Микропрепарат мазок способ приготовления

Содержание

ЛАБОРАТОРИЯ МИКРОСКОПИРОВАНИЯ
1. Приготовление микропрепаратов
1.1. Приготовление временного препарата
1.2. Приготовление мазка крови
2. Некоторые особенности микроскопирования
2.1. Имерсионный объектив
2.2. Фотографии в косом освещении и темном поле
3. Съемка
4. Интернет-ресурсы
Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)
3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии

ЛАБОРАТОРИЯ МИКРОСКОПИРОВАНИЯ

1. Приготовление микропрепаратов

Далеко не всё, что есть под рукой, имеет смысл класть на предметный столик и пытаться рассмотреть в окуляр микроскопа. Например, непрозрачные объекты (палец, монета) рассмотреть совсем не удастся, да и для рассматривания вполне достаточно сильной лупы.

Обычно для микроскопирования используют специально приготовленные микропрепараты. При приготовлении микропрепарата берется предметное стекло (размер 25 × 75 мм), на которое помещается рассматриваемый объект; обычно для лучшей сохранности и удобства использования объект накрывается сверху тонким покровным стеклом (размер 18 × 18 мм).

По способу приготовления и времени хранения различают:

постоянные препараты – объект помещен в прозрачную твердеющую среду (обычно канадский бальзам) и накрыт покровным стеклом; такие препараты могут храниться годами и десятилетиями, однако их приготовление весьма трудоемко (объект должен быть тщательно подготовлен: обезвожен, окрашен и др.);
временные препараты – объект помещен в жидкую среду (вода, физиологический раствор, глицерин-желатин и др.), такие препараты годны для использования в течение нескольких часов, однако с ними можно проводить опыты (например, заменять воду солевым раствором определенной концентрации, добавлять краситель и др.).

В таблице представлены типы препаратов в зависимости от характера исследуемого объекта.

Тип

Описание

Постоянный/ временный

Пример

Целый организм или его небольшие части (конечности, ротовой аппарат). Обычно требуют обработки (осветления)

Объект заливается в пластичный материал (парафин, акрил) и после его затвердевания разрезается на тонкие пластины с помощью микротома (приспособления для получения тонких срезов)

Токослойный препарат без покровного стекла (обычно препарат крови): капля с помощью полированного стекла размазывается по поверхности предметного стекла тонким слоем, высушивается

Временный, реже постоянный

Тонкая (толщина 0,03-0,02 мм) пластинка горной породы или другого твердого образца (кости, окаменелости), приклеенная к покровному стеклу

В некоторых случаях временный препарат можно рассматривать непосредственно, не накрывая покровным стеклом. Такой препарат будет практически невозможно рассмотреть резко сразу весь – какая-то часть его будет в фокусе, а остальное – нет. Но если рассматривать такой препарат с малым увеличением микроскопа, можно рассмотреть некоторые интересные объекты.

Микропрепарат клеток мякоти арбуза (без покровного стекла)

Так же в виде открытых временных препаратов можно вырастить кристаллы разных солей (ацетилсалициловой кислоты, или аспирина; медного купороса, или сульфата меди; красной кровяной соли, или гексацианоферрата калия). На предварительно очищенное от пыли и отпечатков пальцев наносится несколько капель водного или спиртового раствора соли (для лучшего качества кристаллов раствор предварительно лучше профильтровать, так как это позволит уменьшить количество точек кристаллизации и получить более крупные и аккуратные кристаллы). Каплям дают высохнуть (можно провести эксперимент с одним из стекол, нагрев его, с целью ускорения выпаривания, а другому дать растворителю испариться, а кристаллам – выпасть самостоятельно). Также можно рассматривать полуготовый микропрепарат на этапе процесса кристаллизации: можно увидеть, как кристалл увеличивается прямо на глазах или как вокруг зародыша твердого вещества возникает течение жидкости из-за разницы концентраций ионов.

Простой и эффектный способ изготовления микропрепаратов без срезов, позволяющий рассмотреть рельеф поверхности изучаемого объекта (например, листа растения, покровов тела насекомого) – метод реплик. При этом берется объект (например, лист растения), и на него наносится тонкий слой прозрачного лака для ногтей (достаточно небольшого пятна 5 × 10 мм). После того, как лак высохнет (примерно через 5-7 минут), к лаковому пятну приклеивается кусок липкой ленты; так реплика отделяется, после чего ее кладут на предметное стекло и рассматривают под микроскопом.

