Культурные свойства микроорганизмов определяют следующим способом

Содержание

Культуральные свойства микроорганизмов кратко
Культуральные свойства бактерий
Выделение чистых культур микроорганизмов
Как производится изучение культуральных свойств бактерий

Культуральные свойства микроорганизмов кратко

Культуральные свойства бактерий

Ккультуральным или макроморфологическим свойствам относятся характерные особенности роста микроорганизмов на плотных и жидких питательных средах. На поверхности плотных питательных сред в зависимости от посева микроорганизмы могут расти в виде колоний, штриха или сплошного газона.

Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросших из одной клетки (клон клеток). В зависимости от того, где растет микроорганизм (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее), различают поверхностные, глубинные и донные колонии.

Колонии, выросшие на поверхности среды, отличаются разнообразием, они видоспецифичны и их изучение используется для определения видовой принадлежности исследуемой культуры.

При описании колоний учитывают следующие признаки:

форму колонии — округлая, амебовидная, ризоидная, неправильная и т.д.;
размер (диаметр) колонии — очень мелкие (точечные) (0,1-0,5 мм), мелкие (0,5-3 мм), средних размеров (3-5 мм) и крупные (более 5 мм в диаметре);
поверхность колонии — гладкая, шероховатая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная;
профиль колонии — плоский, выпуклый, конусовидный, кратерообразный и т.д.;
прозрачность — тусклая, матовая, блестящая, прозрачная, мучнистая;
цвет колонии (пигмент) — бесцветная или пигментированная (белая, желтая, золотистая, красная, черная), особо отмечают выделение пигмента в среду с ее окрашиванием;
край колонии — ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т.д.;
структура колонии — однородная, мелко или крупнозернистая, струйчатая; край и структуру колонии определяют с помощью лупы или на малом увеличении микроскопа, поместив чашку Петри с посевом на столик микроскопа крышкой вниз;
консистенция колонии — определяют прикасаясь к поверхности петлей, колония может быть плотной, мягкой, врастающей в агар, слизистой (тянется за петлей), хрупкой (легко ломается при соприкосновении с петлей).

Глубинные колонии чаще всего похожи на более или менее сплющенные чечевички (форма овалов с заостренными концами), иногда комочки ваты с нитевидными выростами в питательную среду. Образование глубинных колоний часто сопровождается разрывом плотной среды, если микроорганизмы выделяют газ.

Донные колонии имеют обычно вид тонких прозрачных пленок, стелющихся по дну.

Особенности колонии могут изменяться с возрастом, они зависят от состава среды, температуры культивирования.

Рост микроорганизмов на жидких питательных средах учитывают, используя 4-7 суточные культуры, выращенные в стационарных условиях.

В жидких питательных средах при росте микроорганизмов наблюдается помутнение среды, образование пленки или осадка.

Рост бактерий с равномерным помутнением среды, что характерно для факультативных анаэробов. Степень помутнения может быть слабая, умеренная, сильная.
Придонный рост бактерий характеризуется образованием осадка: скудного, обильного, рыхлого, слизистого, хлопьевидного, зернистого. Питательная среда может быть прозрачной или мутной.
Пристеночный рост — образование зерен, рыхлых хлопьев на внутренней поверхности стенок сосуда. Питательная среда при этом остается прозрачной.
Поверхностный рост бактерий характеризуется появлением на поверхности среды пленки: тонкой, плотной, рыхлой, гладкой, складчатой, влажной, сухой, кольцеобразной, сплошной. Такой рост наблюдается при культивирован ии аэ робных бактерий.

Нередко рост микробов сопровождается появлением запаха, пигментацией среды, выделением газа. Характерный запах культур некоторых видов бактерий связан с образованием различных эфиров (уксусноэтилового, уксусноамилового и др.), индола, меркаптана, сероводорода, скатола, аммиака, масляной кислоты.

Способность образовывать пигменты присуща многим видам микроорганизмов. Химическая природа пигментов разнообразна: каротиноиды, антоцианы, меланины. Если пигмент не растворим в воде, окрашивается только культуральный налет, если же он растворим, окрашивается и питательная среда. Считается, что пигменты защищают бактерии от губительного действия солнечных лучей, поэтому в воздухе так много пигментированных бактерий, кроме того, пигменты участвуют в обмене веществ этих микроорганизмов.

