосинтетическую способность продуцента каротина и удешевить производство питательной среды. 4 табл.

Формула изобретения RU 2 348 685 C2

Питательная среда для глубинного культивирования продуцента каротинсодержащей биомассы гриба Blakeslea trispora ВКПМ F-117 — продуцента каротина, содержащая гречневую мучку, калий фосфорнокислый однозамещенный, масло подсолнечное, витамин B₁, β-ионон, водопроводную воду при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Источник

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА Российский патент 2011 года по МПК C12N1/20 C12R1/63

Описание патента на изобретение RU2425866C1

Изобретение относится к биотехнологии, микробиологической промышленности, медицине и касается оптимизации питательной среды для глубинного культивирования холерного вибриона с целью производства медицинских иммунобиологических препаратов. Использование изобретения позволяет утилизировать отходы производства антирабического иммуноглобулина и обеспечивает экономический эффект применения питательной среды, расширяет спектр питательных сред, используемых для накопления бактериальной массы.

Традиционно применяемые среды для глубинного культивирования холерного вибриона содержат в основе ферментативный гидролизат казеина или ферментативный гидролизат мяса крупного рогатого скота (КРС) по способу Хоттингера (Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии. / — М.: Медгиз., 1950, с.51-111; Виноградова И.Н. Производственные питательные среды. / Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. — М.: Медгиз, 1962, с.339-384). Основным недостатком этих сред является использование ценного пищевого сырья для приготовления питательной основы. В условиях обостряющегося дефицита пищевых белков актуальным является поиск белоксодержащего сырья и внедрение безотходных технологий.

Известна питательная среда для лабораторного культивирования микроорганизмов, в том числе холерного вибриона, приготовленная из ферментативного гидролизата отходов мясоперерабатывающих предприятий. Содержание аминного азота в среде составляет 0,11-0,17%, натрия хлористого (NaCl) 0,3-0,5% (SU 1586180 A1, C12N 1/20). Недостатком данной питательной среды является использование белковой основы — гидролизата из абортированных плодов КРС, процесс приготовления которого на этапе подготовки сырья является трудоемким, так как перед гидролизом необходимо отделить мышечную ткань от костного скелета плода. Кроме того, на забой не часто попадают животные с большим сроком беременности, что создает трудности с получением сырья.

Известен способ получения гидролизатов и питательная среда для культивирования микроорганизмов (RU 21033345 C1, C12N 1/00), при котором основу для приготовления питательных сред готовят из отходов вакцинно-сывороточного производства (глобулинов, тканей куринных эмбрионов, фибрина, сгустков крови). Добиваясь глубокой степени расщепления белка, гидролиз ведут в две стадии, используя для этого на первом этапе аммиачный раствор, а затем поджелудочную железу КРС. Питательная среда на основе гидролизата, приготовленного с использованием в технологии этапа щелочного гидролиза (рН 10,5-11,5), имеет существенные недостатки, а именно: она является дефицитной по ряду аминокислот, так как происходит разрушение лизина, серина, глицина, цистеина, треонина, и, кроме того, происходит рацемизация большинства аминокислот с изменением на D-форму (Телишевская Л.Я. / Белковые гидролизаты. Получение, состав, применение. — М.: Аграрная наука, 2000, с.64-65). При этом ростовые свойства питательной среды снижаются, т.к. проявляется дефицит аминокислот, а также в процессе метаболизма микроорганизмы затрачивают дополнительную энергию на изомеризацию аминокислот и их перевод в L-форму. Предложенная авторами среда предназначена для культивирования листерий, сальмонелл, пастерелл. Кроме того, отсутствуют сведения о биологических показателях питательной среды, в том числе ее эффективности по выходу биомассы с мл среды.

