Раздел «Культуры животных клеток и тканей»
Гибридизация животных клеток
Методы создания химер
1. Агрегационный — был предложен практически одновременно и независимо друг от друга Тарковским в Варшаве и Минц в Филадельфии (1961-1962 гг.).
Из матки беременных самок-докторов извлекают зародыши, достигшие стадии 8 бластомеров. Бластомеры, полученные от двух животных с различными генотипами (например, от мышей с белой черной окраской шерсти) помещают в условия, способствующие их агрегации и образованию 16-ти клеточного зародыша. Такие составные зародыши развиваются in vitro до стадии бластоцисты, после чего их вводят в матку приемной матери, у которой предварительно вызывают ложную беременность путем введения соответствующих гормонов. В результате получаются аллофенные мышата. Когда у мышонка появляется шерсть, окраска у него оказывается не белой или черной, как у родителей, а смешанной, с чередующимися черными и белыми пятнами или полосами. Это доказывает, что ткани животных-химер мозаичны, т.е. состоят из «белых» и «черных» клеток.
Внутренние ткани таких животных, естественно, также мозаичны, хотя это проявляется не так очевидно, как в случае окраски шерсти. Различия могут касаться белков, выполняющих ферментативную функцию: они могут катализировать одни и те же реакции у мышей-родителей, нуждаться в одних и тех же кофакторах, но при этом быть не идентичными, хотя и сходными. Такие белки называются изоферментами, и их можно разделить с помощью электрофореза. Агрегационные химеры можно получать не только между двумя эмбрионами, но и между различным числом изолированных бластомеров или отдельными частями эмбрионов. Масса химерных эмбрионов не больше обычной и подвержена действию механизмов эмбриональной регуляции. Преимущество метода — не требует вмешательства микрохирургической техники, поэтому широко используется в эмбриогенетике.
2. Инъекционный — был разработан Р. Гарднером в 1968 г.
Используются эмбрионы на стадии бластоцисты. Бластоцисту фиксируют и, используя микроманипуляторы, вводят путем инъекции клетки внутриклеточной массы бластоцисты доноров в бластоцель эмбриона — рецепиента. Этим методом можно инъецировать не только внутриклеточную массу ранних эмбрионов, но и более дифференцированные клетки.
Инъекционный метод нашел применение при получении межвидовых химер. Первые межвидовые химеры были получены между двумя ближайшими видами мышей, которые обычно не скрещиваются: M. muskulus и M. caroli. Причем было отмечено, что химерные эмбрионы, полученные инъекционным методом, нормально развивались только при пересадке их в матку того вида, чья бластоциста была использована в качестве рецепиента. Например, в бластоцисту M. muskulus вводили внутриклеточную массу эмбриона M. caroli. Полученные химеры имплантировались в матку M. muskulus и благополучно развивались там, а в организме M. caroli погибали спустя две недели.
Межвидовые химерные зародыши между мышью и крысой путем агрегации были получены только в 70-х годах. Первые химерные животные были получены только в 1973 году Р. Гарднером и М. Джонсоном. Успех этих экспериментов позволил приступить в 80-х годах к созданию химерных сельскохозяйственных животных. Выяснилось, что агрегационный метод неприемлем для получения химер крупного рогатого скота. Химер телят Bos indicus + Bos taurus удалось получить только инъекционным методом.
В 1984 году были получены межвидовые химеры между овцой и козой — овцекозы, причем практически одновременно в Англии и ФРГ. Использовались оба метода. Половым путем овцы и козы не скрещиваются, так как имеют разный набор хромосом: коза 2n = 60, овца 2n = 54. В ФРГ в 1985 году были получены химерные телята после агрегации половинок 32-клеточных эмбрионов от коров швицкой (бурой) и голштино-фризской пород. В фенотипе химер сочетались обе масти — бурая и черно-пестрая.
Химерные животные не передают потомкам генетическую мозаичность. У них происходит расщепление, как у гетерозигот, поэтому ценные генетические комбинации нарушаются. Но на протяжении 1 поколения хозяйственно ценные признаки поддерживаются, поэтому можно, например, сочетать как молочную, так и мясную продуктивность.
