Эксфолиативная цитология и ее биосубстраты. Пункционная цитология
Главная > Документ
| Информация о документе | |
| Дата добавления: | |
| Размер: | |
| Доступные форматы для скачивания: |
Тема занятия: Эксфолиативная цитология и ее биосубстраты. Пункционная цитология.
Метод эксфолиативной цитологии или цитологии «слущивания», биологический материал, получаемый этим методом. Применение метода и способы получения материала в гинекологии, урологии, пульмонологии, гастроэнтерологии, дерматологии. Техника приготовления мазков.
Метод пункционной (тонкоигловой) аспирационной биопсии. Область применения. Инструментарий. Пункция инфильтрата, опухоли, приготовление мазка. Пункция кистозной полости, этапы приготовление мазка.
Эксфолиативная цитология — (exfoliative cytology) – метод диагностирования патологических изменений клеток, например, при раке. Для этого клетки срезаются или соскребаются с поверхности тела. Ранняя клиническая цитология представлена также преимущественно эксфолиативной цитологией: исследование жидкостей — экссудаты, промывные воды; выделений — мокрота, моча Цитологический метод технически прост, быстр, сравнительно дешев, малотравматичен. Эксфолиативная цитология включает в себя исследование вагинальных мазков, мокроты. Эксфолиативная цитология основана на физиологическом «слущивании» клеток со слизистой оболочки (folium — лист, ех — отпадать).
Цель занятия: Изучение основных принципов эксфолиативной цитологии и пункционной (тонкоигловой) аспирационной биопсии, способов получения клеточного материала этими методами.
— основы получения материала при цитологии «слущивания»;
— характеристику получения биоматериала методом пункционной (тонкоигловой) аспирационной биопсии;
— применение данных методов в разных сферах медицины.
— оценить правильность получения материала для эксфолиативной цитологии;
— характеризовать методы пункционной биопсии, технику приготовления мазка.
Эксфолиативная цитология это также исследование материала, полученного при гинекологическом осмотре. Сюда относят профилактические осмотры (онкоцитология), т.е. микроскопическое исследование на атипические клетки и полный анализ с исследованием патогенной флоры и диагностические исследования: — соскобы с шейки матки и цервикального канала; аспираты из полости матки, транссудаты, экссудаты, секреты и экскреты; соскобы и отделяемое с поверхности эрозий язв, ран, свищей; исследование мокроты; цитологические исследования при эндоскопических обследованиях; цитологическое исследование материала, полученного во время проведения операций.
Методы получения клеток для исследования различны. При эксфолиативном методе изучают клетки, полученные в результате естественного отслаивания в нормальных жидкостях организма (например, кровь) или в патологически отделяемом (например, мокрота) либо искусственного их отделения путём смывания, механического слущивания. В других случаях материал получают при пункции через тонкую иглу (пункционный метод). Внедрение в клиническую практику эндоскопии обусловило распространение биопсионной цитологической диагностики , при которой материал для исследования берут путём биопсии. Для цитологического исследования препараты готовят на предметных стеклах. В зависимости от целей исследования применяют микроскопию нативных или фиксированных и окрашенных с помощью стандартных методов окраски препаратов, фазово-контрастную, ультрафиолетовую и флуоресцентную (с использованием флуорохромов для окраски препаратов) микроскопию. Практическое применение получили специфические цитохимические методы. В научных исследованиях используют также специальные методы — авторадиографию, иммуноцитохимию, цитоспектрофото- и цитофлуориметрию, электронную микроскопию, метод тканевой культуры.
Эксфолиативная цитология основана на общем свойстве эпителиальных, особенно опухолевых, клеток постоянно отторгаться с поверхности ткани. Но опухолевая ткань часто покрыта некротическим налетом, фибринозными наслоениями или слизью, что тормозит выделение отторгнувшихся клеток и затрудняет их поиск. Цитологическое исследование считается полноценным, если материал получен в достаточном количестве. Однако при ранних формах рака взятие полноценного материала без вспомогательных приборов и методик не всегда возможно. По этим причинам поиск и изучение новых методик остаются актуальными.
Рисунок 1 — Влагалищный мазок.
Плоскоклеточный ороговевающий рак шейки матки.
Окраска по Папенгейму, 400
Получение материала в гинекологии
Подготовка пациентки и взятие биологического материала
В течение 24 часов перед исследованием не следует проводить спринцевание, а так же необходимо исключить применение интравагинальной терапии. Нельзя брать материал во время менструации. Для цитологических исследований взятие материала проводит врач-гинеколог.