Известны способ получения О-антигена холерного очищенного (RU 2143280 С1, А61К 39/106) и способ производства вакцины для профилактики холеры (RU 2080121 С1, А61К 39/00) с описанием способа глубинного культивирования холерного вибриона на питательной среде, содержащий ферментативный гидролизат казеина или гидролизат мяса (Хоттингера) и принятой авторами за прототип. Содержание аминного азота в среде составляет 0,2%, натрия гидрофосфата двузамещенного (Na₂HPO₄×12H₂O) — 0,05%, натрия хлористого (NaCl) — 0,5%, рН 8,0-8,1. Указанные среды соответствуют основным требованиям, предъявляемым к составу производственной питательной среды — обеспечение высоких питательных потребностей микроорганизмов, стабильность и полноценность аминокислотного состава, а также достаточная буферная емкость, необходимая для выращивания в условиях глубинного культивирования с подкормкой глюкозой. Однако использование в составе питательных сред гидролизатов, приготовленных из дорогостоящего белкового сырья пищевого назначения, существенно влияет на себестоимость конечных продуктов производства медицинских иммунобиологических препаратов.

Одной из основных задач в производстве медицинских иммунобиологических препаратов является подбор экономически выгодной питательной среды, не уступающей по ростовым свойствам традиционным. Снижения стоимости питательных сред можно достичь при использовании сырья, не имеющего пищевой ценности.

Техническим результатом изобретения является обеспечение рациональной утилизации отходов, образующихся при производстве иммунобиологических препаратов, упрощение технологии приготовления питательной среды для культивирования холерного вибриона, не уступающей по своим ростовым свойствам прототипу. Экономический эффект от использования изобретения заключается в снижении себестоимости конечного продукта — диагностического препарата для индикации возбудителя холеры.

Технический результат достигается использованием в качестве питательной основы ферментативного гидролизата фибрина, приготовленного из отхода производства антирабического иммуноглобулина.

Предлагаемая жидкая питательная среда содержит гидролизат фибрина, полученный ферментативным гидролизом нативной поджелудочной железы КРС в количестве, обеспечивающем содержание аминного азота в среде 0,2%, при следующем соотношении компонентов, об.%:

ферментативный гидролизат фибрина 0,2-0,25 Na₂HPO₄×12H₂O 0,05 NaCl 0,5 вода дистиллированная остальное рН 8,0-8,1

Использование ферментативного гидролизата фибрина в качестве питательной основы является отличительным признаком предлагаемой питательной среды для культивирования холерного вибриона.

Фибрин является высокопитательным субстратом, полноценным по аминокислотному составу, близким к миозину — белку мышечной ткани. Фибрин — побочный продукт при производстве антирабического иммуноглобулина, образуется из иммунной крови лошадей при сепарировании плазмы, по настоящее время не имел промышленного использования и подлежал утилизации. Собранный фибрин замораживают и хранят при температуре (-18±2)°С. В процессе приготовления гидролизата из фибрина не требуется предварительной подготовки сырья, что упрощает технологический процесс приготовления питательной среды.

Ферментативный гидролиз измельченного на мясорубке фибрина, термически обработанного в течение 30 мин при 100°С, проводят фаршем поджелудочной железы КРС при соотношении компонентов в смеси: вода водопроводная, фибрин, поджелудочная железа, соответственно: 1:1:0,25. В смесь добавляют хлороформ до конечной концентрации 2%. Уровень рН регулируют добавлением натрия двууглекислого безводного. Гидролиз осуществляют в реакторе при температуре 37°С и рН 8,0±0,1, при периодическом перемешивании до 7-8 сут. Процесс гидролиза ежедневно контролируют по содержанию аминного азота методом формольного титрования. Достижение аминного азота 0,5-0,7% и прекращение его нарастания свидетельствует об окончании ферментативного процесса. Смесь отстаивают в течение суток, осторожно декантируют с осадка в емкость. В качестве консерванта добавляют хлороформ — до 2%, хранят при температуре (6±2)°C в течение 5-6 месяцев для его созревания.

