Размывание хроматографических зон
Установлено, что размывание полосы на хроматограмме (рис. 3) обусловлено тремя основными причинами:
Рис. 3 Размывание хроматографической полосы (три момента времени)
Вихревая диффузия является следствием беспорядочного изменения линейной скорости около среднего значения. Одни молекулы движутся быстрее, передвигаясь по свободным каналам между частицами наполнителя, другие — медленнее, проникая в замкнутые каналы.
Различают пять факторов, обучловливающих вихревую диффузию (по Гиддингсу):
1. канальный эффект (наибольшая скорость по оси каналов, наименьшая вдоль стенок каналов);
2. «межчастичный» эффекь;
3. эффект смежных каналов;
4. эффект отдаленных каналов;
5. колоночный эффект.
Вклад в ВЭТТ за счет разности в скоростях перемещения молекул по колонке (Hp) будет составлять
 , | (1.4) |
где dp — диаметр частиц наполнителя (зерен носителя); l — константа (примерно равная 1), величина которой зависит от равномерности набивки колонки.
Молекулярная диффузия (продольная диффузия) дает следующий вклад в ВЭТТ (Hd):
 , | (1.5) |
где t — поправка на извилистость, учитывает ограничение диффузии наполнителем колонки; Dm — коэффициент диффузии анализируемого вещества в подвижной фазе; v — линейная скорость потока.
Таким образом, вклад в ВЭТТ за счет продольной диффузии возрастает с увеличением времени пребывания анализируемого вещества в колонке.
Массопередача и кинетика сорбции-десорбции:молекула постоянно переходит из подвижной фазы в неподвижную и обратно. Если молекула сорбируется, то она отстает от центра хроматографической полосы, движущегося по колонке. При десорбции молекула переходит в подвижную фазу и продвигается по колонке быстрее, цем центр полосы. Беспорядочное движение приводит к размыванию полосы.
Скорость массопередачи зависит от явлений, происходящих как в неподвижной, так и в подвижной фазах.
Вклад в ВЭТТ процессов, происходящих в неподвижной фазе (Hs) равен
 , | (1.6) |
где q — пространственный фактор, зависящий от формы резервуара с неподвижной фазой; r — константа, зависящая от относительной скорости перемещения анализируемого вещества и подвижной фазы; d — толщина слоя неподвижной фазы; Ds — коэффициент диффузии анализируемого вещества в неподвижной фазе; v — линейная скорость потока.
Вклад в ВЭТТ процессов, происходящих в подвижной фазе (Hm) равен
 , | (1.7) |
где w — коэффициент колонки, зависящий от структуры наполнителя, диаметра колонки и ее формы; dp — диаметр частиц; Dm — коэффициент диффузии в подвижной фазе; v — линейная скорость потока.
Таким образом, полное значение ВЭТТ равно
 , | (1.8) |
 ., | (1.9) |
Полученная зависимость ВЭТТ от скорости элюции представлена на рис. 4.
Из полученной зависимости ВЭТТ от v (рис. 4) видно, что кривая имеет минимум, соответствующий оптимальной скорости элюции, при которой обеспечивается наименьшее размытие хроматографической полосы, т. е. максимальная эффективность процесса хроматографии при прочих равных условиях.
Рис. 4. Зависимость высоты, эквивалентной теоретической тарелке, от линейной скорости потока в газовой (а) и жидкостной (б) хроматографии
Источник
Основные Параметры Хроматографических Пиков
21.01.2021
Ключевую для хроматографии информацию получают при анализе пиков на полученной диаграмме. Хроматограммы бывают двух видов: полученные при планарной хроматографии или при жидкостной. Во втором случае, как правило, анализ проводится специальным детектором, анализирующем проходящую через колонку смесь.
Что такое хроматографический пик
Хроматографический пик представляет собой резкое возрастание концентрации вещества с последующим уменьшением до базовой линии. Происходит это в момент прохождения вещества через детектор. Пики тем четче, чем больше разделительная способность системы и чем сильнее различаются свойства компонентов смеси, и в теории представляют собой гауссовские кривые.