В природе существуют, так называемые, фосфоресцирующие бактерии, культуры которых светятся в темноте зеленовато-голубоватым или желтоватым светом. Такие бактерии встречаются, главным образом, в речной или морской воде. К светящимся бактериям — фотобактериям — относятся аэробные бактерии (вибрионы, кокки, палочки).

Выделение чистых культур микроорганизмов

Чистой культурой называют такую культуру, которая содержит микроорганизмы одного вида. Выделение чистых культур бактерий — обязательный этап бактериологического исследования в лабораторной диагностике инфекционных болезней, в изучении микробной загрязненности различных объектов окружающей среды, и, в целом, при любой работе с микроорганизмами. Исследуемый материал (гной, мокрота, фекалии, кровь и другой материал от больных; вода, почва, воздух, пищевые продукты, трупы животных и человека, переносчики) обычно содержит ассоциации микробов.

Выделение чистой культуры позволяет изучить морфологические, культуральные, биохимические, антигенные и другие признаки, по совокупности которых определяется видовая и типовая принадлежность возбудителя, то есть производится его идентификация.

Для выделения чистых культур микроорганизмов используют методы, которые можно разделить на несколько групп.

Метод Пастера — последовательное разведение исследуемого материала в жидкой питательной среде до концентрации одной клетки в объеме (имеет историческое значение).
Метод Коха («пластинчатые разводки») — последовательное разведение исследуемого материала в расплавленном агаре (температура 48-50 ° С), с последующим разливом в чашки Петри, где агар застывает. Высевы делают, как правило, из трех-четырех последних разведений, где бактерий становится мало и, в дальнейшем, при росте на чашках Петри появляются изолированные колонии, образующиеся из одной исходной материнской клетки. Из изолированных колоний в глубине агара получают чистую культуру бактерий пересевом на свежие среды.
Метод Шукевича — применяется для получения чистой культуры протея и других микроорганизмов обладающих «ползущим» ростом. Посев исследуемого материала производят в конденсационную воду у основания скошенного агара. Подвижные микробы (протей) способны подниматься вверх по скошенному агару, неподвижные формы остаются расти внизу на месте посева. Пересевая верхние края культуры можно получить чистую культуру.
Метод Дригальского — широко применяется в бактериологической практике, при этом исследуемый материал разводят в пробирке стерильным физиологическим раствором или бульоном. Одну каплю материала вносят в первую чашку и стерильным стеклянным шпателем распределяют по поверхности среды. Затем этим же шпателем (не прожигая его в пламени горелки) делают такой же посев во второй и третьей чашках. С каждым посевом бактерий на шпателе остается все меньше и меньше и, при посеве на третью чашку, бактерии будут распределяться по поверхности питательной среды отдельно друг от друга. Через 1-7 сут выдерживания чашек в термостате (в зависимости от скорости роста микроорганизмов) на третьей чашке каждая бактерия дает клон клеток, образуя изолированную колонию, которую пересевают на скошенный агар с целью накопления чистой культуры.
Метод Вейнберга. Особые трудности возникают при выделении чистых культур облигатных анаэробов. Если контакт с молекулярным кислородом не вызывает сразу же гибели клеток, то посев производят по методу Дригальского, но после этого чашки сразу помещают в анаэростат. Однако чаще пользуются методом разведения. Сущность его заключается в том, что разведения исследуемого материала проводят в расплавленной и охлажденной до 45-50 ° С агаризированной питательной среде. Делают 6-10 последовательных разведений, затем среду в пробирках быстро охлаждают и заливают поверхность слоем смеси парафина и вазелинового масла, чтобы помешать проникновению воздуха в толщу питательной среды. Иногда питательную среду после посева и перемешивания переносят в стерильные трубки Бурри или капиллярные пипетки Пастера, концы которых запаивают. При удачном разведении в пробирках, трубках Бурри, пипетках Пастера вырастают изолированные колонии анаэробов. Чтобы изолированные колонии хорошо были видны, используют осветленные питательные среды. Для извлечения изолированных колоний анаэробов, пробирку слегка нагревают, вращая ее над пламенем, при этом агар, прилегающий к стенкам, плавится и содержимое пробирки в виде агарового столбика выскальзывает в стерильную чашку Петри. Столбик агара разрезают стерильным пинцетом и извлекают колонии петлей. Извлеченные колонии помещают в жидкую среду, благоприятную для развития выделяемых микроорганизмов (например, среду Китта-Тароцци). Агаризированную среду из трубки Бурри выдувают, пропуская газ через ватную пробку.
Метод Хангейта — когда хотят получить изолированные колонии бактерий с особенно высокой чувствительностью к кислороду (ст рогие аэробы) используют метод вращающихся пробирок Хангейта. Для этого расплавленную агаризированную среду засевают бактериями при постоянном токе через пробирку инертного газа, освобожденного от примеси кислорода. Затем пробирку закрывают резиновой пробкой и помещают горизонтально в зажим, вращающий пробирку, среда при этом равномерно распределяется по стенкам пробирки и застывает тонким слоем. Применение тонкого слоя в пробирке, заполненной газовой смесью, позволяет получить изолированные колонии, хорошо видимые невооруженным глазом.
Выделение отдельных клеток с помощью микроманипулятора. Микроманипулятор — прибор, позволяющий с помощью специальной микропипетки или микропетли извлекать одну клетку из суспензии. Эту операцию контролируют под микроскопом. На предметном столике микроскопа устанавливают влажную камеру, в которую помещают препарат «висячая капля». В держателях операционных штативов закрепляют микропипетки (микропетли), перемещение которых в поле зрения микроскопа осуществляется с микронной точностью благодаря системе винтов и рычагов. Исследователь, глядя в микроскоп, извлекает отдельные клетки микропипетками и переносит их в пробирки со стерильной жидкой средой для получения клона клеток.