Физико-химические показатели гидролизата фибрина соответствуют требованиям, предъявляемым к питательным основам МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред». Сравнительные характеристики белковых гидролизатов заявляемой и аналоговой сред представлены в таблице 1.

Биологические показатели оценки пригодности предлагаемой питательной среды определены в соответствии с МУ 3.3.2.2124-06 «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза» при выращивании тест-штаммов холерного вибриона. При тестировании биологических свойств заявляемой питательной среды использованы плотные и жидкие среды с содержанием аминного азота в среде соответственно 0,1% и 0,08%. Среды на основе гидролизата фибрина обеспечивали типичный по морфологии рост холерного вибриона. Сравнительные данные по биологическим свойствам заявляемой и аналоговой питательных сред, приведенные в таблице 2, свидетельствуют о пригодности сред для культивирования холерного вибриона.

Питательную среду для глубинного культивирования холерного вибриона на основе гидролизата фибрина готовят в реакторе. Необходимое количество гидролизата, обеспечивающее содержание аминного азота в среде 0,2%, воду дистиллированную и уголь кипятят в течение 10 мин. Осветленный углем гидролизат фильтруют через рамный фильтр из 15 пластин с тканевым бельтингом под давлением 0,02 МПа при температуре (75±5)°C. Фильтрат собирают в реактор, добавляют до необходимого объема питательной среды воду дистиллированную и нагревают до температуры (90±5)°C. Добавляют натрий хлористый до конечной концентрации 0,5% и натрий фосфорнокислый двузамещенный — до конечной концентрации 0,05%. Устанавливают значение pH до 8,0-8,1, используя 20% раствор натрия гидроокиси. Смесь кипятят в течение 20 мин при автоматическом перемешивании. Готовый бульон фильтруют в емкость из нержавеющей стали при температуре (75±5)°C через бельтинг, под давлением 0,02 МПа. Питательную среду стерилизуют в реакторе-ферментере при режиме (120±1)°C в течение 30 мин, после чего ее используют для выращивания производственных штаммов холерного вибриона.

Возможность практического использования изобретения подтверждена примерами выращивания производственных штаммов холерного вибриона: Vibrio cholerae не O1 105 и V. cholerae O1 М-41.

Для приготовления 125 л питательной среды с содержанием аминного азота 0,2% из гидролизата фибрина с содержанием аминного азота в основе 0,7% использовали 36,4 л осветленного углем гидролизата и 88,6 л воды дистиллированной с растворенными солевыми добавками: натрий хлористый — 0,625 кг до конечной концентрации 0,5% и натрий фосфорнокислый двузамещенный — 0,063 кг до конечной концентрации 0,05%. Смесь грели в реакторе до температуры (90±5)°C, устанавливали в среде pH 8,0, для чего использовали 20% раствор натрия гидроокиси — 0,4 л. Кипятили в течение 20 мин при автоматическом перемешивании. Готовый бульон фильтровали в емкость из нержавеющей стали при температуре (75±5)°C через бельтинг, под давлением 0,02 МПа. Питательную среду стерилизовали в реакторе-ферментере при режиме (120±1)°C в течение 30 мин, после чего ее использовали для выращивания производственного штамма V. cholerae не O1 105, который используется в качестве адсорбента для повышения специфичности холерных агглютинирующих сывороток и флуоресцирующих иммуноглобулинов.

При культивировании V. cholerae не O1 105 в ферментере объемом 0,250 м 3 с использованием среды из гидролизата фибрина показатель эффективности составил 40×10 9 м.к./мл среды, на традиционной среде по Хоттингеру — 18×10 9 м.к./мл, при одинаковых условиях культивирования: 37°C, в течение (24±0,5) ч. По эффективности адсорбции штамм V. cholerae не O1 105, выращенный на среде из гидролизата фибрина был аналогичен адсорбенту, выращенному на среде по Хоттингеру.