Различные вещества имеют различные пики ввиду индивидуальных свойств. Вследствие неоднородной реакции с подвижной фазой время прохождения через колонку компонентов разнится. Каждый пик на диаграмме отражает отдельное вещество или группу веществ, прошедших колонку за определенное время.
Время прохождения вещества зависит от его сродства к подвижной и неподвижной фазе. Само же сродство определяется протекающими между веществом и фазами реакциями, размером компонента смеси, температурой и скоростью элюента. Поэтому, для каждой системы абсолютное время прохождения веществ разное, и зависит от каждого параметра анализа.
После установки основных характеристик пиков — время удерживания, высота и площадь пика – переходят к их соотношению. Отношение площадей пиков равно отношению количеств веществ компонентов смеси.
Высота пика в случае с гауссовскими кривыми также может отражать относительное содержание вещества в пробе. Это применимо для неперекрывающихся симметричных пиками. В противном случае расчеты, основанные на высоте пика, ведут к ошибкам.
Ширина пика показывает эффективность хроматографической системы, ведь чем больше ширина пика, тем хуже полученные данные о его площади. Чем меньше в смеси примесей и чем больше степень разложения на компоненты, тем эффективнее анализ. Ширина также увеличивается в процессе анализа. При постоянной температуре это происходит линейно.
На практике полученные диаграммы содержат отклонения от теоретических расчетов. Причина этому реакция среды, наличие примесей, изменение температуры во время анализа, схожие свойства самих веществ. Пики могут накладываться друг на друга, быть ассиметричной формы. Чем дольше идёт анализ, тем шире они становятся. Расчеты, основывающиеся на высоте асимметричных пиков, ведут к ошибкам, ведь они больше не отражают реальной концентрации.
Пики отделяются от шумов, которые возникают при детальном рассмотрении базовой линии. Как и любое другое электрическое устройство, хроматограф имеет отклонения показаний в одну и другую сторону. Чем меньше выбранный промежуток времени, тем менее заметны сами шумы.
Автоматическая и ручная разметка пиков
Ввиду того, что теоретически число пиков неограниченно, необходимо отделять пики от шумов. Делать это можно как вручную, так и при помощи специальных программ. Автоматизация уместна в случае с большим количеством сходных хроматограмм. При этом для каждой серии анализов требуется индивидуальная настройка.
В первую очередь подавляются шумы. Происходит это при помощи введения порогового значения для высоты и площади пиков. Так, зная степень разделения смеси средой, вводят минимальную высоту. А на основании данных об ориентировочном содержании веществ вводится минимальная площадь.
После назначения порогов назначается эталонная ширина пика. От этого параметра зависит, какая часть пика будет интегрироваться. Пики с меньшей шириной также автоматически отсеиваются. Этот процесс облегчает дальнейший анализ и упрощает полученные данные.
Подбор этих значений должен производиться с расчетом на то, что со временем анализа пики расширяются. Имеет смысл деление хроматограммы на участки с индивидуальными параметрами разметки. Подбор специальных значений для порогов и ширины пиков повышает качество полученных данных.
К ручной разметке прибегают в случаях, когда автоматизация не предоставляет искомой точности. Исследователь собственноручно выделяет необходимые пики, однако последующий подсчет площади под ними производится автоматически. Идентифицировать вещества по их пикам же все равно приходится вручную.
Как идентифицировать пики
После выделения пиков производится идентификация, соотношение сигналов с веществами, которые их дали. Достичь качественного результата позволяет сравнение со стандартным образцом. Однако доказать наличие конкретного вещества сложнее, чем доказать его отсутствие. Ведь если пик на характерной для определенного вещества отметке отсутствует, то это однозначно говорит об отсутствии самого вещества, а его наличие может свидетельствовать о смеси других веществ с аналогичными свойствами.
Зафиксировав четыре абсолютных значения, производят анализ как на непосредственно полученных данных, так и на относительных величинах. Минусом абсолютных значений является высокая чувствительность к колебаниям таких параметров как температура и скорость подвижной фазы, что приводит к неточностям и необходимости многократных анализов.