Реплика поверхности листа, видны устьичные клетки и жилка
(микроскоп Микромед С-13, малое увеличение).

1.1. Приготовление временного препарата

Техника приготовления временного препарата хорошо известна по школьным опытам с кожицей лука. Кладем предметное стекло на стол (препараты всегда держат за боковые грани предметного стекла). В центр стекла помещаем 1-2 капли воды и объект исследования Берем покровное стекло за боковые грани и осторожно накрываем им сверху каплю с объектом. Правильнее упереть покровное стекло одной из граней в предметное и медленно уменьшать угол между стеклами так, чтобы накрыть каплю с объектом. Это уменьшает возможность появления пузырьков воздуха.

Накрывание объекта покровным стеклом

1.2. Приготовление мазка крови

Мазки крови для исследования крови готовят следующим образом.

Описание

Фотография

Поместите небольшую каплю крови на лежащее на горизонтальной поверхности предметное стекло, с помощью стеклянной капиллярной пипетки (или непосредственно из места укола пальца перенесите выступившую каплю крови на конец стерильного предметного стекла, стараясь не касаться стекла проколотым участком кожи).

Чистое шлифованное стекло помещается коротким ребром под углом 45° к предметному стеклу у края капли. Ждем, пока кровь расплывется под ребром стекла.

Как только кровь растеклась по ребру, быстрым движением от капли проводим по предметному стеклу. Не следует сильно нажимать на стекло, так как при этом могут разрушиться форменные элементы крови.

После приготовления мазок быстро сушат на воздухе до исчезновения влажного блеска, подержав его над абажуром лампы или помахав им в воздухе. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается «метелочкой». Густо-розовые и красноватые мазки непригодны, так как они слишком толстые и клеточные элементы различить будет сложно.

Шаг

2. Некоторые особенности микроскопирования

Использование микроскопов на малом и большом увеличении достаточно хорошо известно по школьным опытам и не требует особо сложных навыков.

2.1. Имерсионный объектив

Если в ващем распоряжении имеется микроскоп с иммерсионным объективом (он маркируется 100× МИ и черным кольцом, и имеет подвижную часть объектива, обращаемую к микропрепарату), то у вас есть возможность рассмотреть объекты с большим увеличением (однако для этого имеет смысл использовать мазки).

Выведите из хода лучей сухой объектив (поверните барабан объективов так, чтобы ни один объектив не был обращен к препарату).
На препарат нанесите одну каплю иммерсионного (кедрового) масла; желательно иммерсионным маслом также немного смазать линзу этого объектива.
Повернув барабан объективов, введите иммерсионный объектив в ход лучей (до щелчка фиксации).
Опустите объектив до соприкосновения с каплей иммерсионного масла, затем, наблюдая в микроскоп, с помощью винтов грубой и точной фокусировки, произведите настройку на резкость.

При работе с иммерсионным объективом потребуется максимальная освещенность. После окончания исследования иммерсионный объектив нужно протереть мягкой оптической тряпочкой или батистовой, слегка смоченной специальной жидкостью для чистки оптики. Важно: любые другие виды объективов протирать нельзя!

Применение вместо кедрового масла других масляных жидкостей не рекомендуется, т. к., если показатель преломления используемой иммерсии (например, вазелинового масла с показателем 1,48162) отличается от показателя преломления кедрового масла (показатель 1,515), возможно снижение контраста, нечеткость изображения, уменьшение разрешающей способности.

2.2. Фотографии в косом освещении и темном поле

Для объемных препаратов (тотальные препараты насекомых, водорослей и др.) интересно использовать освещение, отличное от обычного просвечивающего. Для регулировки освещения в микроскопах используется конденсор – поворотное устройство с отверстиями разного диаметра и расположения. Используя специальные варианты конденсора, можно изменить характер освещения препарата, подчеркнув объем рассматриваемого объекта.

В таблице сравнивается работа с освещением разных типов.

Тип освещения

Способ создания

Вид зрачка объектива с вынутым окуляром

Пример

Свет проходит через поле зрения равномерно.