Как производится изучение культуральных свойств бактерий

СХЕМА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ДИАГНОСТИКИ

(протокол)

Й день исследования.

Посев исследуемого материала № _________ на ___________________________________

Инкубация в термостате при _______ °C 18-24 часа.

Й день исследования.

Изучение морфологических, тинкториальных и культуральных свойств выросших микроорганизмов:

Изучаемые свойства	Тип колонки
Культуральные: форма колонии
Размер колонии
Цвет колонии
Характер края
Характер поверхности
Консистенция
Морфологические:
Окраска по Граму

Откол колонии Грамм(-) палочек на скошенный МПА.

Инкубация в термостате при______ °C 18 – 24.

Й день исследования.

1. Визуальная и микроскопическая проверка чистоты выделенной фигуры.

Постановка биохимических тестов:

На основании морфологических, тинкториальных свойств и типа дыхания можно предположить, что выделенная культура относится к семейству Enterebakteriaceae.

В) Постановка биохимических тестов в «Панели биохимической дифференцировки энтеробактерий»

Инкубация в термостате при ______ °C 4 часа.

Посев для определения чувствительности выделенной культуры к антибиотикам методом стандартных дисков.

4. Учет биохимических свойств в ПБДЭ.

глю лак сах ара адо мал ман сор

Глю-глюкоза Адо-адонит «+» — желтый

Лак-лактоза Мал-мальтоза «-» — красный

Выдача предварительного ответа.

Из материала от больного выделена культура________________________________

Й день исследования.

1. Учет чувствительности к антибиотикам.

Антибиотик

Диаметр зоны отсутствия роста, мм

Характеристика штамма (У.УУ.Ч)

Выдача окончательного ответа.

Из материала от больного выделена культура_______________________________

Чувствительная к ______________________________________________________

Техника забора материала для бактериологического (вирусологического) исследования

Сбор кала.

Цель:диагностическая

Показания: по назначению врача (диагностика инфекционных заболеваний, сопровождающихся диареей).

Противопоказания: нет

Приготовьте: 1.

2. стерильные пробирки со стерильной палочкой и консервантом;

3. сухие стерильные пробирки с пробкой;

стерильный шпатель (петлю, ложечку);

7. бланки направлений в лабораторию;

Подготовка пациента:1. Психологическая подготовка пациента

2. Объяснение смысла манипуляции пациенту

3. Инструктаж пациента

1.Забор кала из горшка или судна.

1.1 Возьмите стерильную палочку, петлю или ложечку ( при жидком стуле) и проведите забор кала из судна в количестве 1-2 г, выбирая наиболее подозрительные места, но без крови.

1.2 Поместите материал в сухую стерильную пробирку (банку), закройте пробкой.

1.3 Выпишите направление в лабораторию.

1.4 Проследите за доставкой материала в лабораторию.