Простейшим методом идентификации является соотношение времени удерживания вещества в пробе и в стандарте. Сопоставив полученные и библиотечные времена удерживания, делают вывод о наличии или отсутствии искомых веществ. Для подтверждения точности полученных данных результаты должны быть повторяемы.
Для получения более точных результатов прибегают к измерению относительного объема удерживания. Здесь учитывается время прохождения колонки подвижной фазы. Объем удерживания, в отличие от времени удерживания, не зависит от скорости потока, что и делает этот параметр универсальной характеристикой. Иногда прибегают к комбинированию детекторов. Сравнив пики на нескольких хроматограммах, делают вывод о свойствах вещества. Наличие пиков на одних и отсутствие на других детекторах помогает идентифицировать вещество.
Заключение
Несмотря на то, что зачастую пики не соответствуют гауссовским кривым, идентификация возможна и в сложнейших случаях. Современные библиотеки располагают количеством информации, которое позволяет точно определять искомые вещества даже в смеси со схожими свойствами компонентов.
Автоматизированная разметка пиков и их интегрирование снимает с работающего за хроматографом нагрузку, облегчая аналитическую задачу и повышая эффективность процесса. Заглушая шумы и считая площади пиков, программное обеспечение снижает общее время анализа.
Проведенный анализ позволяет дать количественную характеристику изучаемой смеси, обнаружить в ней искомые вещества, что делает хроматографию востребованной во многих сферах.
ГХ или ВЭЖХ? Что выбрать?
При появлении новой аналитической задачи…
16.11.2021
Хроматография. Простыми словами.
О хроматографии написано много. Мы…
10.11.2021
Как проводится хроматография
Хроматографический анализ представляет собой один…
18.03.2021
Абсорбционная спектрометрия уже больше века…
18.03.2021
Основные Параметры Хроматографических Пиков
Ключевую для хроматографии информацию получают…
21.01.2021
Результатом хроматографии является хроматограмма, дающая…
21.01.2021
Распространённые причины поломки хроматографов
Использование любых сложных видов оборудования…
02.10.2020
Как Хроматография Применяется в Парфюмерии?
Методику хроматографии активно используют в…
02.10.2020
Хроматография: история открытия и развития
Хроматография сегодня активно используется в…
06.09.2020
Как правильно выбрать хроматограф?
Хроматография – метод анализа жидкостных…
05.09.2020
Работа любого сложного устройства сопровождается…
28.07.2020
Сегодня хроматография остается самым используемым…
28.07.2020
Предшественником всех современных спектрометров считается…
06.07.2020
Разделение сложных смесей на единичные…
06.07.2020
Хроматографические методы в криминалистике
Криминалистические экспертизы играют важную роль…
06.07.2020
Хроматография в фармацевтической промышленности
В настоящее время можно выделить…
27.05.2020
Принципы работы спектрометра
Спектрометр – прибор, работающий на…
08.05.2020
Хромато-масс-спектрометры: принцип действия
Командой Хроматограф.ру в Печорской центральной…
08.05.2020
Порядок технического обслуживания оборудования производства «НПО СПЕКТРОН»
При поставке приборы снабжаются всем…
17.04.2020
Хроматография в контроле качества продовольственного сырья и пищевых продуктов
Безопасность и качество продуктов питания…
17.04.2020
Телемедицина для хроматографов
Что такое телемедицина? Это консультация…
15.04.2020
Основные производители хроматографов в мире, в России
Хроматографы используются в аналитических исследованиях,…
02.12.2019
Области применения газовых и жидкостных хроматографов
Хроматография – способ разделения многокомпонентных…
02.12.2019
Хроматографические Методы Анализа
Хроматографические методы анализа базируются на…
02.12.2019
Хроматограф — принцип действия, виды хроматографов
Одним из самых популярных методов…
23.02.2019
Обучение с выдачей удостоверения
С июня 2017 года наши…
28.11.2018
Скидка на Хромато-масс-спектрометр с МСД Хроматэк 12% до 31 октября 2017 года
Руководством предприятия принято решение предоставить…
28.11.2018
Источник