Для получения материала для исследования используют специальные гинекологические инструменты, которые должны быть стерильными и сухими.
Влагалищная часть шейки матки, наружный зев, цервикальный канал
Для получения оптимальных результатов необходимо отдельно собирать эктоцервикальные и эндоцервикальные образцы. Взятие материала осуществляется до бимануального исследования. Шейку матки при помощи зеркал тщательно осматривают, затем без предварительной обработки слегка соскабливают поверхность патологически измененного участка или всей влагалищной части шейки вокруг наружного зева. Из полученного соскоба делают один тонкий равномерный мазок во всю длину предметного стекла.
При взятии материала шпателем Эйра возможно получить материал одновременно с поверхности шейки матки, из зева и нижней трети цервикального канала. Шпатель Эйра имеет на одном конце неравные тупые кончики. Один, более длинный и узкий, вставляется в наружный зев цервикального канала, другой, более низкий и широкий, прилегает к поверхности шейки матки. Вращательными движениями при легком надавливании получают соскоб. Далее, этим же шпателем с полученным материалом делают тонкие мазки, получая на одном стекле сразу две полоски: в одной материал из нижней трети цервикального канала и наружного зева, в другой – с поверхности шейки матки. Далее мазки должны быть зафиксированы посредством высушивания на воздухе.
Специальная конструкция для взятия эндоцервикальных мазков, скринет является обязательным дополнением к шпателю Эйра при проведении скрининга рака шейки матки. Скринет позволяет получить богатый клетками, хорошо сохраняющийся материал, что гарантирует улучшение качества получаемых мазков и показателей скрининга онкологической патологии. Будучи доступным в двух размерах, скринет может быть легко введен в любой цервикальный канал, в частности женщин постменопаузного периода. Скринет обеспечивает абсолютно безвредный доступ к зоне перехода эпителия влагалища в призматический эпителий цервикального канала, что особенно важно при ее высоком расположении.
Для взятия биологического материала скринет плавно вводится в цервикальный канал. Далее, для получения мазка необходимо сделать только одно вращение (слишком большое количество оборотов может отрицательно сказаться на целостности клеток). После взятия биологического материала скринет, без совершения дополнительных вращательных движений, плавно выводится из шейки матки. Взятый биологический материал наносится на чистое обезжиренное стекло одним вращательным движением (по анологии с получением материала) и затем высушивается на воздухе.
При взятии биологического материала с помощью спиретте возможно проведение экто- и эндоцервикальной аспирации. После введения инструмента в шейку матки его дистальный конец подводится к месту, откуда необходимо взять образец ткани (эндо- или эктоцервикс). Аспирационный эффект достигается передвижением внутреннего поршня. После взятия образца биологического материала спиретте извлекается из шейки матки. Затем обратным движением поршня полученный образец биологического материала наносится на предметное стекло и фиксируется, высушиванием на воздухе.
Кроме того, слущенные клетки можно получить с помощью мазков отпечатков со слизистой оболочки влагалища и шейки матки. В этом случае мазки готовят из соскобов шпателем, содержимое которых наносятся на предметное стекло в виде отпечатков.
Материал отдельно из цервикального канала можно получить при помощи гинекологического пинцета, желобоватого зонда, ложечки Фолькмана и др. или путем аспирации содержимого цервикального канала. Взятие материала из цервикального канала проводят только после удаления цервикальной слизистой пробки. Исследуемый материал, нанесенный на сухое, обезжиренное предметное стекло должен быть обязательно высушен на воздухе. Подсушенное стекло (мазок) маркируется.
К каждому стеклу должен прилагаться бланк-направление на цитологическое исследование, номер которого должен соответствовать номеру (маркировке) мазка. В бланке указывается: учреждение, проводившее взятие биологического материала и дата его взятия; фамилия, имя, отчество обследуемой женщины; ее возраст, дата последней менструации, место взятия биологического материала, клинический диагноз; при отсутствии патологии необходимо указать, что шейка матки без изменений.
Взятие образцов проводится путем аспирации содержимого заднего свода или соскоба со слизистой оболочки. Аспирация содержимого из заднего свода должна проводиться под визуальным контролем при исследовании зеркалами, при этом необходимо использовать несмазанные зеркала и получать материал до пальцевого исследования. При осмотре с использованием влагалищных зеркал вводят свободный конец канюли до заднего свода, содержимое насасывают в канюлю резиновой грушей, аспират выдувают на сухое обезжиренное предметное стекло и делают тонкий мазок краем шлифованного стекла.