2.Забор кала из прямой кишки ( при отсутствии стула, при профосмотре декретированного контингента, при обследовании контактировавших с больными ОКИ и лиц, находящихся под диспансерным наблюдением):

2.1 Уложите пациента на бок, на клеенку с согнутыми в коленях ногами.

2.2 Наденьте перчатки, дополнительный халат.

2.3 Достаньте из пробирки стерильную палочку, смоченную в консерванте.

2.4 Разведите левой рукой ягодицы пациента.

2.5 Осторожно введите вращательным движением палочку в задний проход на глубину 7-10 см.

2.6 Извлеките палочку и поместите ее в стерильную пробирку с консервантом, не касаясь краев пробирки.

2.7 Снимите перчатки, обработайте их и клеенку 3% раствором хлорамина.

2.8 Выпишите направление в лабораторию.

2.9 Проследите за доставкой материала в бактериологическую.

Примечание: при взятии кала на бактериологическое исследование в вечернее и ночное время, пробирка с материалом в консерванте должна храниться в холодильнике.

Цель: диагностическая.

Показания: по назначению врача.

Противопоказания: нет

Приготовьте: 1.

стерильный флакон с крышкой

2. бланки направлений в лабораторию

Подготовка пациента:1.

Психологическая подготовка пациента.

2. Объяснение смысла манипуляции пациенту.

4. Проведите пациенту гигиенический туалет

наружных половых органов ( при невозможности

провести процедуру самим пациентом).

Последовательность действий:

1. Попросите пациента собрать мочу в стерильную банку из средней порции мочи.

2. Поставьте банку с мочой в туалетную комнату.

3. Выпишите направление в бактериологическую лабораторию, проследите за доставкой мочи в лабораторию не позднее, чем через 1 час после её сбора.

Примечание: из-за опасности инфицирования мочевого пузыря забор мочи для бактериологического исследования проводят выше описанным способом, но иногда приходится прибегать к катетеризации мочевого пузыря.

К культуральным или макроморфологическим свойствам относятся характерные особенности роста микроорганизмов на плотных и жидких питательных средах. На поверхности плотных питательных сред в зависимости от посева микроорганизмы могут расти в виде колоний, штриха или сплошного газона.

Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросших из одной клетки (клон клеток). В зависимости от того, где растет микроорганизм (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее), различают поверхностные, глубинные и донные колонии.

При описании колоний учитывают следующие признаки:

форму колонии — округлая, амебовидная, ризоидная , неправильная и т.д.;
размер (диаметр) колонии — очень мелкие (точечные) (0,1-0,5 мм), мелкие (0,5-3 мм), средних размеров (3-5 мм) и крупные (более 5 мм в диаметре);
поверхность колонии — гладкая, шероховатая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная;
профиль колонии — плоский, выпуклый, конусовидный, кратерообразный и т.д.;
прозрачность — тусклая, матовая, блестящая, прозрачная, мучнистая;
цвет колонии (пигмент) — бесцветная или пигментированная (белая, желтая, золотистая, красная, черная), особо отмечают выделение пигмента в среду с ее окрашиванием;
край колонии — ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т.д.;
структура колонии — однородная, мелко или крупнозернистая, струйчатая; край и структуру колонии определяют с помощью лупы или на малом увеличении микроскопа, поместив чашку Петри с посевом на столик микроскопа крышкой вниз;
консистенция колонии — определяют прикасаясь к поверхности петлей, колония может быть плотной, мягкой, врастающей в агар , слизистой (тянется за петлей), хрупкой (легко ломается при соприкосновении с петлей).

Описание роста микроорганизмов при посеве штрихом включает его особенности: скудный, умеренный, обильный; сплошной с ровным или волнистым краем; диффузный; перистый; ризоидный ; древовидный. Характеризуют цвет, поверхность, консистенцию.
Особенности колонии могут изменяться с возрастом, они зависят от состава среды, температуры культивирования.
Рост микроорганизмов на жидких питательных средах учитывают, используя 4-7 суточные культуры, выращенные в стационарных условиях.
В жидких питательных средах при росте микроорганизмов наблюдается помутнение среды, образование пленки или осадка.

Рост бактерий с равномерным помутнением среды , что характерно для факультативных анаэробов.
Степень помутнения может быть слабая, умеренная, сильная.
Придонный рост бактерий характеризуется образованием осадка: скудного, обильного, рыхлого, слизистого, хлопьевидного, зернистого. Питательная среда может быть прозрачной или мутной.