Химерность довольно часто встречается и у растений. Как правило, она существует в скрытом виде, не проявляясь фенотипически. Однако пластидные мутации позволяют увидеть ее непосредственно на растении. Чаще всего спонтанная химерность наблюдается у гетерозиготных растений. Различные клеточные типы четко разделены в пространстве, образуя отдельные слои при делении апикальных меристем. Примером видимой мутации хлоропластов и образования химерного растения является пестролистность или появление секторов ткани другого цвета.
Источник
Биотехнология в животноводстве
шат составляет 3-6% от числа трансплантированных агрегационных бла — стоцист .
При создании химер сельскохозяйственных животных классический метод был несколько модифицирован . Химерные морулы или бластоци — сты сельскохозяйсвенных животных помещают в прозрачную зону и агар . При этом исходят из следующего правила . Если общее число объединяе — мых бластомеров , происходящих от разных генотипов , не превышает раз — меров обычного эмбриона , их помещают в пустую зону пеллюцида неза — висимо от вида сельскохозяйственных животных . Если агрегационный эмбрион превосходит в 3-4 раза по размерам нормальный эмбрион , его заключают в прозрачную зону от полностью развиваюшейся бластоцисты ; если в 4-8 раз , то его упаковывают в заранее заготовленную полость в ага — ровомцилиндре .
Все композиции бластомеров , инъецируемые в пустую прозрачную оболочку заливают в агар и заключают в малый агаровый цилиндр , поме — щенный в агаровый цилиндр большего размера . В таком виде агаровые
цилиндры с агрегационными эмбрионами вводят в яйцевод гормонально подготовленного промежуточного реципиента , где агрегационный эмбри — он развивается до химерной бластоцисты . Химерные бластоцисты извле — кают из яйцевода животного – посредника , освобождают от остатков агара и пересаживают реципиенту .
2.Инъекционный метод . Метод более трудоемок , но с использова — нием микроманипуляционной техники и микрохирургического вмеша — тельства позволяет решать проблемы , которые неразрешимы на агрегаци — онных химерах . Он предложен Р . Гарднером .
Суть этого метода заключается в введении клеток внутренней клеточ — ной массы бластоцисты донора в бластоцель эмбриона реципиента . Бла — стоцисту удерживают всасывающей пипеткой и , используя микроманипу — ляторы , трофобласт разрезают вместе с зоной пеллюцида и растягивают двумя стеклянными иглами . В образованное в трофобласте отверстие вво — дят третью иглу и с ее помощью отверстие расширяют , придавая тре — угольную форму , через которое инъецируют внутреннюю клеточную мас — су донорского зародыша в бластоцель эмбриона реципиента . С помощью этого метода можно инъецировать не только внутреннюю клеточную мас — су ( ВКМ ) ранних эмбрионов , но и более дифференцированные клетки . По — лученную химерную бластоцисту , как и при агрегационном методе , трансплантируют в матку мыши , находящейся на соответствующей ста — дии ложной беременности . Микроманипуляции проводят в капле стан —
дартной питательной среды под вазелиновым маслом в специальной мик — рокамере или на термостатноммикроскопе .
Инъекционный метод получения химер используют в тех случаях , ко — гда агрегационный метод на дает результатов . Например , у некоторых ви — дов животных после удаления зоны пеллюцида дальнейшего эмбриональ — ногоразвития непроисходит .
Этот метод приемлем для создания межвидовых химер , так как разная
природа наружного слоя трофобласта может служить препятствием для имплантации химерной бластоцисты в матке реципиента . Инъекционный метод получения химерных животных позволяет выяснить , когда проис —
ходит утрачивание тотипотентных свойств бластомерами развивающегося эмбрионамлекопитающих .
6.2.Маркеры химер . Ценность химер для изучения реализации гене — тической информации в процессе онтогенеза во многом определяется на — личием маркеров . У млекопитающих клетки в онтогенезе мигрируют и взаимодействуют друг с другом , что создает сложности при анализе кле — точных родословных .