Свет проходит через препарат под углом, так как конденсор закрывает часть отверстия. Этого эффекта можно добиться притеняя рукой или другой преградой часть светового потока перед зеркалом микроскопа

Специальный конденсор закрывает центральную часть поля зрения, так что свет проходит с краев. При определенной тренировке такого эффекта также можно добиться, частично притеняя часть светового потока перед зеркалом микроскопа

3. Съемка

Фотографирование настроенного на резкость микропрепарата с помощью камеры планшета особых трудностей не представляет, так как мы непосредственно контролируем то, что именно будем снимать. Настройки камеры планшета также зависят от типа устройства, которое вы используете; так как камера планшета обычно имеет достаточно большую глубину резкости, даже при настройках камеры по умолчанию можно получить вполне качественное изображение.

Планшетный компьютер и микроскоп: съемка, фотография, кадр с выносками и обозначениями

4. Интернет-ресурсы

Лекция по микроскопированию для студентов:

Простые опыты в домашних экспериментах:

Сайты с историческими микроскопами и микропрепаратами:

Источник

Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Овладеть методикой приготовления препаратов для микроскопии и их окраски простым методом. Ознакомиться с основными формами бактерий.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Пробирки со взвесью бактериальных культур (кишечная палочка, стафилококки, вакцинный штамм бациллы сибирской язвы). Набор растворов красок – разведенный фуксин, щелочная метиленовая синь; предметные стекла, спиртовки, бактериологические петли, микроскопы.

3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии

Препараты для микроскопии готовят на предметных стеклах. Для работы необходимо иметь специально приготовленные предметные и покровные стекла, которые должны быть чистыми и обезжиренными.

Новые стекла моют в теплой воде с мылом. Для обезжиривания их помещают на 2-3 дня в смесь Никифорова (равные объемы спирта и эфира в сосуде с притертой пробкой).

Если предметные или покровные стекла были в употреблении, их обрабатывают хромовой смесью, промывают водой, кипятят 30-40 мин в 5%-ном растворе соды.

Необработанные стекла можно обезжирить, натерев их мылом, а затем почистить сухой тканью. Капля воды, нанесенная на хорошо обезжиренное стекло, растекается равномерно. На недостаточно обезжиренном стекле вода распадается на мелкие капли.

В зависимости от характера исследуемого материала при его взятии используют бактериологическую петлю или пастеровскую пипетку. Петлю делают из платиновой или нихромовой проволоки длиной 5-6 см и закрепляют в петледержателе. На конце проволоки делают петлю. Петлю держат, как карандаш. Рабочую часть петли стерилизуют в пламени горелки в вертикальном положении, сначала конец петли, затем петледержатель.

Приготовление окрашенного препарата (мазка) состоит из нескольких этапов (рис. 7): 1) приготовление; 2) высушивание; 3) фиксация; 4) окраска.

Рис. 7. Схема приготовления препарата-мазка

1. Приготовление мазка

На предметном стекле с обратной стороны восковым карандашом обозначают место мазка диаметром 2-3 см.

Из культуры, выращенной на жидкой питательной среде, стерильной петлей берут каплю материала и распределяют на предметном стекле. Из культур, выращенных на плотной среде, петлей с поверхности берут небольшое количество материала, размешивают в заранее нанесенной на предметное стекло капле физиологического раствора или воды и размазывают по стеклу.

Из плотного патологического материала (печень, почки, селезенка и др.) делают мазки-отпечатки. Для этого стерильными ножницами отрезают кусочек органа и прикладывают к предметному стеклу, делая один или несколько отпечатков.

2. Высушивание мазка

Мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре или в термостате.

3. Фиксация мазка

Мазки фиксируют после полного высыхания с целью:

1) закрепить мазок на стекле;

2) убить бактерии;

3) убитые бактерии лучше воспринимают краску.

Фиксацию мазков осуществляют одним из двух способов: физическим и химическим. Физический метод заключается в трехкратном проведении обратной стороной мазка через пламя спиртовой горелки, задерживая в пламени на 1-2 секунды.

При химическом способе мазок погружают в жидкости:

а) этиловый спирт 96°-ный на 10-15 минут, или

б) смесь равных объемов спирта и эфира на 10-15 мин, или

в) ацетон — 5 минут.

4. Окраска мазка

Бактерии различно относятся к красителям, эти свойства называют тинкториальными.

Источник