Способы обездвиживания лягушки
Лягушка — традиционный объект биологических, в том числе физиологических, исследований, что связано с её доступностью, легкостью в содержании и холоднокровностью. Последнее особенно важно, так как позволяет не учитывать изменение температуры, при приготовлении из лягушки различных физиологических препаратов.
Международные правила защиты животных предусматривают эксперименты на них с учебной и исследовательской целью, категорически запрещая при этом всякую вивисекцию, т. е. операции на живых, не наркотизированных или на не обездвиженных и не обезболенных объектах. Все опыты на них проводят после наркотизации и последующего разрушения спинного мозга, в котором проходят проводящие болевые пути.
Применение наркоза (эфира, спирта, уретана). Для наркотизации лягушки применяется 10%-ный раствор спирта или 2%-ный раствор эфира. Лягушку опускают в раствор на 10-15 мин. Расслабление мускулатуры и отсутствие двигательной активности — хорошие показатели достаточного действия наркоза. Уретан вводится под кожу. Для наркотизации лягушки достаточно 1 мл 5%-ного раствора уретана, его действие наступает через 15-20 мин.
Для многих работ практикума по физиологии необходимо обездвижить лягушку. Сделать это можно одним из следующих способов. Разрушьте головной и спинной мозг лягушки двумя описанными ниже способами: сначала первым, а затем вторым (неважно, что мозг уже разрушен — важно научиться делать пере резки на нужном уровне и научиться вставлять иглу в спинномозговой канал).
Разрушение головного и спинного мозга. Возьмите лягушку в левую руку спиной вверх, так чтобы большой палец лежал на ее спине. Указательный палец положите на верхнюю челюсть лягушки и наклоните ее голову вниз. В таком положении хорошо видно место расположения затылочной ямки. Через ямку между затылочной костью и позвоночником введите препаровальную иглу на глубину 1—2 мм поверните ее вверх параллельно спинномозговому каналу и продвиньте до крестцово-копчикового соединения, круговыми движениями разрушая спинной мозг. Извлеките иглу из центрального канала и, повернув ее на 180 °, введите ее в полость черепа и разрушьте головной мозг.
Критерием разрушения является полная релаксация (расслабление) всех групп мышц лягушки и отсутствие защитных двигательных рефлексов на пощипывание кожи и потягивание за лапку. При этом способе обездвиживания лягушки теряется очень мало крови
Декапитация с последующим разрушением спинного мозга. Возьмите лягушку в левую руку, а правой введите как можно глубже нижнее лезвие ножниц в рот под заднюю часть верхней челюсти. Быстрым движением отрежьте верхнюю челюсть на уровне заднего конца барабанных перепонок (нижнюю челюсть сохраните). В отверстие спинномозгового канала введите препаровальную иглу и разрушьте спинной мозг.
Следует помнить, что физиологические работы связаны с использованием: электрических приборов с опасным для жизни напряжением, растворов кислот и щелочей способных вызвать травму при попадании на кожу, слизистые или внутрь, легковоспламеняющихся жидкостей, возгорание которых может привести к пожару. Все это требует неукоснительного соблюдения принятых в лаборатории правил техники безопасности.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАДАНИЯ
Классическим объектом исследования в физиологии возбуждения является нервно-мышечный препарат, на котором великие физиологи — Л. Гальвани, К. Маттеучи, И.М. Сеченов, Н.И. Введенский и др. открыли основные закономерности функционирования живого организма. Поэтому первое занятие по этой теме посвящается методике и технике его приготовления и истории изучения электрических процессов в живых тканях.
Источник
Способы обездвиживания лягушки
Для многих работ практикума по физиологии необходимо обездвижить лягушку. Сделать это можно одним из следующих способов. Разрушьте головной и спинной мозг лягушки двумя описанными ниже способами: сначала первым, а затем вторым (неважно, что мозг уже разрушен — важно научиться делать пере резки на нужном уровне и научиться вставлять иглу в спинномозговой канал).