Известно , что у здорового животного каждая клетка окружена клетка — ми идентичного генотипа , поэтому вопросы клеточной автономии решать очень трудно . Однако , при изучении химер можно выяснить детермини —
руется ли фенотип клетки собственным ее генотипом или же окружением соседних клеток . Поэтому метод экспериментальных химер может слу — жить инструментом для изучения экспрессии генов и генетического кон — троля клеточных взаимодействий в онтогенезе . Так , на химерах было обоснована клональная теория развития . Суть ее состоит в том , что любой специализированный тип клеток состоит из определенного числа клеточ — ных клонов , образующихся в результате размножения родоначальных кле — ток . Для идентификации химер или отдельных компонентов химеры при — меняют разнообразные маркеры .
Генетические клеточные маркеры . С помощью генетических кле —
точных маркеров можно идентифицировать клетки разного генотипа , из которых сформированы ткани химер .
В 80- е годы стали использовать эффекты мутантных генов , нарушаю — щих строение , функцию или миграцию определенных клеточных систем . Такие маркеры , локализующиеся в клетке , обладают цитоавтономностью , внутриклеточной локализацией , имеют несколько наследственно детер —
минированных вариантов и легко выявляются на гистологических срезах без сложной обработки . Наиболее соответствует предъявляемым требова —
ниям пигмент меланин , локализованный в волосяном покрове и клетках ретинального пигментного эпителия . Мутантный ген , вызывающий в го — мозиготном состоянии нарушение или блокаду синтеза меланина мелано — цитами , широко используется в качестве генетического маркера в экспе — риментах с химерами млекопитающих , особенно лабораторных живот — ных .
В роли генетических маркеров выступают антигены , генетическое раз — нообразие которых огромно , но их трудно выявить . С помощью иммуно — логических методов обнаружено множество антигенов . Так , у многих ви —
дов млекопитающих были идентифицированы главные антигены или главныегенетические локусыгистосовместимости .
Антигены этого главного комплекса изучены наиболее полно у мы — шей . Система гистосовместимости у мышей , названная генами Н -2 , вклю — чает два локуса более чем с двадцатью аллелями 17 хромосомы . Установ — лено , что гены Н -2 комплекса экспрессируются цитоавтономно на ранних стадиях во всех клетках эмбриона мыши . Поэтому Н -2 антигены призна — ны наиболее надежными маркерами клеточных популяций ухимер .
В качестве генетических клеточных маркеров используют также хро — мосомные различия между линиями или популяциями клеток , составля — ющими ткани химер . Среди хромосомных маркеров особо выделяют раз — личные типы хромосомных транслокаций , отдельные участки хромосом , определяемые методом дифференциальной окраски , количество перицен — трическогохроматина и половые хромосомы .
Однако , хромосомные маркеры имеют недостатки . Хромосомный ана — лиз возможен только для делящихся клеток и не дает информации о про — странственном распределении клеток в тканях химер .
Биохимические маркеры . Для идентификации клеточных популяций у химер используют биохимические маркеры : гемоглобин, сывороточ-
ные белки, ферменты. Особое место отведено изоферментам (изоцитратдегидрогеназа, глюкозофосфатизомераза и фосфоглицераткиназа ),
выделяемым с помощьюэлектрофореза.
Фенотипические меркеры . При создании химер сельскохозяйствен — ных животных , происходящих от фенотипически контрастных пород или видов , широко используют морфологические маркеры . Породы и особен —
но виды сельскохозяйственных животных выделяют по качественным или количественным признакам . В большинстве случаев в животноводстве по — роды классифицированы по масти , экстерьеру , направлению продуктив — ности и другим признакам . Наиболее часто у межпородных и межвидовых
генетических химер , полученных от контрастных форм , для идентифика — ции химер используют простые морфологические признаки , имеющие моногенную или олигогенную природу .