Приготовление питательной среды осуществляется по примеру 1, в объеме 250 л из гидролизата фибрина с содержанием аминного азота в основе 0,55%, поэтому использовали 100 л осветленного углем гидролизата и 150 л воды дистиллированной с растворенными солевыми добавками: натрий хлористый — 1,25 кг до конечной концентрации 0,5% и натрий фосфорнокислый двузамещенный — 0,125 кг до конечной концентрации 0,05%. В среду дополнительно вводили пептон ферментативный 2,5 кг (до 1%), по аналогии с прописью, использованной для контроля — питательной среды на основе гидролизата казеина. Для установления pH 8,0 добавляли 20% раствор натрия гидроокиси — 0,8 л.

Питательную среду стерилизовали в реакторе-ферментере при режиме (120±1)°C в течение 30 мин, после чего ее использовали для выращивания производственного штамма V. cholerae O1 М-41.

При выращивании V. cholerae O1 М-41 в ферментере объемом 0,5 м в условиях аэрации и подкормки раствором глюкозы — на среде из гидролизата фибрина (37°C, в течение 10 ч) получено биомассы 158×10 9 м.к./мл питательной среды, соответственно на среде из гидролизата казеина — 111,4×10 9 м.к./мл. При определении количества О-антигена в центрифугате формалинизированной культуры V. cholerae O1 М-41, выращенной на предлагаемой среде с основой из гидролизата фибрина и в центрифугате культуры, полученной с контрольной среды, регистрировали положительную реакцию агглютинации с холерной сывороткой O1 в разведении, соответственно 1/16 и 1/8.

Об эффективности применения питательных сред, приготовленных на основе гидролизата фибрина, свидетельствуют приведенные в таблице 3 данные масштабированного выращивания производственных штаммов холерного вибриона. Показатель эффективности сред, полученных на основе гидролизата фибрина, в 1,5-2 раза выше по сравнению со средами, полученными на основе гидролиза мяса и казеина. Увеличение выхода биомассы микроорганизмов обусловлено наличием в питательной среде сбалансированного и полноценного состава аминокислот, пептидов, углеводов и минеральных солей.

Таким образом, фибрин, образующийся в качестве отхода при производстве антирабического иммуноглобулина, является полноценной альтернативой мясному и казеиновому сырью в приготовлении питательной основы для культивирования микроорганизмов. Замена в питательной среде мясной или казеиновой основы гидролизатом фибрина позволяет существенно сократить себестоимость питательной среды без потери ее эффективности. Применение вторичного сырья позволяет решить ряд проблем по рациональному использованию имеющихся ресурсов. Внедрение в производство безотходных технологических процессов предотвращает загрязнение окружающей среды. Это имеет экологическое значение, а масштабы производства антирабического иммуноглобулина позволяют получать значительное количество такого сырья. Предлагаемая среда может быть использована при производстве медицинских иммунобиологических препаратов для диагностики холеры.

Таблица 1 Питательная среда для глубинного культивирования холерного вибриона Показатель Гидролизат фибрина Гидролизат мяса КРС (по Хоттингеру) Гидролизат казеина Описание Прозрачная жидкость темно-коричневого цвета Прозрачная жидкость темно-коричневого цвета Прозрачная жидкость темно-коричневого цвета Прозрачность Прозрачный Прозрачный Прозрачный Сухой остаток, % 7,06±0,56 8,05±0,99 10,27±0,62 Пептиды, % 1,84±0,12 2,49±0,93 2,51±0,11 Общий азот, % 1,1±0,17 1,16±0,12 1,43±0,11 Аминный азот, % 0,60±0,10 0,72±0,08 0,93±0,11 Расщепление белка, % 56,0±4,02 61,83±3,17 64,13±2,15 Фосфор неорганический, % 0,03±0,01 0,05±0,01 0,045±0,01 Фосфор общий, % 0,05±0,01 0,08±0,02 0,1±0,05 Хлориды, % 0,10±0,01 0,08±0,03 0,10±0,01 Кальций, % 0,0005±0,00 0,0018±0,0006 0,01±0,00 Магний, % 0,0022±0,0002 0,0032±0,0021 0,017±0,02 Железо, мкг 393±12 404±17 438±13 Углеводы, мкг 425±0,20 934±0,25 1300±0,11