Разрушение головного и спинного мозга. Возьмите лягушку в левую руку спиной вверх, так чтобы большой палец лежал на ее спине. Указательный палец положите на верхнюю челюсть лягушки и наклоните ее голову вниз. В таком положении хорошо видно место расположения затылочной ямки. Через ямку между затылочной костью и позвоночником введите препаровальную иглу в спинномозговой канал и разрушьте спинной мозг несколькими поворотами иглы. Затем иглу поверните в противоположном направлении, введите ее в полость черепа и разрушьте головной мозг. Общее расслабление мышц лягушки и отсутствие у нее рефлекторных реакций свидетельствуют о полном разрушении головного и спинного мозга. При этом способе обездвиживания лягушки теряется очень мало крови
Декапитация с последующим разрушением спинного мозга. Возьмите лягушку в левую руку, а правой введите как можно глубже нижнее лезвие ножниц в рот под заднюю часть верхней челюсти. Быстрым движением отрежьте верхнюю челюсть на уровне заднего конца барабанных перепонок (нижнюю челюсть сохраните). В отверстие спинномозгового канала введите препаровальную иглу и разрушьте спинной мозг.
Применение наркоза (эфира, спирта, уретана). Наркоз в учебном практикуме используется редко. Для наркотизации лягушки применяется 10%-ный раствор спирта или 2%-ный раствор эфира. Лягушку опускают в раствор на 10-15 мин. Расслабление мускулатуры и отсутствие двигательной активности — хорошие показатели достаточного действия наркоза. Уретан вводится под кожу. Для наркотизации лягушки достаточно 1 мл 5%-ного раствора уретана, его действие наступает через 15-20 мин.
Следует помнить, что физиологические работы связаны с использованием: электрических приборов с опасным для жизни напряжением, растворов кислот и щелочей способных вызвать травму при попадании на кожу, слизистые или внутрь, легковоспламеняющихся жидкостей, возгорание которых может привести к пожару. Все это требует неукоснительного соблюдения принятых в лаборатории правил техники безопасности
Классические экспериментальные работы по физиологии возбуждения проводятся на нервно-мышечном препарате лягушки, поэтому первое занятие по этой теме посвящается методике и технике его приготовления.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3. Приготовление нервно-мышечного препарата лягушки
Прежде чем приступить к этой работе, необходимо обездвижить лягушку. Нервно-мышечный препарат состоит из икроножной мышцы, бедренной косточки и седалищного нерва с кусочком позвоночника.
Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы : лягушка, набор инструментов для препарирования, раствор Рингера, вата.
М е т о д и к а в ы п о л н е н и я р а б о т ы..
Разрушьте головной и спинной мозг лягушки. Возьмите левой рукой лягушку за бедра, перережьте позвоночник на 1 — 1,5 см выше места прикрепления тазовых костей. Свисающую переднюю часть туловища и внутренности удалите. Держа остаток позвоночника левой рукой, захватите кожу и снимите ее с лапок. Лапки залейте раствором Рингера. Осторожно вырежьте копчиковую кость и разделите его на две половины. Для этого перережьте вдоль сначала кусочек позвоночника, а затем — лобковое сочленение. Другую лапку положите на спинную сторону и отделите ножницами подвздошную кость. Захватив пинцетом кусочек позвоночника, отведите в сторону нерв и удалите подвздошную кость. При помощи двух пинцетов раздвиньте мышцы на спинной стороне поверхности бедра по средней линии .Осторожно, не касаясь пинцетом и ножницами нерва, отделите его от окружающих тканей вдоль всего бедра. Нерв отведите в сторону и удалите все мышцы с бедренной кости. На голени отделите от кости икроножную мышцу, подрезав ахиллово сухожилие, и привяжите к нему нитку. Голень и лапку отрежьте ниже колена. Препарат положите в раствор Рингера. Для закрепления навыков в приготовлении препарата можно его приготовить и из другой лапки, оставленной в качестве запасной.
Для лучшей сохранности препарата желательно 1 — 2 раза менять раствор Рингера как на тарелочке, где идет его приготовление, так и в стаканчике с запасной лапкой.
Запишите и зарисуйте в тетради основные этапы приготовления нервно-мышечного препарата.
Укажите физиологическое значение каждой части нервно-мышечного препарата.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 4. Наблюдение биоэлектрических явлений
Впервые биоэлектрические явления в живых тканях наблюдал итальянский физиолог Луиджи Гальвани.