Содержимое заднего свода представляет собой случайно накопленный пул из разных отделов генитального тракта, поэтому его исследование целесообразно проводить только как ориентировочное. При патологических находках необходимо тщательное исследование материала из отдельных мест.
Материал из заднего свода может быть использован также для оценки микробиоценоза влагалища. Образцы материала из влагалища берут до манипуляций в шейке. Соскабливание проводится сверху вниз в передней, задней и боковых стенках влагалища.
При наличии опухоли в стенке влагалища производят пункцию тонкой иглой.
Используемый инструмент – эндобраш. Перед взятием мазков эндометрия необходимо исключить возможность наличия беременности, вагинита или цервицита. Все манипуляции на эндометрии могут проводиться только при условии полного излечения инфекций слизистой влагалища и шейки матки.
При обследовании ряда женщин менопаузного периода, использование эндобраш может оказаться неоправданным, ввиду наличия стенотических изменений цервикального канала.
После наложения зеркал и обработки шейки матки антисептическим раствором мандрен эндобраш вытягивается так, чтобы его щетка полностью исчезла внутри внешней части инструмента, а его колпачок, расположенный на дистальном конце закрыл дистальную часть внешнего контура эндобраш. Затем, инструмент плавно вводится в полость матки до тех пор, пока дистальный колпачок не достигнет дна матки (нанесенные на инструменте метки помогают определить размеры полости матки). Перед началом взятия мазков наружная часть инструмента смещается вниз, освобождая находящуюся внутри щетку. Далее делается одно или два вращательных движения мандреном вправо или влево для получения соскобов со стенок матки. После этого, наружная часть инструмента смещается в исходное положение для сохранения полученного биологического материала и эндобраш полностью извлекается из полости матки. Полученный материал наносится на предметное стекло и фиксируется на воздухе.
С вульвы материал берут при подозрении на рак. Область поражения тщательно обрабатывают изотоническим раствором хлорида натрия или слабым дезинфицирующим раствором для удаления элементов воспаления и некротических масс. Промокают салфеткой и делают соскоб шпателем или каким-либо другим инструментом с несколько заостренными краями.
Получение материала в урологии
Для цитологического исследования чаще всего используют осадок мочи, собранной за сутки. Полученный материал помещают тонким слоем на предметное стекло. Мазок фиксируют смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому. При микроскопии препаратов возможно обнаружение клеточных элементов из почки, мочевого пузыря или предстательной железы с признаками бластоматозных изменений.
При опухолях мочевого пузыря более точные данные получают при исследовании материала, полученного путем аспирации из полости мочевого пузыря. Аспирацию производят путем плавного отсасывания мочи сухим шприцем по катетеру из опорожненного мочевого пузыря. Полученный материал помещают в пробирку на 2 ч, после чего из осадка готовят препарат по описанной выше методике.
Материал для цитологического исследования можно получить и путем аспирации из опухоли мочевого пузыря. Для этого через катетеризационный цистоскоп вплотную к опухоли подводят кончик мочеточникового катетера и производят аспирацию с помощью шприца, постепенно удаляя катетер. Присосавшиеся к кончику катетера отторгшиеся кусочки опухолевой ткани подвергают исследованию.
Для диагностики опухолей предстательной железы может быть использовано цитологическое исследование ее секрета, полученного путем массажа железы. Однако большую ценность имеет исследование пунктата из нескольких участков ткани предстательной железы.
Получение материала в пульмонологии
Сбор мокроты желательно осуществлять утром (так как она накапливается ночью) и до еды. Анализ мокроты будет достоверней, если пациент предварительно почистил зубы щёткой и прополоскал рот кипячёной водой, что позволяет уменьшить бактериальную обсеменённость полости рта.
Анализ мокроты следует проводить подготовленному и обученному пациенту:
мокрота лучше отходит и её образуется больше, если накануне исследования пациент употреблял больше жидкости;
сбор мокроты проходит эффективней, если пациент предварительно выполняет три глубоких вдоха с последующим энергичным откашливанием. Необходимо подчеркнуть, что важно получить именно мокроту, а не слюну.