6.3.Межвидовые и межпородные химеры . Получение химер лабо-
раторных млекопитающих . Первыми созданными и генетически иден —
тифицированными химерами были химеры мышей линий окраски агути и черной . Химеры были крапчатыми , причем агути ( кремовый цвет ) и чер — ный цвет дали окрас , не встречающийся ни у одного вида мышей .
Было доказано , что химеризм может проявляться не только по всему волосяному покрову , но и в отдельных волосах . Так , у химер из пигменти —
рованной и непигментированной линий одни волосы были полностью пигментированы , другие лишены пигмента , а третьи оказались пятнисты — ми . Для шерсти химер агути ↔ не агути выявлена различная степень про — межуточной экспрессии генов , соответствующая , по — видимому , волося — нымфолликулам сразличной долейсоставляющихгенотипов .
Если химеризм затрагивает несколько локусов , влияющих на окраску шерсти , то при образовании пигмента возникают фенотипические взаимо — действия клеточных популяций . При этом синтез пигмента определяется генотипом меланоцитов , а распределение пигмента в волосе зависит от клеток волосяного фолликула .
В последние годы большое внимание уделяется получению межвидо — вых и межпородных химер млекопитающих . Это особенно важно в селек — ции сельскохозяйственных животных , так как межвидовые и межпород — ные химеры в одном организме могут сочетать разные хозяйственно важ — ные признаки .
Впервые межвидовые химеры мышей были получены инъекционным и агрегационным методами . Использовали два близких вида мышей – ла — бораторную и дикую азиатскую . Эти виды , имея сходство по размерам те — ла и продолжительности эмбрионального периода , между собой не скре — щиваются . Химеры были созданы путем инъекции внутренней клеточной массы дикой азиатской мыши в бластоцисты лабораторной мыши с по —
следующей трансплантацией химерных бластоцист в матку реципиентов лабораторной мыши . Анализ химерных эмбрионов показал отсутствие иммунологической несовместимости клеток разных видов мышей , а раз — витие межвидовых и внутривидовых химер было одинаковым .
Другой результат получен , когда проводили реципрокную инъекцию внутренней клеточной массы с пересадкой химерной бластоцисты реци — пиенту лабораторной мыши . В этом случае химерные эмбрионы погибали
после имплантации . Однако , у таких же межвидовых химер , полученных агрегационным методом , эмбриональное развитие проходило нормально . Следовательно , бластоцисты мыши дикого азиатского вида не развивают — ся в матке лабораторной мыши , в то же время включение в химерный трофобласт клеток с генотипом лабораторной мыши обеспечивает нор — мальное развитие агрегационных химер . Было доказано , что клетки роди —
телей обоих видов мыши принимают участие в формировании химерного трофобласта .
Получение агрегационных внутривидовых химер – мышей позволило установить , что организм химеры включает генотипически различные по — пуляции клеток , то есть , представляет мозаику . Это позволяет анализиро — вать механизм действия различных генов , особенно мутантных , в процес — се онтогенеза млекопитающих .
Установлено , что чем позже стадия развития эмбриона , от которого взята внутренняя клеточная масса для инъекции в бластоцель , тем меньше вероятность получения химер , и на основе инъекционного метода были получены новые данные для раскрытия механизма дифференцировки кле — ток .
Интересно отметить , что при инъекции в бластоцисту внутреннюю клеточную массу тератокарциномы , ее клетки в случае интеграции в эм — брион утрачивают раковые признаки . Следовательно , опухолевые клетки под влиянием нормальных эмбриональных клеток превращаются в нор — мальные . Эти данные имеют большое значение при получении химерных животных , устойчивых к опухолевым заболеваниям .
Используя метод агрегации , были получены химерные эмбрионы раз — личных видов грызунов : мыши и крысы , мыши и рыжей полевки . Такие
межвидовые агрегационные химеры грызунов нормально развивались до стадии бластоцисты , а в составе внутренней клеточной массы и трофобла — ста были выделены клетки обоих видов . Можно полагать , что химерный
трофобласт препятствует имплантации бластоцисты в матку реципиентов мыши или крысы . Так , пересаженные химерные бластоцисты в матку мы — ши или в маткукрысы погибали до имплантации или же сразупосле нее .