Луиджи Гальвани в 1786 г. при изучении влияния атмосферного электричества на живой организм размещал на железной решетке балкона задние лапки лягушки, закрепленные на медных крючках. При соприкосновении лапок с железной решеткой балкона наблюдалось сокращение мышц. На основании этих наблюдений Гальвани высказал мысль о существовании «животного электричества». Но Вольта доказал, что в этом опыте причиной сокращения лапок лягушки был ток, возникающий между двумя разными металлами.
В настоящее время опыт, в котором сокращение мышцы возникает при прикосновении к ней или к иннервирующему ее нерву пинцетом, состоящим из двух разнородных металлов, получил название первого опыта Гальвани.
Второй опыт Гальвани проделал в 1794 г. без металлов. Приподнимая нерв нервно-мышечного препарата стеклянным крючком, он набрасывал его на поврежденный участок мышцы и наблюдал ее сокращение. Так было доказано наличие «животного электричества» — тока покоя. Позднее Матеуччи представил другие доказательства наличия биопотенциалов в эксперименте, получившем название опыта вторичного сокращения или опыта Матеуччи.
Более изящным вариантом опыта Матеуччи является опыт Келликера с набрасыванием нерва на работающее сердце..
Проделайте опыты Гальвани и Матеуччи и Келликера.
Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы : стимулятор, электроды, лягушка, набор инструментов для препарирования, стеклянный крючок.
М е т о д и к а в ы п о л н е н и я р а б о т ы.
Первый опыт Гальвани.
Приготовьте креоскопический препарат, состоящий из нижней части позвоночника и соединенных с ней лапок. Рассмотрите нервные корешки, идущие с двух сторон вдоль копчика и образующие на бедре седалищный нерв. Подведите под оба пучка нервов одну браншу гальванического пинцета, а другой браншей прикасайтесь к нервам сверху. Наблюдайте сокращение лапок.
Объясните причину возникновения сокращения.
Второй опыт Гальвани.
Приготовьте новый нервно-мышечный препарат. Слегка поранив мышцу около ахиллова сухожилия, с помощью стеклянного крючка быстро набросьте нерв препарата на пораненный участок мышцы, наблюдайте ее сокращение.
Объясните причину возникновения сокращения.
Источник
Способы обездвиживания лягушки
В проведении практикума по физиологии необходимо обездвижить лягушку либо путем разрушения головного и спинного мозга, либо путем наркотизации. Разрушение головного и спинного мозга лягушки можно проводить следующими способами:
Разрушение головного и спинного мозга (рис.2). Возьмите лягушку в левую руку спиной вверх, так чтобы большой палец лежал на ее спине. Указательный палец положите на верхнюю челюсть лягушки и наклоните ее голову вниз. В таком положении хорошо видно место расположения затылочной ямки. Через ямку между затылочной костью введите иглу в полость черепа и разрушьте головной мозг. Затем поверните иглу в противоположном направлении позвоночником и введите в спинномозговой канал, разрушая спинной мозг несколькими поворотами иглы. Общее расслабление мышц лягушки и отсутствие у нее рефлекторных реакций свидетельствуют о полном разрушении головного и спинного мозга. При этом способе обездвиживания лягушки теряется очень мало крови.
Рис. 2. Схема разрушения головного и спинного мозга
Декапитация с последующим разрушением спинного мозга. Возьмите лягушку в левую руку, а правой введите как можно глубже нижнее лезвие ножниц в рот под заднюю часть верхней челюсти за глаза. Быстрым движением отрежьте верхнюю челюсть на уровне заднего конца барабанных перепонок (нижнюю челюсть сохраните). В отверстие спинномозгового канала введите препаровальную иглу и разрушьте спинной мозг.
Применение наркоза (эфира, спирта, уретана). Наркоз в учебном практикуме используется редко. Для наркотизации лягушки применяется 10%-ный раствор спирта или 2%-ный раствор эфира. Лягушку опускают в раствор на 10-15мин. Расслабление мускулатуры и отсутствие двигательной активности – хорошие показатели достаточного действия наркоза.
Фиксация лягушки
В целом ряде работ используется спинальный препарат лягушки — лягушка, у которой разрушен головной и сохранен спинной мозг. При препарировании соответствующих нервов и мышц и проведении исследований спинальную лягушку необходимо закрепить на пластинке неподвижно. Лучше всего фиксировать ее на пробковой (или парафиновой) пластинке размером 20×10 см.