Пристеночный рост — образование зерен, рыхлых хлопьев на внутренней поверхности стенок сосуда.Питательная среда при этом остается прозрачной.
Поверхностный рост бактерий характеризуется появлением на поверхности среды пленки: тонкой, плотной, рыхлой, гладкой, складчатой, влажной, сухой, кольцеобразной, сплошной. Такой рост наблюдается при культивирован ии аэ робных бактерий.

При росте на полужидких (0,5-0,7% агара ) питательных средах подвижные микробы вызывают выраженное помутнение, неподвижные формы растут только по ходу посева уколом в среду.
Нередко рост микробов сопровождается появлением запаха, пигментацией среды, выделением газа.

Характерный запах культур некоторых видов бактерий связан с образованием различных эфиров ( уксусноэтилового , уксусноамилового и др.), индола, меркаптана, сероводорода, скатола, аммиака, масляной кислоты.
Способность образовывать пигменты присуща многим видам микроорганизмов. Химическая природа пигментов разнообразна: каротиноиды , антоцианы, меланины. Если пигмент не растворим в воде, окрашивается только культуральный налет, если же он растворим, окрашивается и питательная среда.

Считается, что пигменты защищают бактерии от губительного действия солнечных лучей, поэтому в воздухе так много пигментированных бактерий, кроме того, пигменты участвуют в обмене веществ этих микроорганизмов.
В природе существуют, так называемые, фосфоресцирующие бактерии, культуры которых светятся в темноте зеленовато-голубоватым или желтоватым светом. Такие бактерии встречаются, главным образом, в речной или морской воде. К светящимся бактериям — фотобактериям — относятся аэробные бактерии (вибрионы, кокки, палочки).

К культуральным или макроморфологическим свойствам относятся характерные особенности роста микроорганизмов на плотных и жидких питательных средах. На поверхности плотных питательных сред в зависимости от посева микроорганизмы могут расти в виде колоний, штриха или сплошного газона.
Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросших из одной клетки (клон клеток).

В зависимости от того, где растет микроорганизм (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее), различают поверхностные, глубинные и донные колонии.
Колонии, выросшие на поверхности среды, отличаются разнообразием, они видоспецифичны и их изучение используется для определения видовой принадлежности исследуемой культуры.

При описании колоний учитывают следующие признаки:

форму колонии — округлая, амебовидная, ризоидная , неправильная и т.д.;
размер (диаметр) колонии — очень мелкие (точечные) (0,1-0,5 мм), мелкие (0,5-3 мм), средних размеров (3-5 мм) и крупные (более 5 мм в диаметре);
поверхность колонии — гладкая, шероховатая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная;
профиль колонии — плоский, выпуклый, конусовидный, кратерообразный и т.д.;
прозрачность — тусклая, матовая, блестящая, прозрачная, мучнистая;
цвет колонии (пигмент) — бесцветная или пигментированная (белая, желтая, золотистая, красная, черная), особо отмечают выделение пигмента в среду с ее окрашиванием;
край колонии — ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т.д.;
структура колонии — однородная, мелко или крупнозернистая, струйчатая; край и структуру колонии определяют с помощью лупы или на малом увеличении микроскопа, поместив чашку Петри с посевом на столик микроскопа крышкой вниз;
консистенция колонии — определяют прикасаясь к поверхности петлей, колония может быть плотной, мягкой, врастающей в агар , слизистой (тянется за петлей), хрупкой (легко ломается при соприкосновении с петлей).

Рост бактерий с равномерным помутнением среды , что характерно для факультативных анаэробов. Степень помутнения может быть слабая, умеренная, сильная.
Придонный рост бактерий характеризуется образованием осадка: скудного, обильного, рыхлого, слизистого, хлопьевидного, зернистого. Питательная среда может быть прозрачной или мутной.
Пристеночный рост — образование зерен, рыхлых хлопьев на внутренней поверхности стенок сосуда. Питательная среда при этом остается прозрачной.Поверхностный рост бактерий характеризуется появлением на поверхности среды пленки: тонкой, плотной, рыхлой, гладкой, складчатой, влажной, сухой, кольцеобразной, сплошной. Такой рост наблюдается при культивирован ии аэ робных бактерий.

Такие бактерии встречаются, главным образом, в речной или морской воде. К светящимся бактериям — фотобактериям — относятся аэробные бактерии (вибрионы, кокки, палочки).

Источник