Химерные эмбрионы мыши и крысы были получены и методом инъ — екции . В бластоцисту мыши была инъецирована внутренняя клеточная масса крысы , и химерная бластоциста была пересажена ложно беремен — ной мыши . Из 56 трансплантированных в матку мыши химерных бласто — цист было получено 28 эмбрионов , развивающихся до 7.5 – 9.5 суточного возраста . У пяти эмбрионов в эктодерме были выявлены генотипы как
крысиных , так и мышиных клеток . В дальнейшем происходит селекция клеток мышиного генотипа . В тканях новорожденных химер клеток кры — синогогенотипа не обнаружено .
Электронно — микроскопический анализ клеток тканей химер мыши и крысы показал , что в химерной бластоцисте в состав внутренней клеточ — ной массы и трофобласта были включены производные клетки обоих эм — брионов . Однако , генотип мышиных клеток принимает более активное уча — стие в создании внутренней клеточной массы , чем генотип крысиных кле — ток .
Создание химер сельскохозяйственных животных . Успехи , достиг —
нутые в разработке методов создания генетических химер лабораторных млекопитающих , позволили практически подойти к получению химер сельскохозяйственных животных .
В 1974 г . в Кембридже были получены генетические химеры овцы , происходящие от четырех родителей . Из трех явных химер все были сам — цами , причем два оказались с ХХ / Х V – хромосомами и один с XV/XV . Вы — ход химерных овец был очень низкий . Лишь три из 33 потомков имели признаки обеих родительских форм .
В 1983 г . были получены первые межвидовые химеры овцы и козы . Известно , что овца и коза не относятся к близким видам и между собой не скрещиваются . Пересаженные эмбрионы от одного вида другому в боль — шинстве случаев погибают . Для защиты трансплантированных химерных эмбрионов от иммунологической реакции реципиента был применен ме —
тод создания трофобласта химерного эмбриона только из клеток вида ре — ципиента , а сами эмбрионы были заключеныв агар .
Для получения химер овцы и козы использовали как инъекционный , так и агрегационный методы . При агрегационном методе из четырех – или восьмиклеточных эмбрионов овцы и козы извлекали бластомеры , которые помещали в пустую зону пеллюцида или заключали в агар и культивиро — вали в лигатированных яйцеводах овцы в течение 5-6 суток . Нормально развитые химерные бластоцисты пересаживали в матку овцы или козы .
При инъекционном методе внутреннюю клеточную массу с окружаю — щими клетками трофобласта выделяли из бластоцист овцы и инъецирова — ли в бластоцисту козы или наоборот . Реконструированные бластоцисты трансплантировали соответственно в матку козы или овцы . В итоге было получено 26 потомков , восемь из которых (30.8%) оказались химерами . В результате применения агрегационного и инъекционного методов одно — компонентных животных – овец было в четыре раза больше , чем коз . Эм —
брионы вне зависимости от видовой принадлежности нормально прохо — дили развитие в матке самки другого вида животного . Тот факт , что из всех полученных потомков лишь 30,8% были истинными межвидовыми химерами , а остальные однокомпонентными , одного вида с реципиентом ,
свидетельствует о происходящей в процессе эмбриогенеза перестройке их генотипа в сторонувида реципиента .
У большинства межвидовых химер овцы и козы выявлена мозаичность только волосяного покрова , а клетки крови соответствовали овечьим . У химерных животных шерсть – смесь волос исходных видов , рога по строению – как у козы , но закручены , как у барана , а экстерьер соответст — вовал одномуиз родительских видов .
Однаагрегационная – межвидовая химера , фенотипически похожая на козу , была получена в результате агрегатирования трех козьих эмбрионов и одного овечьего . Кровь этой химеры с шерстным покровом из козьих и овечьих волос содержала козьи и овечьи эритроциты и лимфоциты . Одна — ко к 3- месячному возрасту соотношение форменных элементов крови су — щественноизменилось в сторонупреобладания клеток овечьеготипа .
