5. Методы определения протеолитической активности бактерий
Протеолитическая активность микробов направлена на расщепление белков до промежуточных (пептоны, полипептиды, аминокислоты) или конечных (сероводород, индол, аммиак) продуктов. Действие протеолитических ферментов изучают на средах с желатином, молоком, сывороткой, пептоном.
Тест на желатиназу.Культуру микроорганизмов засевают уколом в столбик питательного бульона, содержащего 12% желатины. Посевы выдерживают при комнатной температуре (20-22°С) в течение нескольких (5-7) дней, при этом регистрируют не только наличие разжижения, но и его характер. Разжижение может быть послойным, что свойственно бактериям сине-зеленого гноя; холерный вибрион разжижает желатину в виде гвоздя; стафилококки – в виде чулка. Рост сибиреязвенных бацилл напоминает елочку, перевернутую вершиной вниз (характер разжижения послойный).
Тест на растворение свертка казеина.Культуру засевают на обезжиренное молоко. Культура расщепляет молочный сахар (лактозу) и за счет закисления среды наблюдается свертывание молочного белка (казеина). При выделении протеолитических ферментов казеин постепенно растворяется – пептонизируется, в результате чего молоко просветляется и приобретает легкий кремовый оттенок, а на дне пробирки формируется осадок.
Тест на свернутой кровяной сыворотке. Культуру исследуемых аэробных микробов засевают на чашки, анаэробных — уколом в столбик свернутой лошадиной сыворотки, инкубируют в термостате при 37 °С. Штаммы, продуцирующие протеолитические ферменты, разжижая питательную среду, образуют углубления вокруг колоний или на поверхности столбика среды.
Некоторые виды патогенных микробов с выраженной протеолитической активностью обладают способностью расщеплять белок и пептон до продуктов глубокого распада: индола, сероводорода, мочевины и аммиака. При определении видов и дифференциации разновидностей патогенных микробов наибольшее значение имеет выявление двух первых продуктов: индола и сероводорода.
Определение индола.Для обнаружения индола по способу Мореля узкие полоски фильтровальной бумаги смачивают горячим насыщенным раствором щавелевой кислоты и высушивают. Индикаторную бумажку помещают между стенкой пробирки с МПА и пробкой, предварительно произведя посев исследуемой культуры. При выделении индола на 2-3-й день нижняя часть полоски бумаги приобретает розовый цвет. Индол образуется при наличии у бактерий фермента триптофаназы при расщеплении сложной гетероциклической кислоты — триптофана.
Определение сероводорода.Сероводород является конечным продуктом расщепления аминокислот: цистина, цистеина и метионина, содержащих серу. Петлю исследуемой культуры микробов засевают в пробирку с мясопептонным бульоном. Сероводород обнаруживают с помощью полоски фильтровальной бумаги, пропитанной раствором ацетата свинца, которую закрепляют между стенкой засеянной пробирки и пробкой. При взаимодействии сероводорода и ацетата свинца бумага чернеет в результате образования сульфида свинца.
Тест на аммиак. Аммиак определяют при помощи увлажненной розовой лакмусовой бумажки, помещенной между стенкой и пробкой засеянной пробирки. Посевы инкубируют в термостате 1-5 суток. Посинение лакмусовой бумажки свидетельствует о выделении аммиака.
Источник
Среды для определения биохимической активности микробов
В микробиологии с целью дифференциации видов и типов бактерий часто бывают необходимо определить их сахаролетические и протеолетические свойства, гемолитическую активность, способность к редукции красок, газообразованию и др. Для выявления этих свойств микробные культуры выращивают на специальных дифференциально-диагностических средах.
Среды для определения ферментации углеводов готовят с цветными индикаторами.
Индикатор Андредэ. 0,5 г кислого фуксина (для бактериологии) растворяют в 100 мл стерильной дистиллированной воды, добавляют 16,4 мл нормального 4%-ного раствора едкого натра и стерилизуют при 0,5 ати 5 мин. Хранят в темном месте. Индикатор служит только для выявления кислотообразования.
Готовая питательная среда после добавления индикатора должна иметь в пробирках соломенно-желтый цвет без розового оттенка; в противном случае растворы краски и щелочи надо предварительно оттитровать. Для этого в 8 пробирок наливают по 5 мл 0,5%-ного раствора кислого фуксина; в первую пробирку добавляют 0,1 мл 0,4%-ного раствора едкого натра, а в каждую последующую на 0,1 мл больше, чем в предыдущую. Пробирки встряхивают и просматривают в проходящем свете. При составлении рецепта индикатора берут соотношение фуксина и щелочи, при котором цвет смеси наиболее приближается к соломенно-желтому, а также учитывают, что для титрования брали не 4%-ный раствор щелочи, а разбавленный в 10 раз (децинормальный).