Фиксируя лягушку на пластинке, важно хорошо натянуть ее конечности, чтобы они были неподвижными и не мешали записи ответных реакций. Булавки необходимо вкалывать в направлении, противоположном движению конечности: иначе лапки скользят по булавке, и фиксация не обеспечивается.
Дата добавления: 2015-10-24 ; просмотров: 570 | Нарушение авторских прав
Источник
Инструменты для препарирования
Для выполнения работ, приведенных в практикуме, можно обойтись следующим набором инструментов (рис. 1):
Ножницы большие с прямыми концами, один из которых острый (1).
Ножницы маленькие (глазные) для тонкого препарирования, необходимые при выполнении большинства работ по физиологии нервной системы и физиологии кровообращения (2).
Пинцеты: анатомический (6), глазной (5).
Препаровальная игла (4).
Рис. 1. Инструменты для препарирования (пояснения в тексте)
Булавки (главным образом, для прикрепления лягушки к пластинке). Их должно быть не менее четырех, и лучше не рассыпать их в коробочке, а давать закрепленными в бумажной подложке (8).
Скальпель (3) выдается только для некоторых работ, например для вскрытия глаза, для операции к опыту «сеченовского торможения».
Нож для зачистки контактов, электродов, проводов и др.
Лигатура или нитки (9) (для удобства наматываются на резиновую трубочку).
Гальванический пинцет (7) Пинцет изготовлен из хирургического пинцета с напайками из пластин Cu и Zn на браншах.
Различные зажимы и канюли (выдаются при выполнении соответствующих работ и в постоянный набор инструментов не включаются).
Способы обездвиживания лягушки
В проведении практикума по физиологии необходимо обездвижить лягушку либо путем разрушения головного и спинного мозга, либо путем наркотизации. Разрушение головного и спинного мозга лягушки можно проводить следующими способами:
Разрушение головного и спинного мозга (рис.2). Возьмите лягушку в левую руку спиной вверх, так чтобы большой палец лежал на ее спине. Указательный палец положите на верхнюю челюсть лягушки и наклоните ее голову вниз. В таком положении хорошо видно место расположения затылочной ямки. Через ямку между затылочной костью введите иглу в полость черепа и разрушьте головной мозг. Затем поверните иглу в противоположном направлении позвоночником и введите в спинномозговой канал, разрушая спинной мозг несколькими поворотами иглы. Общее расслабление мышц лягушки и отсутствие у нее рефлекторных реакций свидетельствуют о полном разрушении головного и спинного мозга. При этом способе обездвиживания лягушки теряется очень мало крови.
Рис. 2. Схема разрушения головного и спинного мозга
Декапитация с последующим разрушением спинного мозга. Возьмите лягушку в левую руку, а правой введите как можно глубже нижнее лезвие ножниц в рот под заднюю часть верхней челюсти за глаза. Быстрым движением отрежьте верхнюю челюсть на уровне заднего конца барабанных перепонок (нижнюю челюсть сохраните). В отверстие спинномозгового канала введите препаровальную иглу и разрушьте спинной мозг.
Применение наркоза (эфира, спирта, уретана). Наркоз в учебном практикуме используется редко. Для наркотизации лягушки применяется 10%-ный раствор спирта или 2%-ный раствор эфира. Лягушку опускают в раствор на 10-15мин. Расслабление мускулатуры и отсутствие двигательной активности – хорошие показатели достаточного действия наркоза.
Фиксация лягушки
В целом ряде работ используется спинальный препарат лягушки — лягушка, у которой разрушен головной и сохранен спинной мозг. При препарировании соответствующих нервов и мышц и проведении исследований спинальную лягушку необходимо закрепить на пластинке неподвижно. Лучше всего фиксировать ее на пробковой (или парафиновой) пластинке размером 20×10 см.
Фиксируя лягушку на пластинке, важно хорошо натянуть ее конечности, чтобы они были неподвижными и не мешали записи ответных реакций. Булавки необходимо вкалывать в направлении, противоположном движению конечности: иначе лапки скользят по булавке, и фиксация не обеспечивается.
Источник