Анализ результатов исследования показывает , что у межвидовых хи —
мер овцы и козы происходит положительная селекция клеточных клонов овечьего генотипа , что отмечалось у химер крыса ↔ мышь . Интересен факт рождения ягненка от козы и козленка от овцы , что не наблюдается при межвидовых пересадках эмбрионов этих видов . Полученные одно — компонентные животные развивались изинъекционных химер .
В США от инъекции внутренней клеточной массы бластоцисты коз в бластоцисту овец были получены овечье – козьи химеры . 22 химерные бластоцисты хирургически трансплантировали 12 овцам – реципиентам . От 9 суягных овец было получено 13 потомков . Поэлектрофоретическому анализу крови и кариотипу 2 из них отнесены к межвидовым овечье — ко — зьим химерам , 10 животных – к овце , 1 – к козе .
В 1985 г . в США получены межпородные химеры овцы – между по — родами рамбулье и финский ландрас . Из 15 внутривидовых химер у пяти по признакам антигенов эритроцитов , гемоглобина и трансферринов кро — ви был подтвержден генетический химеризм .
В начале 80- х годов были проведены эксперименты по получению химер подвидов крупного рогатого скота ( европейского и зебуевидного ). Применяли агрегационный метод , для которого брали раннюю морулу . Извлеченные морулы обрабатывали проназой с целью удаления прозрач —
ной оболочки . Полученный объединенный агрегат бластомеров кратко —
временно культивировали in vitro. Однако , химерные морулы , пересажен — ные в маткукоровам – реципиентам , погибали .
В дальнейшем инъецировали внутреннюю клеточную массу бласто — цисты скота европейского подвида в бластоцель зебуевидного скота . В результате получили семь телят , среди которых один был идентифициро — ван как четырехродительский химерный теленок . Фенотипически он не отличался от сверстников , но при идентификации типа крови у него был выявлен эритроцитарный антиген , типичный для скота европейского под — вида . Авторы предполагают , что химеризм мог быть и у других телят , од — нако из — за отсутствия соответствующих маркеров им не удалось точно установить этот факт .
В 1982 г . в Германии была проведена инъекция маркированных по хромосомам клеток бластоцист в обычную бластоцисту коровы и после —
дующая пересадка корове – реципиенту химерной зиготы , что привела к рождению химерной телочки . У четырех родителей , реципиента и химер — ной телочки были проведены цитогенетический и биохимический анали — зы . У химерной телочки по ряду признаков подтвержден генетический химеризм .
Позднее в ФРГ (1985) были получены химерные телята после агрега — ции половинок 32 – клеточных эмбрионов от коров контрастных пород – швицкой ( бурой ) и голштино — фризской . Из семи родившихся телят у пяти отсутствовали признаки химеризма , а у двух в фенотипе сочеталась харак — терная масть исходных пород – бурая и черно — пестрая .
В ВИЖ — е инъекционным методом был получен химерный бычок чер — но — пестрой и красной пород , который в фенотипе сочетал черно — пеструю масть с красными пятнами . Кроме этого , химерные эмбрионы были скон — струированы путем деления на части бластоцист айрширской , голштин — ской , голландской и черно — пестрой пород скота . Исходные породы были контрастными по масти . По схеме опыта красно — пеструю айрширскую корову осеменяли спермой красно — пестрого голшитинского быка , а черно — пеструюкорову – спермой голландского быка .
От каждого из двух доноров было получено по 6 эмбрионов , которые делили на две части , и затем проводили их агрегацию . Было получено 12 эмбрионов – химер от четырех пород . После трансплантации родились шесть химерных телят , в том числе один бычок . Для подтверждения хи — меризма в качестве теста использовали масть , группы крови , полимор — физм трансферрина , амилазы , гемоглобина и активность ряда ферментов . Было установлено , что один бычок и одна телочка оказались химерными
по масти . Остальные телочки имели химеризм по типам белков и биохи — мическим показателям . По группам крови все химеры являлись полными сибсами подвум матерям и двум отцам .