Сбор мокроты выполняют в стерильный разовый герметичный флакон (контейнер) из ударостойкого материала с навинчивающимся колпачком или плотно закрывающейся крышкой. Флакон должен иметь ёмкость 20-50 мл и широкое отверстие (не менее 35 мм в диаметре), чтобы пациент мог легко сплёвывать мокроту внутрь флакона. Для возможности оценки количества и качества собранной пробы флакон должен быть изготовлен из прозрачного материала.
Если сбор мокроты проходит в присутствии медицинского работника, то последнему необходимо надеть перчатки (взятие материала и его отправку следует осуществлять в перчатках). Учитывая, что при энергичном кашле мокрота в виде капель может разбрызгиваться, с профилактической целью следует надеть маску, а при необходимости закрыть глаза очками или сразу всё лицо защитным щитком. Лучше вообще находиться за спиной пациента, выбирая свое положение таким образом, чтобы направление движения воздуха было от медработника к пациенту.
Для провокации кашля, а также, если мокрота отделяется плохо, пациенту проводят в течение 10-15 минут ингаляцию 30-60 мл подогретого до 42-45 градусов Цельсия раствора (в 1 л стерильной дистиллированной воды растворяют 150 г хлорида натрия и 10 г бикарбоната натрия). Вдыхаемый во время ингаляции солевой раствор вначале вызывает усиленное образование слюны, потом появляется кашель и отделяется мокрота. Поэтому прежде, чем осуществлять сбор мокроты, пациент должен сплюнуть слюну в специально приготовленную плевательницу с дезраствором. У большинства пациентов после подобной ингаляции ещё в течение нескольких часов наблюдается остаточная гиперсекреция бронхиального содержимого.
Для исследования достаточно 3-5 мл мокроты, но анализ можно проводить и при меньших объёмов. Анализ мокроты необходимо проводить не позднее, чем через 2 часа после сбора.
Если собранная мокрота подлежит транспортировке в другое учреждение, то до момента отправки в лабораторию герметично закрытые флаконы с материалом хранятся в холодильнике не более 2-3 суток. При более длительном хранении необходимо применить консервирующие средства. Во время транспортировки мокрота должна быть защищена от воздействия прямых солнечных лучей и тепла.
Факторы, влияющие на результат исследования
Неправильный сбор мокроты.
Мокрота несвоевременно отправлена в лабораторию. В несвежей мокроте размножается сапрофитная флора, разрушаются форменные элементы.
Анализ мокроты проведён уже после назначения антибактериальных, противогельминтных средств.
Получение материала в гастроэнтерологии.
Наиболее распространенными заболеваниями желудка являются гастрит, язва, полипоз и рак. Для диагностики этих заболеваний используются не только методы определения секреторной функции желудка, но и цитологическое исследование.
Материалом для цитологического исследования может служить содержимое желудка, полученное во время зондирования, промывные воды желудка, собранные различными способами (по А. Я. Альтгаузену, балонным методом, целенаправленным отсасыванием по Н. Н. Шиллер-Волковой), мазки-отпечатки с кусочков слизистой оболочки желудка, полученных с помощью биопсийных щипцов при гастрофиброскопии под контролем зрения.
Слущивание эпителиоцитов усиливается при применении механического раздражителя — зонда-баллона. При заболеваниях желудка его слизистая оболочка нередко покрыта толстым слоем слизи, которая препятствует процессу слущивания клеток. Путем предварительного введения в желудок муколитического фермента папаина или альфа-химотрипсина можно вызвать растворение слизистого барьера и таким образом создать благоприятные условия для максимального слущивания клеток эпителия слизистой оболочки желудка. В желудочном содержимом под влиянием кислой реакции за счет соляной и летучих (молочной, масляной и др.) кислот при застойных явлениях эпителиоциты видоизменяются и даже разрушаются. Особенно легко разрушаются нестойкие опухолевые клетки. Разбавление небольшого количества желудочного содержимого натощак промывными водами способствует сохранению структуры клеток, слущенных с поверхности опухоли.
Метод промывания желудка для диагностики рака желудка не получил широкого применения в практике, хотя дает положительные результаты в 70 % случаев.
При промывании желудка по А. Я. Альтгаузену больному вводят натощак в желудок толстый зонд с воронкой и извлекают содержимое в отдельную посуду. Не вынимая зонда, вводят через воронку 300 мл теплой воды и сразу же извлекают ее. Затем процедуру повторяют, используя другую посуду. После отстаивания в течение 1—2 ч жидкость над осадком сливают, а осадок помещают в чашку Петри. Металлическим шпателем и препаровальной иглой отбирают слизистые, кровянистые, плотноватые и другие частицы, из которых готовят препараты для микробиологического исследования.