Похожие патенты RU2425866C1

название	год	авторы	номер документа
ЖИДКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ VIBRIO CHOLERAE ВО ФЛАКОНАХ И БУТЫЛЯХ	2020	Сапрыкина Людмила Николаевна Подволоцкий Александр Николаевич Кибирев Александр Васильевич Тетерин Владимир Валентинович Филиппов Алексей Владимирович	RU2728217C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ ОСНОВЫ И ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА YERSINIA И VIBRIO	2007	Кузьмиченко Инна Александровна Громова Ольга Викторовна Киреев Михаил Николаевич Плотников Олег Петрович Грачева Ирина Васильевна Виноградова Наталья Александровна Солодовников Николай Сергеевич Червякова Надежда Сергеевна Нижегородцев Сергей Анатольевич Антонычева Марина Владимировна	RU2360962C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ МЛЕКОПИТАЮЩИХ	2018	Генералов Сергей Вячеславович Антонычева Марина Владимировна Абрамова Елена Геннадьевна Холматов Константин Игирович Жулидов Иван Михайлович Белоусов Алексей Дмитриевич Гаврилова Юлия Кирилловна Никифоров Алексей Константинович	RU2673718C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ЖИДКАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА	2006	Катунина Людмила Семеновна Ефременко Виталий Иванович Старцева Ольга Леонидовна Малецкая Ольга Викторовна Курилова Анна Алексеевна Бабий Александр Михайлович	RU2301256C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА	2006	Катунина Людмила Семеновна Ефременко Виталий Иванович Старцева Ольга Леонидовна Малецкая Ольга Викторовна Курилова Анна Алексеевна Бабий Александр Михайлович	RU2303630C1
СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ СУБЛИМИРОВАННЫХ ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ	2012	Кальной Сергей Михайлович Винокуров Владимир Иванович Гаркуша Юлия Юрьевна Зыков Андрей Владимирович	RU2532849C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ	1989	Боровикова Т.П. Негирева Т.М. Вейнблат В.И. Зимарина Л.С. Кудряшов Г.В.	SU1586180A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВОГО ГИДРОЛИЗАТА	2008	Мазрухо Алексей Борисович Каминский Денис Игоревич Рожков Константин Константинович Алутин Иван Михайлович	RU2375441C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ЖИДКАЯ ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ И СБРОСА БИОМАССЫ ВАКЦИОННОГО ШТАММА ЧУМНОГО МИКРОБА YERSINIA PESTIS EV	2020	Абзаева Наталья Вячеславовна Катунина Людмила Семеновна Иванова Галина Филипповна Гостищева Светлана Евгеньевна Ростовцева Дарья Владимировна Костроминов Артем Валерьевич Старцева Ольга Леонидовна Курилова Анна Алексеевна Богданова Юлия Викторовна Гридина Татьяна Михайловна Куличенко Александр Николаевич	RU2745504C1
СРЕДА ОБОГАЩЕНИЯ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА	2008	Мазрухо Алексей Борисович Каминский Денис Игоревич Рожков Константин Константинович Алутин Иван Михайлович	RU2392310C2

Реферат патента 2011 года ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА

Изобретение относится к биотехнологии и касается оптимизации питательной среды для глубинного культивирования холерного вибриона. Питательная среда содержит ферментативный гидролизат фибрина — отхода производства иммуноглобулина антирабического, получаемый в результате гидролиза препаратом нативной поджелудочной железы КРС, Na₂HPO₄×12H₂O, NaCl и дистиллированную воду. Изобретение позволяет расширить ассортимент питательных сред и снизить загрязнение окружающей среды. 3 табл.

Источник