У химер чередовались черные , белые и красные пятна по корпусу . Для изучения типа наследования масти спермой химерного быка были осеме — нены 78 телок черно — пестрой породы , от которых было получено 57 по — томков . Все потомки имели красно — пеструю или черно — пеструю масть и не было ни одного потомка с трехцветной мастью . Следовательно , в гено — типе химер присутствуют гены , контролирующие либо черно — пеструю , либокрасно — пеструю масть . Вследствие этого химерный бык не передавал по наследствусвоим потомкам химеризм по масти .
Таким образом , проведенные эксперименты показали возможность получения генетических химер в животноводстве . Однако , в практике жи — вотноводства химеры пока не находят применения .
Химерные животные не передают потомкам характерную для них ге — нетическую мозаичность . Подобно гетерозиготным или гибридным жи — вотным у потомков происходит расщепление , в результате чего наруша — ются ценные генетические комбинации . Хотя химерные животные под —
держивают хозяйственно важные признаки лишь на протяжении одного поколения , в разведении крупного рогатого скота они могут представлять большой практический интерес . Например , можно создать химерных жи — вотных , сочетающих такие признаки , как молочная и мясная продуктив — ность , которые являются антагонистами и несовместимы в одном орга — низме . Создание инъекционных химер путем введения в эмбрион опреде —
ленных линий клеток позволит улучшить иммунную систему и повысить резистентность к рядуболезней .
Метод получения экспериментальных химер представляет большой интерес для создания линий ( клонов ) животных путем партеногенеза . Эм — брионы млекопитающих , развивающиеся из партеногенетически активи — рованных яйцеклеток , погибают . Однако при агрегации с биологически полноценными эмбрионами клетки ранних партеногенетических зароды — шей оказывают влияние на построение тканей химерного животного . Если из партеногенетических клонов клеток будут формироваться гаметы хи — мерной особи , то ее генотип можно закрепить в следующем поколении .
Контрольные вопросы: 1.Чтоозначает термин «химера»?
2.Чтотакое первичный и вторичный химеризм?
3.С какой целью создают химер?
4.Какие методыполучения химер Вы знаете?
5.Какие маркеры применяют для индентификации химер или их от.дельных компонентов?
6.Расскажитео получении химер лабораторных млекопитающих. 7.Расскаж.ите о создании химер сельскохозяйственных животных.
ГЛАВА7. ОПЛОДОТВОРЕНИЕ ЯЙЦЕКЛЕТОКВНЕ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНОГО
7.1.Культивирование ооцитов вне организма животного . Одним их
путей получения большого количества потомков от генетически ценных самок сельскохозяйственных животных , – оплодотворение ооцитов и куль — тивирование эмбрионов вне организма (in vitro). При традиционных мето — дах воспроизводства сельскохозяйственных животных самки продуциру — ют значительно меньшее число гамет , чем самцы . Так , общее число по — тенциальных , или незрелых , половых клеток у коровы составляет от 100 тыс . до 1 млн ., причем менее 0,01% из них овулируют из зрелых фоллику — лов яичника . Если учесть , что при интенсивном ведении молочного ското — водства продолжительность продуктивной жизни коровы в среднем сос — тавляет три — четыре отела , то от каждой коровы можно получить не более четырех телят . Максимальное использование генетического фонда яйце — клеток возможно лишь в условиях созревания и оплодотворения их in vitro.
Проблема созревания и оплодотворения ооцитов in vitro с последую — щим культивированием эмбрионов , их нехирургической пересадкой ре — ципиентам и получением многочисленногопотомства окончательно не ре — шена .
Оплодотворение in vivo созревших в яичнике ооцитов , если рассмат — ривать его изолированно от созревания ооцитов in vitro, имеет ограничен — ное применение для разведения сельскохозяйственных животных . В этом
случае в результате индукции суперовуляции хирургическим путем или при убое коровы можно получить единицы созревших in vivo полноцен — ных ооцитов . Лишь сочетанием оплодотворения созревших in vitro ооци — тов с последующей трансплантацией полученных эмбрионов можно су —
щественно повысить использование генетического потенциала женских гамет .
Источник