Бромтимолблау (индикатор). 0,4 г бромтимолблау растворяют в 40 мл дистиллированной воды, нагревают до кипения J! добавляют 6,4 мл децинормального (0,4%-ного) раствора едкого натра. При этом жидкость становится зеленой и прозрачной. Если это не получилось, то добавляют по каплям раствор щелочи до позеленения раствора, а затем доводят объем реактива до 100 мл дистиллированной водой.
В углеводные среды индикатор добавляют в количестве 1-2%. Нейтральная среда приобретает зеленый цвет, при образовании щелочи она синеет, а при закислении — желтеет.
Среды с углеводами готовят на основе пептонной воды. Мясопептонный бульон сам содержит в себе некоторые углеводы и для данной цели непригоден.
Среды Андредэ. На 1 л пептонной воды, рН 7,6, асептически добавляют 10 мл индикатора Андредэ и 2,5-5 г того или иного углерода. После его растворения среду разливают по 5 мл В пробирки, простерилизованные с поплавками, которые помещены в пробирки запаянными концами кверху. Затем стерилизуют дробно текучим паром 30 мин 3 дня или однократно при 0,5 ати 25 мин. Засеянная Микробами среда при образовании кислоты постепенно краснеет за счет восстановления фуксина.
Среды Гисса (с углеводами) имеют тот же состав питательных веществ, что и среды Андредэ. От последних могут отличаться другими индикаторами и имеют рН 7,4. При отсутствии газоулавливающих поплавков в среды добавляют 0,5% агар-агара. В этом случае о ферментации углеводов судят по образованию пузырьков газа в глубине среды.
Бульон с яичным белком. Свежее куриное яйцо варят вкрутую, снимают скорлупу, в стерильной посуде отделяют белок, нарезают его в виде кубиков 5Х5Х5 мм, кладут в чашку Петри и стерилизуют при 1 ати 20 мин. В стерильный МПБ, хоттингеровский или другой бульон кладут пинцетом, соблюдая стерильность, по 2-3 кусочка белка в пробирку.
Для определения протеолитической активности анаэробов кусочки белка :помещают в пробирку со стерильным и прогретым МППБ, после чего на среду наслаивают 1 мл стерильного вазелинового масла и делают посев.
Кровяной агар. К расплавленному и охлажденному до 450 МПА (ДЛЯ кокков берут МПА с 1 % глюкозы) добавляют стерильно пипеткой 5-10% стерильной дефибринированной крови барана или крупного рогатого скота, перемешивают осторожно, чтобы не было пены, разливают в чашки и после застывания выдерживают сутки в термостате для проверки стерильности и подсушивания.
Среды с нитратом. В питательный бульон добавляют 0,2% нитрата калия для 1 варианта пробы на нитраты, или 1 % нитрата калин для II варианта пробы (см. Изучение биохимических свойств микробных культур). После растворения соли среду разливают в пробирки по 5 мл. И стерилизуют при 1 ати 15 мин.
Источник
Методические рекомендации по подготовке реферата:
• перечень тем рефератов «Морфология микроорганизмов», «Виды микроскопов», «Варианты микроскопии», «Микроскопический метод диагностики инфекционной патологии»;
• сроки выполнения работ – 1-2 недели
• единые критерии оформления и структуры реферата:
НАПИСАНИЕ, ОФОРМЛЕНИЕ И СТРУКТУРА РЕФЕРАТА
Реферат (от лат.refero – докладываю) это самостоятельная научно-исследовательская работа, содержащая анализ различных взглядов на рассматриваемую проблему и раскрывающая ее суть.
Написание реферата направлено на проверку навыков студента в работе с литературой, оценку способности обобщать материал, выделять проблемы, делать собственные аргументированные выводы, а также умения оформлять работу согласно требованиям.
Структура реферата включает оглавление, введение, основную часть, заключение и список литературы.
• Этапы написания реферата:
1. Выбор темы реферата
2. Работа с литературой
На этом этапе подбираются источники для написания реферата. После их общего просмотра детально изучают и конспектируют разделы, относящиеся к теме реферата.
В процессе конспектирования важно записывать библиографические сведения источника и номера страниц, с которых были заимствованы мысли для последующего оформления ссылок на источники.
• Структура и план реферата
План (от лат.planum – плоскость) представляет собой краткое изложение последовательности рассмотрения материала в работе. В завершенной работе план позволяет легко найти нужный раздел. В зависимости от степени детализации план реферата может быть простым или развернутым.