В промывных водах отсутствуют пищевые массы, поэтому возможен наиболее полный отбор частиц для микроскопического исследования. При застойных явлениях в желудке, что нередко наблюдается при опухолях, необходимо для удаления пищи вечером накануне исследования промыть желудок. После этого до утреннего промывания больной пищу не принимает.
Хотя процесс получения промывных вод является трудоемким, он менее опасен, чем взятие для исследования микробиоптата, и имеет важное значение в диагностике злокачественных опухолей желудка.
Несколько сложнее баллонный способ получения промывных вод с помощью двойного гастродуоденального зонда. Один зонд предназначен для аспирации жидкости: в ротовой конец зонда вставляют шприц, а конец, расположенный в желудке, имеет дуоденальную оливу с более широкими отверстиями. Второй зонд имеет тонкостенный резиновый мешочек цилиндрической формы, помещенный в сеточку из шелковых нитей, ротовой конец зонда соединен с грушей для накачивания в баллон воздуха. Груша имеет клапан для выпускания воздуха.
Зонд, смоченный теплым изотоническим раствором натрия хлорида, вводят натощак. Сначала отсасывают все содержимое желудка и промывают его изотоническим раствором натрия хлорида. Затем воздухом надувают мешочек, и он перистальтическими движениями продвигается к привратнику. Далее воздух выпускают, зонд подтягивают к привратниковой пещере и вновь надувают резиновый мешочек. Такую процедуру повторяют пять раз на протяжении 30 мин, за это время несколько раз отсасывают содержимое желудка. После извлечения зонда его обмывают 200 мл изотонического раствора натрия хлорида. Смыв и жидкость центрифугируют в течение 30 мин при 1500 об/мин. Из осадка готовят препараты для цитологического исследования.
По методу Н. Н. Шиллер-Волковой, пробу из желудка получают путем целенаправленного отсасывания с места предполагаемого поражения, промывая необходимую область желудка небольшими порциями (20 мл) подогретого изотонического раствора натрия хлорида. Для этого используют дуоденальный зонд со специальной крупной оливой, имеющей параллельно расположенные продольные углубления, на дне которых находятся отверстия.
При замедленной эвакуации оставшуюся пищу удаляют накануне вечером путем тщательного промывания желудка. Утром натощак под контролем рентгеноскопии вводят зонд таким образом, чтобы его олива как можно больше приближалась к месту поражения. При этом больному в зависимости от локализации опухоли (на боку, спине, животе) придают наиболее удобное для исследования положение. После установки оливы на желаемом уровне присасывающими движениями шприца отсасывают жидкость и собирают ее в пробирку. При прекращении поступления жидкости через зонд вводят 20 мл подогретого изотонического раствора натрия хлорида, который тут же отсасывают. Промывание повторяют 3-5 раз, массируя переднюю брюшную стенку в месте расположения оливы.
В лаборатории промывную жидкость разливают тонким слоем по чашкам Петри для просмотра невооруженным глазом или через специальную лупу. Для микроскопического исследования отбирают наиболее плотные частицы, участки с прожилками крови. Отобрать и исследовать необходимо по возможности весь материал (10-12 процентов).
В нативных и окрашенных препаратах, приготовленных из промывных вод желудка, обнаруживаются различное количество лейкоцитов, эпителиоциты желудка, а при злокачественной опухоли — атипичные клетки. Данные микроскопического исследования в комплексе с результатами функциональных и клинических исследований позволяют установить характер патологического процесса.
Для диагностики заболеваний желудка используют также материал, полученный прицельно при гастрофиброскопии. Проводят в основном гистологическое исследование, цитологическую диагностику применяют при получении очень маленького кусочка слизистой оболочки желудка, непригодного для приготовления гистологического препарата, а также в тех случаях, если биоптат состоит из слизи, фибрина, детрита и разрозненных клеток эпителия. Сразу после выведения щипцов-чашечек, применяемых для биопсии, из канала гастрофиброскопа полученный материал с помощью иглы помещают на предметное стекло, готовят мазки-отпечатки, а затем опускают оставшийся кусочек ткани в формалин и направляют на гистологическое исследование.
При значительном поражении поверхности слизистой оболочки желудка рекомендуется брать материал для цитологического исследования путем соскоба с помощью нейлоновой щетки, однако недостатком этого способа является то, что основная масса клеток в полученном материале разрушена.
Источник