Первоначальный план реферата рекомендуется составлять еще на стадии выбора темы. В процессе работы с литературой структура реферата может видоизменяться. При окончательном оформлении работы план сопровождают заголовком «Оглавление».
• Написание основных разделов реферата
На этом этапе подготовленные ранее материалы обрабатывают, включают в работу собственный анализ. Затем располагают материал в соответствии с планом и формируют логические связки между элементами структуры реферата.
После того как текст полностью написан, производят его окончательную читку и оформление реферата.
1. Титульный лист
Оглавление располагают на следующей после титульного листа странице. Оно представляет собой структуру реферата с указанием наименований разделов и соответствующих им номеров страниц.
Во введении приводят сведения об актуальности темы и степени ее освещенности в литературе. Возможно включение и других пунктов.
4. Основная часть
Этот элемент структуры реферата может включать пункты (главы) и подпункты (параграфы) в рамках которых раскрывают тему и ее отдельные положения.
Содержит краткое изложение основных рассмотренных в реферате вопросов, подведение итогов и выводы.
6. Список использованной литературы
Для написания реферата требуется не менее 15 источников. Согласно правилам оформления реферата в список литературы включают не только цитированные источники, но и литературу, изученную при написании работы и упомянутую в тексте.
В случае наличия приложений их приводят после списка литературы.
критерии оценки реферата;
При оценке студенческих работ преподаватели в большинстве случаев руководствуются следующими принципами:
• актуальность темы исследования;
• соответствие содержания работы выбранной теме;
• полнота раскрытия темы;
• достижение в ходе работы поставленных целей и задач исследования;
• глубина проработки материала, степень владения автором специальной научной литературой по рассматриваемой теме;
• использование актуальных данных и источников;
• способность к критическому анализу литературы;
• логичность и грамотность изложения материала;
• степень самостоятельности автора при освещении проблемы;
• соответствие оформления работы стандартам.
В зависимости от типа работы могут рассматриваться все перечисленные аспекты или только некоторые из них.
По результатам оценки уровня выполнения требований работа может быть оценена на «отлично», «хорошо», «удовлетворительно», «неудовлетворительно».
перечень тем рефератов:
Особенности анаэробного дыхания. Методы выделения чистой культуры анаэробов.
Ферменты дыхательной цепи аэробов. Выделение чистой культуры аэробов,
Непрерывная культура микроорганизмов. Использование в промышленности. Получение БАВ.
Угеводолитическая и протеолитическая активность анаэробов. Методы изучения.
Микробиологический метод исследования
Ориентировочная основа действия (ООД) для проведения самостоятельной работы студентов в учебное время (курация, выполнение лабораторной работы и т.д.).
Подготовить к проверке материалы по СРС (письменные ответы на вопросы домашнего задания, лекции по теме занятия).
Охарактеризовать и определить мотивацию, цель и задачи занятия.
Входной контроль уровня знаний.
Разобрать схему выделения и идентификации чистой культуры аэробных бактерий.
Разобрать схему выделения анаэробных бактерий.
Разобрать биологический метод выявления анаэробов (по Фортнеру).
Поставить и оценить тест на образование индола.
Итоговый контроль уровня знаний.
Список рекомендуемой литературы:
1. Лекция по теме.
2. Методическая разработка по теме.
3. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология /М., 2008. 736 с.
4. Поздеев О.К. Медицинская микробиология /М.: ГЭОТАР-МЕД, 2008. 768 с.
Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии /Под ред. Быкова А.С., Воробьева А.А., Зверева В.В. – М., 2008. – 32 — 33.
Шаркова В.А., Забелина Н.Р., Воропаева Н.М., Диго Р.Н., Коршукова О.А., Карпенко Н.В. Учебно-методическое пособие к практическим занятиям по общей микробиологии, вирусологии и иммунологии для студентов медицинских вузов /Учебно-методическое пособие. 2011. Владивосток: Медицина ДВ. 179 с.
Руководство по медицинской микробиологии (Общая и санитарная микробиология) /под ред. Лабинской А.С., Волиной Е.Г. – М., Бином. 2008.- с.182 — 280.
Биргер М.О. – справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М., 1982. С. 93-96.
Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2006.
Медицинская микробиология. Под ред. Королюка А.М., Сбойчакова В.Б. С-Пб, 2002. С.21-57.
Меджидов М.М. Справочник по микробиологическим питательным средам. М., 2003. С. 97.
4. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С-Пб, 2002.
5. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Воробьева А.А. М., 2006.
6. Поздеев О.И. Медицинская микробиология. Под ред. Покровского В.И. М., 2006.
Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.
Источник
